Preparation of Cell-lines for Conditional Knockdown of Gene Expression and Measurement of the Knockdown Effects on E4orf4-Induced Cell Death

Functional inactivation of gene expression in mammalian cells is crucial for the study of the contribution of a protein of interest to various ...

Technion - Israel Institute of Technology

RR &#x5236;&#x5EA6;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E86;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x672A;&#x77E5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E0E; PP2A B55 &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF;&#x5728;&#x4E8E;&#x5B83;&#x80FD;&#x591F;&#x627E;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7531;&#x4F20;&#x7EDF;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;RR &#x56E0;&#x6B64;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x76F8;&#x8F85;&#x76F8;&#x6210;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x9274;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528; Ras &#x62DB;&#x8058;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6; PP2A B55 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

The RRS system facilitated the discovery of hitherto unknown interactions with the PP2A-B55 subunit. The advantages of the system lie in its ability to identify interactions that may not be detected by traditional yeast two-hybrid systems. The RRS can thus provide a complementary genetic approach to the identification of protein-protein interactions.

Using the Ras Recruitment System to identify PP2A-B55-interacting proteins.

Le syst&egrave;me d&#39;enregistrements de ressources a facilit&eacute; la d&eacute;couverte de l&#39;inconnu interactions avec la sous-unit&eacute; PP2A-B55. Les avantages du syst&egrave;me r&eacute;sident dans sa capacit&eacute; &agrave; identifier les interactions qui ne sont pas d&eacute;tect&eacute;es par les syst&egrave;mes de deux-hybride de levure traditionnelle. Les enregistrements de ressources peuvent ainsi fournir une approche compl&eacute;mentaire de g&eacute;n&eacute;tique &agrave; l&#39;identification d&#39;interactions prot&eacute;ine-prot&eacute;ine.

En utilisant le syst&egrave;me de recrutement de Ras pour identifier des prot&eacute;ines interagissant avec PP2A-B55.

Das RRS-System erleichtert die Entdeckung der bisher unbekannten Wechselwirkungen mit der PP2A-B55-Untereinheit. Die Vorteile des Systems liegen in ihrer F&auml;higkeit, Interaktionen zu identifizieren, die nicht durch traditionelle Hefe-zwei-Hybrid-Systeme nachgewiesen werden kann. Die RRS bieten somit einen erg&auml;nzenden genetischen Ansatz zur Identifizierung von Protein-Protein Interaktionen.

Verwenden die Ras-Rekrutierungssystem, PP2A-B55-Interaktion Proteine zu identifizieren.

Il sistema RRS ha facilitato la scoperta delle interazioni finora sconosciute con la subunit&agrave; PP2A-B55. I vantaggi del sistema si trovano nella sua capacit&agrave; di identificare le interazioni che non possono essere rilevate dai sistemi di due ibridi di lievito tradizionale. La RRS &egrave; in grado di fornire cos&igrave; un approccio genetico complementare per l&#39;identificazione delle interazioni proteina-proteina.

Utilizzando il sistema di reclutamento Ras per identificare le proteine interagenti PP2A-B55.

RR &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; PP2A B55 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x672A;&#x77E5;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x5F93;&#x6765;&#x9175;&#x6BCD; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RR &#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x3001;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ras &#x52DF;&#x96C6;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;PP2A B55 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RR &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; PP2A-B55 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xAE4C;&#xC9C0;&#xB294; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4;. &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810;&#xC740; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC9D3;&#xB9D0;. RR &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC644; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ras &#xCC44;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; PP2A B55 &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2DD;&#xBCC4;.

El sistema RRS facilit&oacute; el descubrimiento de las interacciones hasta ahora desconocidas con la subunidad PP2A-B55. Las ventajas del sistema radican en su capacidad para identificar las interacciones que no puedan ser detectadas por los sistemas de dos h&iacute;bridos de levadura tradicional. As&iacute;, los RR pueden proporcionar un enfoque gen&eacute;tico complementario a la identificaci&oacute;n de las interacciones prote&iacute;na-prote&iacute;na.

