Visualizing Proteins and Macromolecular Complexes by Negative Stain EM: from Grid Preparation to Image Acquisition

Single particle electron microscopy (EM), of both negative stained or frozen hydrated biological samples, has become a versatile tool in structural ...

University of California San Francisco 

The signal recognition particle (SRP) recognizes polypeptide chains bearing a signal sequence as they emerge from the ribosome, and then binds its membrane-associated receptor (SR), thereby delivering the ribosome-nascent chain complex to the endoplasmic reticulum in eukaryotic cells and the plasma membrane in prokaryotic cells. SRP RNA catalytically accelerates the interaction of SRP and SR, which stimulates their guanosine triphosphatase (GTPase) activities, leading to dissociation of the complex. We found that although the catalytic activity of SRP RNA appeared to be constitutive, SRP RNA accelerated complex formation only when SRP was bound to a signal sequence. This crucial control step was obscured because a detergent commonly included in the reaction buffer acted as a signal peptide mimic. Thus, SRP RNA is a molecular switch that renders the SRP-SR GTPase engine responsive to signal peptide recruitment, coupling GTP hydrolysis to productive protein targeting.

Signal sequences activate the catalytic switch of SRP RNA.

&#x4FE1;&#x53F7;&#x8BC6;&#x522B;&#x9897;&#x7C92; (SRP) &#x8BA4;&#x8BC6;&#x5230;&#x53EF;&#x80FD;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8F74;&#x627F;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x94FE;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x53D7;&#x5176;&#x819C;&#x5173;&#x8054;&#x4F53; (SR)&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5411;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; endoplasmic reticulum &#x548C;&#x539F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x819C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x65B0;&#x751F;&#x94FE;&#x3002;SRP RNA &#x50AC;&#x5316;&#x52A0;&#x901F;&#x4E86; SRP &#x4E0E;&#x9536;&#x3001; &#x6FC0;&#x53D1;&#x5176;&#x9E1F;&#x82F7;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; &#xFF08;&#x53C2;&#x4E0E;&#xFF09; &#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x867D;&#x7136; SRP RNA &#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6D3B;&#x6027;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x662F;&#x672C;&#x6784;&#xFF0C;SRP RNA &#x52A0;&#x901F;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42; SRP &#x88AB;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5E8F;&#x5217;&#x65F6;&#x624D;&#x3002;&#x6B64;&#x5173;&#x952E;&#x63A7;&#x5236;&#x6B65;&#x9AA4;&#x906E;&#x4F4F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x53CD;&#x5E94;&#x7F13;&#x51B2;&#x533A;&#x4E2D;&#x901A;&#x5E38;&#x5305;&#x62EC;&#x6D17;&#x6DA4;&#x5242;&#x5145;&#x5F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x80BD;&#x6A21;&#x4EFF;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;SRP RNA &#x662F;&#x5448;&#x73B0; SRP SR &#x86CB;&#x767D;&#x5F15;&#x64CE;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x4FE1;&#x53F7;&#x80BD;&#x62DB;&#x8058;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5F00;&#x5173;&#x8026;&#x5408; GTP &#x6C34;&#x89E3;&#x751F;&#x4EA7;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5B9A;&#x5411;&#x3002;

&#x4FE1;&#x53F7;&#x5E8F;&#x5217;&#x6FC0;&#x6D3B; SRP RNA &#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x5F00;&#x5173;&#x3002;