Utilizando el sistema de contrataci&oacute;n de Ras para identificar prote&iacute;nas PP2A-B55-interactuando.

&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53; E4 &#x5F00;&#x653E;&#x9605;&#x8BFB;&#x6846;&#x67B6; (E4orf4) 4 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x662F;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x4E24;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x5E76;&#x901A;&#x8FC7;&#x63A7;&#x5236;&#x526A;&#x63A5;&#x7684;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x665A;&#x671F;&#x5206;&#x6CCC;&#x53C2;&#x4E0E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;&#x5F53;&#x5355;&#x72EC;&#x8868;&#x793A;&#xFF0C;E4orf4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x7531;&#x5B9E;&#x65F6;&#x5B9A;&#x91CF; pcr &#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; MYC &#xFF08;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; c-Myc&#xFF09; &#x662F;&#x7F16;&#x7801;&#x540E;&#x7684; E4orf4 &#x8868;&#x8FBE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x65E9;&#x671F;&#x3002;&#x5176;&#x7ED3;&#x679C;&#x662F;&#xFF0C;Myc &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x51CF;&#x5C11; E4orf4 &#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x3002;MYC &#x4E0B;&#x8C03;&#x89C2;&#x5BDF;&#x4E24;&#x8005;&#x65F6; E4orf4 &#x8868;&#x793A;&#x5355;&#x72EC;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x3002;E4orf4 &#x964D;&#x4F4E;&#x4E86; MYC &#x8F6C;&#x5F55;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4F38;&#x957F;&#x6216; RNA &#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x8981;&#x6C42;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; MYC &#x7684; E4orf4 &#x4E0E; PP2A B55 &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A; Myc &#x8868;&#x8FBE;&#x6B64;&#x524D;&#x5DF2;&#x663E;&#x793A;&#x6291;&#x5236;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; Myc &#x7684; E4orf4 &#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x9AD8;&#x6548;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;

&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2; E4orf4 &#x75C5;&#x6BD2; MYC &#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E; PP2A B55 &#x4E9A;&#x57FA;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The adenovirus E4 open reading frame 4 (E4orf4) protein is a multifunctional viral regulator that is involved in the temporal regulation of viral gene expression by modulating cellular and viral genes at the transcription and translation levels and by controlling alternative splicing of adenoviral late mRNAs. When expressed individually, E4orf4 induces apoptosis in transformed cells. Using oligonucleotide microarray analysis, validated by quantitative real time PCR, we found that MYC (also known as c-Myc) is downregulated early after the induction of E4orf4 expression. As a result, Myc protein levels are reduced in E4orf4-expressing cells. MYC downregulation is observed both when E4orf4 is expressed individually and within the context of viral infection. E4orf4 reduces MYC transcription but does not affect transcriptional elongation or RNA stability. An interaction with the PP2A-B55 subunit is required for the downregulation of MYC by E4orf4. Since Myc overexpression was previously shown to inhibit adenovirus replication, the downregulation of Myc by E4orf4 would contribute to efficient virus infection.

Adenovirus E4orf4 protein downregulates MYC expression through interaction with the PP2A-B55 subunit.

L&#39;ad&eacute;novirus E4 open reading frame 4 (E4orf4) prot&eacute;ine est un d&eacute;tendeur multifonctions viral qui est impliqu&eacute; dans la r&eacute;gulation temporelle de l&#39;expression des g&egrave;nes viraux en modulant les niveaux de transcription et la traduction des g&egrave;nes virus et cellulaires et en contr&ocirc;lant l&#39;&eacute;pissage des ARNm fin ad&eacute;noviraux. Lorsqu&#39;elle est exprim&eacute;e individuellement, E4orf4 induit l&#39;apoptose dans les cellules transform&eacute;es. &Agrave; l&#39;aide d&#39;oligonucleotide microarray analysis, valid&eacute;s par PCR, quantitative en temps r&eacute;el, nous avons trouv&eacute; que MYC (&eacute;galement connu sous le nom de c-Myc) est diminu&eacute;e au d&eacute;but apr&egrave;s l&#39;induction de l&#39;expression E4orf4. En cons&eacute;quence, les taux de prot&eacute;ines Myc sont r&eacute;duits dans les cellules exprimant le E4orf4. MYC downregulation on observe les deux lorsque E4orf4 est exprim&eacute; individuellement et dans le contexte de l&#39;infection virale. E4orf4 r&eacute;duit la transcription MYC mais n&#39;affecte pas l&#39;&eacute;longation transcriptionnelle ou stabilit&eacute; RNA. Une interaction avec la sous-unit&eacute; PP2A-B55 est n&eacute;cessaire pour la r&eacute;gulation n&eacute;gative de MYC par E4orf4. &Eacute;tant donn&eacute; que la surexpression de Myc a d&eacute;j&agrave; &eacute;t&eacute; d&eacute;montr&eacute;e pour inhiber la r&eacute;plication de l&#39;ad&eacute;novirus, la r&eacute;gulation n&eacute;gative de Myc par E4orf4 contribuerait &agrave; l&#39;infection de virus efficace.