La particule de reconnaissance du signal (SRP) reconna&icirc;t les cha&icirc;nes polypeptidiques portant une s&eacute;quence signal tels qu&#39;ils ressortent du ribosome et puis lie &agrave; son r&eacute;cepteur associ&eacute; &agrave; la membrane (SR), ainsi fournissant la cha&icirc;ne naissante ribosome complexe &agrave; l&#39;endoplasmic reticulum dans les cellules eucaryotes et la membrane plasmique des cellules procaryotes. SRP RNA acc&eacute;l&egrave;re catalytiquement l&#39;interaction des SRP et SR, qui stimule leurs activit&eacute;s triphosphatase (GTPase) de guanosine, conduisant &agrave; une dissociation du complexe. Nous avons constat&eacute; que m&ecirc;me si l&#39;activit&eacute; catalytique de l&#39;ARN SRP semblait &ecirc;tre constitutive, SRP RNA acc&eacute;l&eacute;r&eacute; de formation d&#39;un complexe uniquement lorsque le SRP a &eacute;t&eacute; li&eacute; &agrave; une s&eacute;quence de signaux. Cette &eacute;tape cruciale de contr&ocirc;le &eacute;tait masqu&eacute;e parce qu&#39;un d&eacute;tergent g&eacute;n&eacute;ralement inclus dans la m&eacute;moire tampon de r&eacute;action a agi comme un imitateur de peptide signal. Ainsi, l&#39;ARN SRP est un interrupteur mol&eacute;culaire qui rend le moteur SRP-SR GTPase sensible aux signaux recrutement de peptide, hydrolyse du GTP de couplage au ciblage de la prot&eacute;ine productif.

S&eacute;quences signal actionnent l&#39;interrupteur catalytique de l&#39;ARN de la SRP.

Das Signal Recognition Particle (SRP) erkennt Polypeptidketten mit eine Signal-Sequenz, wie sie aus dem Ribosom entstehen und bindet dann seinen Membran-assoziierte Rezeptor (SR), damit das Ribosom-entstehende Kettenkomplex in das endoplasmatische Retikulum eukaryotic Zellen von und der Plasmamembran in prokaryotic Zellen liefern. SRP-RNA beschleunigt katalytisch das Zusammenspiel von SRP und SR, die ihre Guanosin Adenosintriphosphatase (GTPase) Aktivit&auml;ten anregt, was zu Dissoziation des Komplexes. Wir fanden, dass obwohl die katalytische Aktivit&auml;t der SRP-RNA konstitutiv zu sein schien, SRP-RNA Komplexbildung beschleunigt nur beim SRP an einer Signal-Sequenz gebunden war. Dieser entscheidende Schritt war verdeckt, weil ein Reinigungsmittel, die h&auml;ufig in der Reaktion-Puffer enthalten als ein Signal-Peptid-Nach&auml;ffer gehandelt. Also SRP-RNA eine molekulare Schalter, der die SRP-SR GTPase-Engine auf signal-Peptid-Rekrutierung, rendert Kupplung GTP-Hydrolyse zu produktiven Protein targeting.

Signal-Sequenzen den katalytischen Schalter der SRP-RNA zu aktivieren.

La particella di riconoscimento del segnale (SRP) riconosce le catene polipeptidiche recanti una sequenza segnale che emergono dal ribosoma e poi si lega il suo recettore di membrana associati (SR), offrendo quindi la catena nascente-ribosoma complessa per la endoplasmic reticulum in cellule eucariotiche e la membrana del plasma nelle cellule procariote. RNA di SRP cataliticamente accelera l&#39;interazione del SRP e SR, che stimola la loro attivit&agrave; di guanosina trifosfatasi (GTPasi), portando alla dissociazione del complesso. Abbiamo trovato che anche se l&#39;attivit&agrave; catalitica del RNA di SRP sembrava essere costitutiva, RNA di SRP accelerata formazione complessa solo quando SRP &egrave; stato associato a una sequenza di segnale. Questo passaggio cruciale del controllo &egrave; stato oscurato perch&eacute; un detergente comunemente incluso nel buffer di reazione ha agito come un mimic del peptide segnale. Cos&igrave;, RNA di SRP &egrave; un interruttore molecolare che rende il motore SRP-SR GTPase reattivo per segnalare l&#39;assunzione del peptide, giunto all&#39;idrolisi di GTP a destinazione produttiva della proteina.

Sequenze segnale attivano l&#39;interruttore catalitica di RNA di SRP.