Ad&eacute;novirus E4orf4 primaire MYC expression de la prot&eacute;ine par l&#39;interaction avec la sous-unit&eacute; PP2A-B55.

Die Adenoviren E4 offene Frame 4 (E4orf4) zu lesen ist Protein multifunktionale virale Regulator, der bei der zeitlichen Regelung der viralen Genexpression durch Modulation der zellul&auml;ren und virale Gene auf der Transkription und &Uuml;bersetzung und durch alternatives Splei&szlig;en adenoviral sp&auml;ten mRNAs Kontrolle beteiligt ist. Wenn individuell ausgedr&uuml;ckt, induziert E4orf4 Apoptosis in den transformierten Zellen. Mit Oligonukleotid-Microarray-Analyse, validiert durch quantitative Real-Time PCR, fanden wir, dass MYC (auch bekannt als c-Myc) Downregulated fr&uuml;h nach der Induktion der E4orf4 Ausdruck ist. Infolgedessen werden die Myc-Protein-Ebene in E4orf4 Ausdr&uuml;cken Zellen reduziert. MYC Heraufregulation wird beide eingehalten, wenn E4orf4 individuell und im Rahmen einer Virusinfektion ausgedr&uuml;ckt wird. E4orf4 reduziert MYC Transkription aber hat keine Auswirkungen auf die transkriptionelle Dehnung oder RNA-Stabilit&auml;t. Eine Interaktion mit der PP2A-B55-Untereinheit ist erforderlich f&uuml;r das Medikament von MYC durch E4orf4. Da Myc &Uuml;berexpression zuvor gezeigt wurde, Adenovirus-Replikation zu hemmen, w&uuml;rde das Medikament von Myc von E4orf4 zur effizienten Virusinfektion beitragen.

Adenovirus E4orf4 Downregulates MYC Proteinexpression durch Interaktion mit der PP2A-B55-Untereinheit.

Adenovirus E4 open reading frame 4 (E4orf4) proteine sono un regolatore multifunzionale virale che &egrave; coinvolto nella regolazione temporale dell&#39;espressione del gene virale modulando geni cellulari e virali a livello di trascrizione e traduzione e controllando splicing alternativo dei mRNAs tardo adenovirali. Quando espressa individualmente, E4orf4 induce apoptosi nelle cellule trasformate. Utilizzando l&#39;analisi di microarray oligonucleotidici, convalidato da quantitative real time PCR, abbiamo trovato che MYC (noto anche come c-Myc) &egrave; downregolata presto dopo l&#39;induzione dell&#39;espressione di E4orf4. Di conseguenza, i livelli di proteina Myc sono ridotti nelle cellule che esprimono E4orf4. Downregulation MYC &egrave; osservata sia quando E4orf4 &egrave; espressa individualmente e all&#39;interno del contesto dell&#39;infezione virale. E4orf4 riduce la trascrizione MYC ma non influisce sul allungamento trascrizionale o RNA stabilit&agrave;. Un&#39;interazione con la subunit&agrave; PP2A-B55 &egrave; richiesta per il downregulation di MYC da E4orf4. Poich&eacute; la sovraespressione di Myc precedentemente &egrave; stato indicato per inibire la replicazione dell&#39;adenovirus, il downregulation di Myc da E4orf4 contribuirebbe a infezione da virus efficiente.

Adenovirus E4orf4 sottoregola MYC espressione della proteina attraverso l&#39;interazione con la subunit&agrave; PP2A-B55.

&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0; 4 (E4orf4) &#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; E4 &#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3084;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x5909;&#x8ABF;&#x3068;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x5F8C;&#x534A; Mrna &#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30E9;&#x30EB; &#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x8868;&#x3059;&#x3068;&#x3001;E4orf4 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; &#x30DB;&#x30FC;&#x30E0;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; PCR&#x3001;&#x691C;&#x8A3C;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; MYC &#xFF08;&#x5225;&#x540D; C-myc) downregulated E4orf4 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x8A98;&#x5C0E;&#x5F8C;&#x65E9;&#x671F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;Myc &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; E4orf4 &#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x524A;&#x6E1B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;E4orf4 &#x306F;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x304D; MYC &#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4E21;&#x65B9;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;E4orf4 &#x306F;&#x3001;MYC &#x8EE2;&#x5199;&#x306F;&#x6E1B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x4F38;&#x9577;&#x307E;&#x305F;&#x306F; RNA &#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;PP2A B55 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;MYC &#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; E4orf4 &#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Myc &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x4EE5;&#x524D;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x7981;&#x3058;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306E;&#x3067;&#x3001;E4orf4 &#x3067; Myc &#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3057;&#x3087;&#x3046;&#x3002;

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; E4orf4 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F; MYC &#x5F0F; PP2A B55 &#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3002;

&#xC544; &#xB370; &#xB178;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E4 &#xC624;&#xD508; &#xD504;&#xB808;&#xC784; 4 (E4orf4)&#xB97C; &#xC77D;&#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xBC88;&#xC5ED; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xC870; &#xD558; &#xC5EC; &#xACE0; adenoviral &#xB2A6;&#xC740; Mrnas&#xC758; &#xB300;&#xCCB4; &#xC811;&#xD569; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xADDC;&#xC815; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xBA74; E4orf4 &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; apoptosis&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC591;&#xC774; &#xB9CE;&#xC740; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR, &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; oligonucleotide microarray &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC; MYC (c Myc) downregulated E4orf4 &#xC2DD;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD6C4; &#xC77C;&#xCC0D;. &#xADF8; &#xACB0;&#xACFC;, Myc &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB808;&#xBCA8; &#xC140; E4orf4 &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. MYC downregulation&#xB294; e4orf4&#xC740; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBAA8;&#xB450; &#xAD00;&#xCC30; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. E4orf4 MYC &#xC804;&#xC0AC; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4E4;&#xC9C0;&#xB9CC; transcriptional &#xC2E0;&#xC7A5; &#xB610;&#xB294; RNA &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PP2A-B55 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; e4orf4&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; MYC&#xC758; downregulation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;. Myc overexpression &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC92C;&#xB358;, &#xC774;&#xD6C4; downregulation e4orf4&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Myc&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E4orf4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; PP2A B55 &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; downregulates MYC &#xC2DD;.

El adenovirus E4 abierto leyendo el cap&iacute;tulo 4 (E4orf4) prote&iacute;na es un regulador viral multifuncional que participa en la regulaci&oacute;n temporal de la expresi&oacute;n g&eacute;nica viral modulando genes celulares y virales en los niveles de transcripci&oacute;n y traducci&oacute;n y controlando el empalme alternativo de mRNAs finales adenoviral. Cuando se expresa individualmente, E4orf4 induce apoptosis en las c&eacute;lulas transformadas. Usando an&aacute;lisis de microarrays de oligonucle&oacute;tidos, validado por PCR cuantitativa en tiempo real se encontr&oacute; que MYC (tambi&eacute;n conocido como c-Myc) es regulada temprano despu&eacute;s de la inducci&oacute;n de la expresi&oacute;n de E4orf4. Como resultado, se reducen los niveles de la prote&iacute;na Myc en c&eacute;lulas de E4orf4-expresi&oacute;n. MYC downregulation ambos se observa cuando E4orf4 se expresa individualmente y en el contexto de la infecci&oacute;n viral. E4orf4 reduce la transcripci&oacute;n de MYC pero no afecta a la elongaci&oacute;n transcripcional o estabilidad de RNA. Una interacci&oacute;n con la subunidad PP2A-B55 es necesaria para la regulaci&oacute;n a la baja de MYC por E4orf4. Puesto que la sobreexpresi&oacute;n de Myc previamente fue demostrada para inhibir la replicaci&oacute;n de adenovirus, la regulaci&oacute;n a la baja de Myc por E4orf4 contribuir&iacute;a a la infecci&oacute;n del virus eficiente.