&#x4FE1;&#x53F7;&#x8A8D;&#x8B58;&#x7C92;&#x5B50; &#xFF08;SRP&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7CFB;&#x5217;&#x3092;&#x8EF8;&#x53D7;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x9396;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x65B0;&#x751F;&#x9396;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x771F;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; endoplasmic reticulum &#x3068;&#x539F;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x539F;&#x5F62;&#x8CEA;&#x819C;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x819C;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x305F;&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC; (SR) &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SRP &#x306E; RNA &#x89E6;&#x5A92; SRP &#x3068;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3001;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3; &#x30B0;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3; &#xFF08;gtp &#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF09; &#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x3001;SR &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x52A0;&#x901F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;SRP &#x306E; RNA &#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x69CB;&#x6210;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x306E;&#x307F; SRP &#x4FE1;&#x53F7;&#x7CFB;&#x5217;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D; SRP RNA &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x52A0;&#x901F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5236;&#x5FA1;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x53CD;&#x5FDC;&#x30D0;&#x30C3;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x6D17;&#x5264;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x6A21;&#x5023;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x52D5;&#x3057;&#x305F;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x96A0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;SRP RNA SRP SR GTPase &#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x3001;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1; GTP &#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7523;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x7D50;&#x5408;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x914D;&#x5217; SRP RNA &#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC2E0;&#xD638; &#xC778;&#xC2DD; &#xC785;&#xC790; (SRP) &#xC2E0;&#xD638; &#xC21C;&#xC11C;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB4F1;&#xC7A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; polypeptide &#xC0AC;&#xC2AC;&#xC744; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558; &#xACE0; &#xC218;&#xC6A9;&#xC758; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; &#xCCB4; (SR) &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC9C4; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; endoplasmic reticulum &#xBC0F; prokaryotic &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6D0;&#xD615;&#xC9C8; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xCD08;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC778; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC81C;&#xACF5;&#xC744; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. SRP RNA&#xC5D0;&#xB294; SRP&#xC640; SR, guanosine triphosphatase (GTPase) &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; catalytically &#xAC00;&#xC18D; &#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBE44;&#xB85D; SRP RNA&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC81C;&#xC815; &#xB420; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC778;&#xB2E4;, SRP RNA &#xAC00;&#xC18D; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131; SRP &#xC2E0;&#xD638; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC18;&#xC751; &#xBC84;&#xD37C;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC138;&#xC81C; &#xC2E0;&#xD638; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xBAA8;&#xBC29;&#xC73C;&#xB85C; &#xD589;&#xB3D9; &#xD588;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB2E8;&#xACC4; &#xAC00;&#xB824;&#xC9C4; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, SRP RNA&#xB294; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xAC8C; GTP &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; SRP SR GTPase &#xC5D4;&#xC9C4; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xCC44;&#xC6A9;, &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E0;&#xD638; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; SRP RNA&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;.

La part&iacute;cula de reconocimiento de se&ntilde;al (SRP) reconoce cadenas polipept&iacute;dicas teniendo una secuencia de la se&ntilde;al como se salen del ribosoma y luego une a su receptor asociada a membrana (SR), entregando as&iacute; el ribosoma-naciente cadena compleja a la endoplasmic reticulum en las c&eacute;lulas eucariotas y la membrana plasm&aacute;tica en las c&eacute;lulas procariotas. SRP RNA catal&iacute;tico acelera la interacci&oacute;n de SRP y SR, que estimula sus actividades de guanosina trifosfatasa (GTPasa), lleva a la disociaci&oacute;n del complejo. Se encontr&oacute; que aunque la actividad catal&iacute;tica de ARN SRP parec&iacute;a ser constitutiva, SRP RNA aceler&oacute; complejante s&oacute;lo cuando SRP estaba destinada a una secuencia de la se&ntilde;al. Este paso crucial control fue opacado porque un detergente com&uacute;nmente incluido en el tamp&oacute;n de reacci&oacute;n actu&oacute; como un imitador de p&eacute;ptido se&ntilde;al. As&iacute;, SRP ARN es un interruptor molecular que hace que el motor de la GTPasa SRP-SR responde a la se&ntilde;al de reclutamiento de p&eacute;ptido, hidr&oacute;lisis de GTP de acoplamiento a prote&iacute;nas productivos dirigidos a.