Adenovirus E4orf4 algo MYC expresi&oacute;n de la prote&iacute;na a trav&eacute;s de la interacci&oacute;n con la subunidad PP2A-B55.

E4 &#x5F00;&#x653E;&#x8BFB;&#x6846; 4 (E4orf4) &#x86CB;&#x767D;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x89C4;&#x8303;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x548C;&#x5355;&#x72EC;&#x8868;&#x793A;&#x65F6;&#x5B83;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x975E;&#x7ECF;&#x5178;&#x8F6C;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; E4orf4 &#x5C06;&#x4E0E; ATP &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x91CD;&#x5851;&#x56E0;&#x5B50;&#x7531;&#x975E;&#x8517;&#x7CD6;&#x53D1;&#x9175;-2 h (SNF2h) ATPase &#x548C; Acf1 &#x8C03;&#x8282;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684; ACF &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;E4orf4 &#x4E3A;&#x76EE;&#x6807;&#x86CB;&#x767D;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; 2A (PP2A&#xFF09; &#x8FD9;&#x590D;&#x6742;&#x548C;&#x6709;&#x5173;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x3002;SNF2h &#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x6897;&#x963B;&#x6291;&#x5236; E4orf4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x800C;&#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F; Acf1 &#x7ED3;&#x679C;&#x5728;&#x589E;&#x5F3A; E4orf4 &#x81F4;&#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x548C;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; Acf1 &#x8868;&#x8FBE;&#x6291;&#x5236; E4orf4 &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x5411;&#x4E0B;&#x8C03;&#x65E9;&#x671F;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x2477; Acf1 &#x540C;&#x6E90;&#xFF0C;WSTF&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; E4orf4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; E4orf4 PP2A &#x590D;&#x6742;&#x6291;&#x5236; ACF &#x548C;&#x4FBF;&#x5229;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x542B;&#x6709; SNF2h &#x7684;&#x914D;&#x5408;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982; WSTF SNF2h &#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x91CD;&#x6784;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6709;&#x6240;&#x52A0;&#x5F3A;&#x3002;&#x9020;&#x6210;&#x4EA4;&#x6362;&#x673A;&#x5728;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x91CD;&#x5851;&#x786E;&#x5B9A;&#x751F;&#x547D;&#x4E0E;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x671F;&#x95F4;&#x8D21;&#x732E; E4orf4 &#x51FD;&#x6570;&#x3002;

E4orf4 &#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x76EE;&#x6807; PP2A &#x5230;&#x6D3B;&#x6027;&#x78B3;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x91CD;&#x5851;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x901A;&#x8FC7; SNF2h &#x5305;&#x542B;&#x7269;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

The adenovirus E4 open-reading-frame 4 (E4orf4) protein regulates the progression of viral infection and when expressed individually it induces non-classical apoptosis in transformed cells. Here we show that E4orf4 associates with the ATP-dependent chromatin-remodeling factor ACF that consists of a sucrose non fermenting-2h (SNF2h) ATPase and an Acf1 regulatory subunit. Furthermore, E4orf4 targets protein phosphatase 2A (PP2A) to this complex and to chromatin. Obstruction of SNF2h activity inhibits E4orf4-induced cell death, whereas knockdown of Acf1 results in enhanced E4orf4-induced toxicity in both mammalian and yeast cells, and Acf1 overexpression inhibits E4orf4's ability to downregulate early adenovirus gene expression in the context of viral infection. Knockdown of the Acf1 homolog, WSTF, inhibits E4orf4-induced cell death. Based on these results we suggest that the E4orf4-PP2A complex inhibits ACF and facilitates enhanced chromatin-remodeling activities of other SNF2h-containing complexes, such as WSTF-SNF2h. The resulting switch in chromatin remodeling determines life versus death decisions and contributes to E4orf4 functions during adenovirus infection.