Secuencias se&ntilde;al activan el interruptor catal&iacute;tico de ARN de SRP.

RNA &#x662F;&#x8BB8;&#x591A;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D; (&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#xFF09; &#x914D;&#x5408;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x3001; &#x526A;&#x63A5;&#x548C;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8BC6;&#x522B;&#x9897;&#x7C92;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728;&#x6307;&#x5BFC;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x4E2D; RNA &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EA;&#x5F00;&#x59CB;&#x63A2;&#x7D22;&#x3002;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x9700;&#x8981;&#x5927;&#x4F1A;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x51AF;&#x86CB;&#x767D; homooligomer &#x548C;&#x51AF;&#x54CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20; &#xFF08;&#x91CD;&#x91CD;&#xFF09; RNA &#x6765;&#x8C03;&#x89E3;&#x6838;&#x51FA;&#x53E3; unspliced &#x75C5;&#x6BD2;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;&#x5927;&#x4F1A;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x51AF;&#x91CD;&#x91CD;&#x590D;&#x6742;&#x5408;&#x4F5C;&#x9F50;&#x805A;&#x51AF;&#x7684;&#x91CD;&#x91CD;&#x652F;&#x67B6;&#x4E0A;&#x7684;&#x6536;&#x76CA;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5229;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; RNA &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x6765;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x914D;&#x5408;&#x9AD8;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x51AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x80BD; RNA &#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4F17;&#x6240;&#x5468;&#x77E5;&#x7684;&#x4F46;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0D;&#xFF0C;&#x53D8;&#x5F97;&#x4E0D;&#x660E;&#x786E; RNA &#x5230;&#x4F55;&#x79CD;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E86;&#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x51AF; RNA &#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x91CD;&#x91CD;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x5BE1;&#x805A;&#x72B6;&#x6001;&#x548C;&#x6EB6;&#x89E3;&#x5EA6;&#x7684;&#x51AF;&#x548C;&#x5F15;&#x5BFC;&#x8FDB;&#x5165;&#x79BB;&#x6563;&#x51AF; RNA &#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x5B83;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x3002;SAXS &#x548C; EM &#x6570;&#x636E;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x6D3E;&#x751F;&#x51AF;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x6A21;&#x578B;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x91CD;&#x91CD;&#x53D1;&#x5939;&#x548C;&#x76F4;&#x89C2;&#x663E;&#x793A;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x51AF;&#x91CD;&#x91CD;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x91CD;&#x91CD;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x5927;&#x4F1A;&#x7684;&#x51AF; homooligomers &#x6210;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x7684;&#x9897;&#x7C92;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x66F4;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x673A;&#x3001; &#x7B49;&#xFF0C;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53; RNA &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x8BA9;&#x4EBA;&#x60F3;&#x8D77;&#x8BB8;&#x591A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E9A;&#x57FA;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x91CD;&#x91CD;&#x4E0D;&#x662F;&#x53EA;&#x662F;&#x88AB;&#x52A8;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x4E0A;&#x54EA;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x76F8;&#x53CD;&#x79EF;&#x6781;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x6210;&#x548C;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;

&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x51AF;&#x54CD;&#x5E94;&#x5143;&#x7D20; &#xFF08;&#x91CD;&#x91CD;&#xFF09; &#x5230;&#x79BB;&#x6563;&#x4E0D;&#x5BF9;&#x79F0;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x6307;&#x793A;&#x51AF; homooligomer &#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x3002;

RNA is a crucial structural component of many ribonucleoprotein (RNP) complexes, including the ribosome, spliceosome, and signal recognition particle, but the role of RNA in guiding complex formation is only beginning to be explored. In the case of HIV, viral replication requires assembly of an RNP composed of the Rev protein homooligomer and the Rev response element (RRE) RNA to mediate nuclear export of unspliced viral mRNAs. Assembly of the functional Rev-RRE complex proceeds by cooperative oligomerization of Rev on the RRE scaffold and utilizes both protein-protein and protein-RNA interactions to organize complexes with high specificity. The structures of the Rev protein and a peptide-RNA complex are known, but the complete RNP is not, making it unclear to what extent RNA defines the composition and architecture of Rev-RNA complexes. Here we show that the RRE controls the oligomeric state and solubility of Rev and guides its assembly into discrete Rev-RNA complexes. SAXS and EM data were used to derive a structural model of a Rev dimer bound to an essential RRE hairpin and to visualize the complete Rev-RRE RNP, demonstrating that RRE binding drives assembly of Rev homooligomers into asymmetric particles, reminiscent of the role of RNA in organizing more complex RNP machines, such as the ribosome, composed of many different protein subunits. Thus, the RRE is not simply a passive scaffold onto which proteins bind but instead actively defines the protein composition and organization of the RNP.

HIV Rev response element (RRE) directs assembly of the Rev homooligomer into discrete asymmetric complexes.

L&#x26;#39;ARN est une composante essentielle structurelle de nombreux ribonucl&#xE9;oprot&#xE9;iques (RNP) complexes, y compris le ribosome, spliceosome et des particules de reconnaissance du signal, mais le r&#xF4;le de l&#x26;#39;ARN dans l&#x26;#39;orientation de la formation du complexe commence seulement &#xE0; &#xEA;tre explor&#xE9;. Dans le cas du VIH, la r&#xE9;plication virale n&#xE9;cessite l&#x26;#39;assemblage d&#x26;#39;un compos&#xE9; de la RNP homooligom&#xE8;re prot&#xE9;ine Rev et l&#x26;#39;&#xE9;l&#xE9;ment de r&#xE9;ponse Rev (RRE) ARN de m&#xE9;diation &#xE0; l&#x26;#39;exportation nucl&#xE9;aire de ARNm viraux non &#xE9;piss&#xE9;s. Assembl&#xE9;e des fonctionnels Rev-RRE produit complexes par oligom&#xE9;risation coop&#xE9;rative de Rev sur l&#x26;#39;&#xE9;chafaud RRE et utilise &#xE0; la fois la prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine et prot&#xE9;ine-ARN interactions complexes &#xE0; organiser avec une grande sp&#xE9;cificit&#xE9;. Les structures de la prot&#xE9;ine Rev et un complexe peptide-ARN sont connus, mais le RNP compl&#xE8;te n&#x26;#39;est pas, ce qui rend difficile de savoir si l&#x26;#39;ARN d&#xE9;finit la composition et l&#x26;#39;architecture de Rev-ARN complexes. Ici, nous montrons que le RRE contr&#xF4;le l&#x26;#39;&#xE9;tat oligom&#xE9;rique et la solubilit&#xE9; de Rev et guide son ensemble dans discrets Rev-ARN complexes. Donn&#xE9;es SAXS et EM ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour d&#xE9;river un mod&#xE8;le structurel d&#x26;#39;un dim&#xE8;re Rev li&#xE9; &#xE0; un RRE en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux essentiel et de visualiser la compl&#xE8;te Rev-RRE RNP, d&#xE9;montrant que RRE ensemble de fixation des disques de homooligom&#xE8;res Rev en particules asym&#xE9;triques, rappelant le r&#xF4;le de l&#x26;#39;ARN dans l&#x26;#39;organisation de machines RNP plus complexes, tels que le ribosome, compos&#xE9; de nombreux sous-unit&#xE9;s prot&#xE9;iques diff&#xE9;rentes. Ainsi, le RRE n&#x26;#39;est pas simplement un passif &#xE9;chafaudage sur lequel prot&#xE9;ines se lient, mais au lieu d&#xE9;finit activement la composition en prot&#xE9;ines et l&#x26;#39;organisation de la RNP.