The adenovirus E4orf4 protein targets PP2A to the ACF chromatin-remodeling factor and induces cell death through regulation of SNF2h-containing complexes.

L&#39;ad&eacute;novirus prot&eacute;ine de E4 treillis-lecture 4 (E4orf4) r&eacute;glemente la progression de l&#39;infection virale et lorsqu&#39;elle est exprim&eacute;e individuellement il induit l&#39;apoptose non classiques dans les cellules transform&eacute;es. Nous montrons ici que E4orf4 associe le facteur d&eacute;pendant de l&#39;ATP de remodelage de la chromatine ACF qui se compose d&#39;un saccharose non ATPase de fermentation - 2 h (SNF2h) et une sous-unit&eacute; r&eacute;gulatrice Acf1. En outre, E4orf4 cible prot&eacute;ine phosphatase 2 a (PP2A) de ce complexe et &agrave; la chromatine. Entrave &agrave; l&#39;activit&eacute; SNF2h inhibe la mort cellulaire induite par le E4orf4, alors que knockdown de Acf1 r&eacute;sultats dans accrue induite par le E4orf4 toxicit&eacute; chez les mammif&egrave;res et les cellules de levure, et Acf1 surexpression emp&ecirc;che de E4orf4 de downregulate d&eacute;but ad&eacute;novirus expression g&eacute;nique dans le contexte de l&#39;infection virale. Pr&eacute;cipitation de l&#39;homologue de Acf1, WSTF, inhibe la mort cellulaire induite par le E4orf4. Selon ces r&eacute;sultats, nous sugg&eacute;rons que le complexe E4orf4-PP2A inhibe l&#39;ACF et facilite les activit&eacute;s de remodelage de la chromatine am&eacute;lior&eacute;es d&#39;autres complexes contenant de le SNF2h, comme WSTF-SNF2h. Le commutateur qui en r&eacute;sulte dans le remodelage de la chromatine d&eacute;termine la vie contre la mort et contribue aux fonctions E4orf4 au cours de l&#39;infection &agrave; ad&eacute;novirus.

La prot&eacute;ine ad&eacute;novirus E4orf4 cible PP2A au facteur de remodelage de la chromatine ACF et provoque la mort cellulaire par le biais de r&eacute;glementation des complexes contenant SNF2h.

Die Adenoviren E4 offene Leseraster 4 (E4orf4) Protein reguliert das Fortschreiten der Virusinfektion und individuell ausgedr&uuml;ckt es nicht-klassischen Apoptose in transformierten Zellen induziert. Hier zeigen wir, dass der ATP-abh&auml;ngigen Chromatin-Umbau Faktor ACF E4orf4 zuordnet, der eine Saccharose nicht g&auml;renden - 2H (SNF2h)-ATPase und ein Acf1 regulatorische Untereinheit besteht. Dar&uuml;ber hinaus zielt E4orf4 Protein Phosphatase 2A (PP2A) an diesem komplexen und Chromatin. Behinderung der SNF2h Aktivit&auml;t hemmt E4orf4-induced Zellentod, w&auml;hrend Niederschlag von Acf1 f&uuml;hrt E4orf4-induzierter Toxizit&auml;t im S&auml;ugetier- und Hefezellen verst&auml;rkt und Acf1 &Uuml;berexpression E4orf4s F&auml;higkeit, gulieren fr&uuml;hen Adenovirus Genexpression im Rahmen einer Virusinfektion hemmt. Niederschlag von Acf1 Homolog, WSTF, hemmt E4orf4-induced Zellentod. Basierend auf diesen Ergebnissen empfehlen wir der E4orf4-PP2A-Komplex hemmt ACF und erleichtert die erh&ouml;hte Aktivit&auml;ten im Chromatin-Umbau von anderen SNF2h-haltigen komplexen, wie WSTF-SNF2h. Der resultierende Schalter in Chromatin Umbau bestimmt Leben versus Tod Entscheidungen und tr&auml;gt zur E4orf4 Funktionen w&auml;hrend der Adenovirus-Infektion.

Das E4orf4 Adenovirus-Protein zielt auf PP2A zum ACF-Chromatin-Umbau-Faktor und induziert Zelltod durch Regulierung der SNF2h-haltigen komplexe.

Adenovirus proteina di E4 open-lettura-frame 4 (E4orf4) regola la progressione dell&#39;infezione virale e quando espressa individualmente induce classico apoptosis in cellule trasformate. Qui vi mostriamo che E4orf4 associates con il trifosfato di Adenosina-dipendente-rimodellamento della cromatina fattore ACF che consiste di un saccarosio non fermentazione-2 h (SNF2h) ATPasi e una subunit&agrave; di regolamentazione Acf1. Inoltre, E4orf4 gli obiettivi della proteina fosfatasi 2A (PP2A) a questo complesso e a cromatina. Ostruzione dell&#39;attivit&agrave; SNF2h inibisce la morte cellulare indotta da E4orf4, mentre atterramento di Acf1 risultati in enhanced E4orf4-indotto tossicit&agrave; nei mammiferi sia le cellule di lievito, e Acf1 sovraespressione inibisce la capacit&agrave; di E4orf4 di sottoregola precoce dell&#39;adenovirus espressione genica nel contesto dell&#39;infezione virale. Atterramento dell&#39;omologo Acf1, FSMT, inibisce la morte cellulare indotta da E4orf4. Sulla base di questi risultati consigliamo il complesso E4orf4-PP2A inibisce ACF e facilita l&#39;attivit&agrave; di rimodellamento della cromatina avanzata di altri complessi contenenti SNF2h, come SNF2h FSMT. L&#39;interruttore risultante nel rimodellamento della cromatina determina la vita contro le decisioni di morte e contribuisce alla E4orf4 funzioni durante l&#39;infezione da adenovirus.

La proteina dell&#39;adenovirus E4orf4 PP2A si rivolge al fattore di rimodellamento della cromatina ACF e induce la morte cellulare attraverso il regolamento di complessi contenenti SNF2h.

E4 &#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x8AAD;&#x66F8;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0; 4 (E4orf4) &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3066;&#x500B;&#x5225;&#x306B;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; &#x30DB;&#x30FC;&#x30E0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x975E;&#x53E4;&#x5178;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F; E4orf4 &#x306E;&#x4EF2;&#x9593;&#x3068; ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x306F;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x306E;&#x975E;&#x767A;&#x9175; 2 h (SNF2h) &#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059; ACF &#x8981;&#x56E0;&#x304C;&#x793A;&#x3059; ATPase &#x3068; Acf1 &#x8ABF;&#x7BC0;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC; 2 a &#x306E; E4orf4 &#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; (PP2A) &#x3053;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x3002;SNF2h &#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x9589;&#x585E;&#x306F;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3067; Acf1 &#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x3068;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; E4orf4 &#x8A98;&#x8D77;&#x6BD2;&#x6027;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x3001;Acf1 &#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5; &#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x521D;&#x671F;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; E4orf4 &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; E4orf4 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DB;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B5;&#x30F3;&#x30BA;, Acf1 &#x540C;&#x65CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3; E4orf4 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066; E4orf4 PP2A &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; ACF &#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3001;&#x30DB;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B5;&#x30F3;&#x30BA; SNF2h &#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E; SNF2h &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x306F;&#x751F;&#x547D;&#x5BFE;&#x6B7B;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x4E2D;&#x306B; E4orf4 &#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; E4orf4 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; PP2A ACF &#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3057;&#x3001;SNF2h &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x932F;&#x4F53;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E4 &#xC624;&#xD508; &#xB3C5;&#xC11C; &#xD504;&#xB808;&#xC784; 4 (E4orf4) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xACE0; &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC544;&#xB2CC; &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; apoptosis &#xC720;&#xB3C4; &#xAC1C;&#xBCC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; E4orf4 ATP &#xC885;&#xC18D; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; chromatin &#xC694;&#xC18C; ATPase &#xBC1C;&#xD6A8;-2 h (SNF2h)&#xC640; Acf1 &#xADDC;&#xC815; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBE44; &#xC790;&#xB2F9;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xD53C; &#xC624;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; 2A &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; E4orf4 (PP2A)&#xC774; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC744; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xACE0; chromatin. SNF2h &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBC29;&#xD574; &#xCD5C;&#xC800; acf1&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC640; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; e4orf4&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C5;&#xC131; &#xBC0F; Acf1 overexpression e4orf4&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; downregulate &#xCD08;&#xAE30; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; E4orf4 &#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xC5B5;&#xC81C;. Acf1 &#xCCB4;, WSTF, &#xCD5C;&#xC800; E4orf4 &#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; E4orf4 PP2A &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD53C; &#xC624;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; SNF2h &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC9C0;, WSTF SNF2h &#xB4F1;&#xC758; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; chromatin &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; chromatin&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58; &#xC8FD;&#xC74C; &#xACB0;&#xC815; &#xB300; &#xC0DD;&#xD65C;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; E4orf4 &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;.