&#xC9;l&#xE9;ment de r&#xE9;ponse au VIH Rev (RRE) Diriger l&#x26;#39;Assembl&#xE9;e de l&#x26;#39;homooligom&#xE8;re Rev dans discrets complexes asym&#xE9;triques

RNA ist eine entscheidende strukturelle Komponente der vielen Ribonucleoprotein (RNP) komplexe, unter anderem das Ribosom und Spliceosom Signal Recognition Particle, aber die Rolle der RNA in der F&uuml;hrung der Komplexbildung ist nur der Anfang, erkundet zu werden. Bei HIV erfordert die Virusreplikation Montage von einem RNP bestehend aus der Rev-Protein-Homooligomer und das Rev-Response-Element (RRE) RNA zu nuklearen vermitteln unspliced virale mRNAs zu exportieren. Montage des funktionalen Rev-RRE komplexes verl&auml;uft durch kooperative Oligomerisierung von Rev auf dem Schafott RRE und nutzt Interaktionen von Protein-Protein und Protein-RNA-komplexe mit hoher Spezifit&auml;t zu organisieren. Die Strukturen der Rev-Protein und ein Peptid-RNA-komplex sind bekannt, aber die komplette RNP ist nicht, dass es unklar, inwieweit RNA die Zusammensetzung und die Architektur des Rev-RNA-komplexe definiert. Hier zeigen wir, dass die RRE die Oligomere Zustand und L&ouml;slichkeit von Rev steuert und seine Versammlung in diskrete Rev-RNA-komplexe f&uuml;hrt. SAXS und EM-Daten wurden verwendet, um ein strukturelles Modell des ein Rev-Dimer abgeleitet werden gebunden, um eine wesentliche RRE-Haarnadel und visualisieren Sie die komplette Ausgabe-RRE-RNP, viele verschiedene Protein-Untereinheiten zusammengesetzt belegen, da&szlig; RRE Bindung Montage von Rev Homooligomers in asymmetrischen Partikel, erinnert an die Rolle der RNA in der Organisation komplexer RNP-Maschinen, wie dem Ribosom, treibt. Also die RRE ist nicht einfach ein passives Ger&uuml;st auf welche Proteine binden aber stattdessen aktiv definiert die Eiwei&szlig;-Zusammensetzung und Organisation der RNP.

HIV Rev-Response-Element (RRE) leitet die Versammlung des Rev-Homooligomer in diskrete asymmetrischen komplexe.

il RNA &egrave; un componente strutturale fondamentale di molti complessi ribonucleoproteina (RNP), tra cui il ribosoma e spliceosoma particella di riconoscimento del segnale, ma il ruolo del RNA nel guidare la formazione dei complessi &egrave; solo all&#39;inizio di essere esplorato. Nel caso di HIV, replicazione virale richiede assemblaggio di un RNP &egrave; composto da homooligomer la proteina Rev e l&#39;elemento di risposta Rev (RRE) RNA per mediare nucleare esportazione di unspliced mRNA virale. Assemblaggio del complesso funzionale Rev-RRE procede dalla cooperativa oligomerizzazione di Rev sul patibolo RRE e utilizza le interazioni della proteina-RNA e proteina-proteina per organizzare complessi con elevata specificit&agrave;. Le strutture della proteina Rev e un complesso peptide-RNA sono noti, ma il completo RNP &egrave; non, rendendo poco chiaro in che misura RNA definisce la composizione e l&#39;architettura dei complessi RNA-Rev. Qui vi mostriamo che la RRE guide relativo assembly in complessi Rev-RNA discreti e controlla lo stato oligomerici e solubilit&agrave; del Rev. Dati SAXS ed EM sono stati utilizzati per derivare un modello strutturale di un dimero Rev associato a un tornante RRE essenziale e visualizzare il completo Rev-RRE RNP, dimostrando che associazione RRE Drive assembly di Rev homooligomers in particelle asimmetriche, che ricorda il ruolo del RNA nell&#39;organizzazione macchine RNP pi&ugrave; complesse, come ad esempio il ribosoma, composta da molte subunit&agrave; proteiche differenti. Cos&igrave;, la RRE non &egrave; semplicemente un ponteggio passivo sul quale legano proteine ma invece attivamente definisce la composizione proteica e l&#39;organizzazione della RNP.

Elemento di risposta HIV Rev (RRE) dirige Assemblea del Rev homooligomer in complessi asimmetriche discreti.

RNA&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3001;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x8A8D;&#x8B58;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;RNP&#xFF09;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x69CB;&#x6210;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RNA&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x59CB;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; HIV&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;mRNA&#x306E;&#x6838;&#x5916;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;Rev&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Rev&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF08;RRE&#xFF09;RNA&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;RNP&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x304C;&#x200B;&#x200B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002; RRE&#x8DB3;&#x5834;&#x4E0A;&#x306E;&#x7267;&#x5E2B;&#x306E;&#x5354;&#x529B;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;REV-RRE&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x9032;&#x884C;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3068;&#x9AD8;&#x3044;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3068;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x6574;&#x7406;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; - &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x53CA;&#x3073;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-RNA&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Rev&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;-RNA&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;RNP&#x306E;RNA&#x306F;&#x3001;Rev-RNA&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x6210;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30FC;&#x30AD;&#x30C6;&#x30AF;&#x30C1;&#x30E3;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x3001;&#x3069;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x307E;&#x3067;&#x304B;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;RRE&#x306F;&#x3001;Rev&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x72B6;&#x614B;&#x3068;&#x6EB6;&#x89E3;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x3001;&#x96E2;&#x6563;&#x7684;&#x306A;REV-RNA&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x5C0E;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; SAXS&#x3068;EM&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;RNA&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x5F77;&#x5F7F;&#x3068;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x975E;&#x5BFE;&#x79F0;&#x7C92;&#x5B50;&#x306B;Rev&#x306E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x305D;&#x306E;RRE&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;RRE&#x306E;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7267;&#x5E2B;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;REV-RRE RNP&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;RNP&#x30DE;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C1;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;RRE&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304C;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;RNP&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7D44;&#x6210;&#x3068;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x53D7;&#x52D5;&#x7684;&#x8DB3;&#x5834;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

HIV&#x306E;Rev&#x5FDC;&#x7B54;&#x30A8;&#x30EC;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF08;RRE&#xFF09;&#x306F;&#x96E2;&#x6563;&#x7684;&#x4E0D;&#x6589;&#x932F;&#x4F53;&#x306B;&#x7267;&#x5E2B;&#x30DB;&#x30E2;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x6307;&#x793A;

RNA&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;, spliceosome, &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638; &#xC778;&#xC2DD; &#xC785;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9CE;&#xC740; ribonucleoprotein (RNP) &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; RNA&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xB9CC; &#xD0D0;&#xD5D8;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C;&#xB294; RNP&#xC758; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; Rev &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; homooligomer&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xACC4; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; (RRE) RNA &#xD575; &#xC911;&#xC7AC; unspliced &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; Mrnas&#xC758; &#xB0B4;&#xBCF4;&#xB0B4;&#xAE30; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xB2A5; &#xACC4; RRE &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; RRE &#xBE44; &#xACC4;&#xC5D0; &#xB808; &#xBE0C;&#xC758; oligomerization&#xC744; &#xACF5;&#xB3D9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xB192;&#xC740; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xC815;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-RNA&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. Rev &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;-RNA &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; RNP, &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85; &#xC5B4;&#xB290; &#xC815;&#xB3C4;&#xB85C; RNA &#xAD6C;&#xC131;&#xACFC; &#xB808; &#xBE0C; RNA &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC758; &#xAC74;&#xCD95;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xB294;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; RRE oligomeric &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xB808; &#xBE0C;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574;&#xB3C4; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xACE0; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xACC4; RNA &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xAC00;&#xC774;&#xB4DC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. SAXS &#xBC0F; EM &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xB808; &#xBE0C; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD30C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xAD6C;&#xC131; RRE &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xC785;&#xC790;, &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;, &#xAC19;&#xC740; &#xB354; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; RNP &#xAE30;&#xACC4; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; RNA&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xC554;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xB808; &#xBE0C; homooligomers&#xC758; &#xC870;&#xB9BD; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; RRE &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; &#xD558; &#xACE0; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xB808; &#xBE0C; RRE RNP &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;,&#xC740; RRE&#xC740; &#xB2E8;&#xC21C;&#xD788; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; bind&#xC5D0; &#xC218;&#xB3D9; &#xBE44; &#xACC4;&#xB9CC; &#xB300;&#xC2E0; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC131; &#xBC0F; &#xC870;&#xC9C1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; RNP&#xC758; &#xC815;&#xC758;.