&#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; E4orf4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xD53C; &#xC624; &#xAC1C;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; chromatin &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; pp2a&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; snf2h&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;.

El adenovirus prote&iacute;na E4 marco de lectura abierto de 4 (E4orf4) regula la progresi&oacute;n de la infecci&oacute;n viral y cuando expresan individualmente induce apoptosis no cl&aacute;sicas en las c&eacute;lulas transformadas. Aqu&iacute; mostramos que E4orf4 se asocia con el factor de remodelaci&oacute;n de la cromatina dependiente de ATP ACF que consiste en una sacarosa no ATPasa de fermentaci&oacute;n - 2 h (SNF2h) y una subunidad reguladora de Acf1. Adem&aacute;s, E4orf4 dirige la prote&iacute;na fosfatasa 2A (PP2A) a este complejo y a la cromatina. Obstrucci&oacute;n de la actividad de SNF2h inhibe la muerte celular inducida por el E4orf4, mientras que la ca&iacute;da de Acf1 da lugar a mayor toxicidad inducida por E4orf4 tanto en mam&iacute;feros como en las c&eacute;lulas de levadura y sobreexpresi&oacute;n de Acf1 inhibe la capacidad de E4orf4 de regular a la baja temprana adenovirus expresi&oacute;n g&eacute;nica en el contexto de la infecci&oacute;n viral. Ca&iacute;da de la Acf1 hom&oacute;logo, WSTF, inhibe la muerte celular inducida por E4orf4. Basado en estos resultados nos sugieren que el complejo E4orf4-PP2A inhibe la ACF y facilita las actividades de remodelaci&oacute;n de la cromatina mejoradas de otros complejos que contienen SNF2h, como WSTF-SNF2h. El interruptor resultante en la remodelaci&oacute;n de la cromatina determina la vida frente a las decisiones de la muerte y contribuye a E4orf4 funciones durante la infecci&oacute;n por adenovirus.

La prote&iacute;na de adenovirus E4orf4 PP2A dirige al factor de remodelaci&oacute;n de la cromatina ACF e induce muerte celular mediante la regulaci&oacute;n de los complejos que contienen SNF2h.

Rakefet Sharf

Department of Molecular Microbiology,
Faculty of Medicine,
Department of Molecular Microbiology, Faculty of Medicine

Technion - Israel Institute of Technology

Preparation of Cell-lines for Conditional Knockdown of Gene Expression and Measurement of the Knockdown Effects on E4orf4-Induced Cell Death

Rakefet Sharf

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Technion - Israel Institute of Technology

Preparation of Cell-lines for Conditional Knockdown of Gene Expression and Measurement of the Knockdown Effects on E4orf4-Induced Cell Death

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Faculty of Medicine,
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