&#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xACC4; &#xC751;&#xB2F5; &#xC694;&#xC18C; (RRE) &#xC774;&#xC0B0; &#xBE44;&#xB300;&#xCE6D; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xB808; &#xBE0C; homooligomer &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El ARN es un componente crucial estructural de muchos ribonucleoprote&#xED;na (RNP) complejos, incluido el spliceosome ribosoma, y &#x200B;&#x200B;part&#xED;culas de reconocimiento de la se&#xF1;al, pero el papel del ARN en la orientaci&#xF3;n de la formaci&#xF3;n de complejos apenas est&#xE1; comenzando a ser explorado. En el caso del VIH, la replicaci&#xF3;n viral requiere el montaje de un compuesto de la RNP homooligomer prote&#xED;na Rev y el elemento de respuesta Rev (RRE) ARN para mediar exportaci&#xF3;n nuclear de unspliced &#x200B;&#x200B;ARNm viral. Asamblea de los funcionales Rev-RRE fondos complejos de oligomerizaci&#xF3;n cooperativa de Rev en el andamio RRE y utiliza tanto la prote&#xED;na-prote&#xED;na y prote&#xED;na-ARN interacciones para organizar complejos con alta especificidad. Las estructuras de la prote&#xED;na Rev y un complejo p&#xE9;ptido-ARN son conocidos, pero la RNP no es completa, por lo que es claro hasta qu&#xE9; punto ARN define la composici&#xF3;n y la arquitectura de Rev-ARN complejos. Aqu&#xED; nos muestran que la RRE controla el estado oligom&#xE9;rico y la solubilidad de Rev y gu&#xED;a a su montaje en discretas Rev-ARN complejos. Datos de SAXS y EM fueron utilizados para obtener un modelo estructural de un d&#xED;mero Rev obligado a una horquilla de RRE esencial y completa para visualizar la Rev-RRE RNP, lo que demuestra que el montaje de uni&#xF3;n de las unidades de RRE homooligomers Rev en part&#xED;culas asim&#xE9;tricas, que recuerda el papel del ARN en la organizaci&#xF3;n de las m&#xE1;quinas m&#xE1;s complejas RNP, tales como los ribosomas, compuestas de muchas subunidades de prote&#xED;nas diferentes. As&#xED;, el RRE no es simplemente un pasivo andamio sobre el cual se unen las prote&#xED;nas, sino que activamente define la composici&#xF3;n de prote&#xED;nas y la organizaci&#xF3;n de la RNP.

David S. Booth

Graduate Group in Biophysics

University of California San Francisco

Visualizing Proteins and Macromolecular Complexes by Negative Stain EM: from Grid Preparation to Image Acquisition

David S. Booth

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Graduate Group in Biophysics

University of California San Francisco

Visualizing Proteins and Macromolecular Complexes by Negative Stain EM: from Grid Preparation to Image Acquisition

Graduate Group in Biophysics