Facile Herstellung von Intern Selbstorganisierte Lipidpartikel stabilisiert durch Kohlenstoff-Nanoröhren

Zusammenfassung

We report on a smart application of carbon nanotubes for kinetic stabilization of lipid particles that contain self-assembled nanostructures in their cores. The preparation of lipid particles requires rather low concentrations of carbon nanotubes permitting their use in biomedical applications such as drug delivery.

Zusammenfassung

Wir präsentieren eine einfache Methode nanostrukturierte Lipidpartikel von Kohlenstoffnanoröhren (CNTs) stabilisiert vorzubereiten. Einwandig (unberührte) und mehrwandig (funktionalisierte) CNTs als Stabilisatoren verwendet Pickering Typ Öl-in-Wasser (O / W) Emulsionen zu erzeugen. Lipide nämlich Dimodan U und Phytantriol als Emulgatoren, die in überschüssiges Wasser durch Selbstorganisation in die bikontinuierliche kubische Pn3m Phase verwendet. Diese hochviskose Phase wird in kleinere Partikel zerlegt eine Sonde Ultraschallgerät in Gegenwart von üblichen Tensid Stabilisatoren oder CNTs verwendet wie hier geschehen. Zunächst werden die CNTs (Pulverform) in Wasser, gefolgt von weiteren Ultraschallbehandlung mit dem geschmolzenen Lipid dispergiert, um die endgültige Emulsion zu bilden. Während dieses Prozesses erhalten die CNTs mit Lipid-Molekülen beschichtet, die wiederum davon ausgegangen werden, um die Lipidtröpfchen umgibt einen partikulären Emulsion zu bilden, die über Monate stabil ist. Die durchschnittliche Größe der nanostrukturierten Lipidpartikel-CNT stabilisiert ist im Submikron-range, die gut mit den Partikeln vergleicht stabilisiert herkömmliche Tenside verwenden. Kleinwinkel-Röntgenstreuungsdaten bestätigt die Beibehaltung der ursprünglichen Pn3m kubischen Phase in den CNT-stabilisiertes Lipid-Dispersionen im Vergleich zu den reinen Lipidphase (bulk state). Blauverschiebung und Senken der Intensitäten in Charakteristik G und G Bänder von CNTs in der Raman-Spektroskopie beobachtet die Interaktion zwischen CNT Oberfläche und Lipidmoleküle zu charakterisieren. Diese Ergebnisse legen nahe, dass die Wechselwirkungen zwischen den CNTs und Lipiden zur gegenseitigen Stabilisierung in wässrigen Lösungen verantwortlich sind. Da die Konzentrationen der zur Stabilisierung eingesetzten CNTs sind sehr niedrig und Lipidmoleküle sind in der Lage, die CNTs, die Toxizität von CNTs zu funktionalisieren, ist unbedeutend zu erwarten, während ihre Biokompatibilität stark verbessert wird. Daher ist die vorliegende Ansatz findet ein großes Potenzial in verschiedenen biomedizinischen Anwendungen, zum Beispiel für die Lieferung von m Hybrid-Nanotransporter Systeme zu entwickelnehrere funktionelle Moleküle wie in der Kombinationstherapie oder Fachtherapie.

Einleitung

Im Laufe der letzten Jahrzehnte, ^ein Nanotechnologie hat sich als leistungsfähiges Werkzeug, vor allem im Bereich der präklinischen Entwicklung der Medizin zur Bekämpfung der notorischen Krankheiten wie Krebs entwickelt. In diesem Zusammenhang nanoskalige Strukturen mit einer Größe von <1000 nm in großem Umfang als Träger zur Freisetzung von verschiedenen aktiven Biomoleküle, wie Medikamente, Proteine, Nukleinsäuren, Gene und diagnostischen Bildgebungsmitteln ^1-4 untersucht werden. Diese Biomoleküle sind entweder in den Nanopartikeln verkapselt oder konjugiert auf die Oberfläche der Nanopartikel und am Wirkort durch Auslöser wie pH oder Temperatur ^5,6 freigesetzt. Obwohl extrem klein erweist sich die große Oberfläche dieser Nanopartikel zur gezielten Abgabe von aktiven Biomoleküle von großem Vorteil sein. Die Kontrolle über die Teilchengröße und Biokompatibilität ist von äußerster Wichtigkeit, um die therapeutische Wirksamkeit und somit die Anwendbarkeit von Nanopartikeln ^7,8 zu optimieren.Lipide ^9-13, Polymere ^14,15, Metalle ^16,17 und Kohlenstoff-Nanoröhren ^18,19 wurden als Nanotransporter für verschiedene biomedizinische und pharmazeutische Anwendungen angewendet.

Darüber hinaus Nanotransporter Anwendungen auf Basis von Lipidselbstorganisierte Nanostrukturen haben eine große Bedeutung in vielen anderen Disziplinen, darunter Lebensmittel- und Kosmetikindustrie ^20,21. Zum Beispiel sind sie in der Proteinkristallisation ^{22, 23} Trennung von Biomolekülen, wie Lebensmittelstabilisatoren beispielsweise in Desserts ^{24 und} in der Lieferung von aktiven Molekülen, wie Nährstoffe, Geschmacksstoffe und Duftstoffe ^25-31 verwendet. Selbstorganisierte Lipidnanostrukturen haben nicht nur die Möglichkeit, bioaktive Moleküle zu lösen, in einer kontrollierten und zielgerichtet ^32-38, aber sie sind auch in der Lage die funktionellen Moleküle aus chemischen und enzymatischen Abbau ^39,40 zu schützen. Obwohl planare Fluiddoppelschicht ist die commauf Nanostruktur durch amphiphilen Lipidmolekülen in Gegenwart von Wasser, andere Strukturen wie hexagonal und kubisch sind auch häufig ^20,41,42 gebildet beobachtet. Die Art der Nanostruktur gebildet hängen von der Molekülform Struktur "Lipide der Lipidzusammensetzung in Wasser als auch auf die physikalisch-chemischen Bedingungen eingesetzt, wie Temperatur und Druck ^43. Die Anwendbarkeit der nicht-planaren Lipidnanostrukturen insbesondere von kubischen Phasen ist beschränkt aufgrund ihrer hohen Viskosität und inhomogene Domänen Konsistenz. Diese Probleme werden überwunden, indem die Lipid-Nanostrukturen in großen Wassermenge dispergiert Öl-in-Wasser (O / W) Emulsionen Mikron oder Submikrongröße Lipidteilchen zu bilden. Auf diese Weise kann ein geeignetes Produkt mit niedriger Viskosität hergestellt werden, während die ursprüngliche Lipidselbstorganisierte Struktur im Inneren der dispergierten Teilchen zu halten. Die Bildung dieser intern selbstorganisierten Teilchen (abgekürzt als ISAsomes ⁴⁴ ZB erfordert üblicherweise eine Kombination aus einem hohen Energieeingabeschritt und den Zusatz von Stabilisatoren wie Tenside oder Polymere cubosomes aus kubischen Phasen und hexosomes von hexagonalen Phasen). Jüngste Forschungen in diese Richtung zeigt die Anwendung der verschiedenen Feststoffpartikeln ⁴⁵ mit Silica-Nanopartikel ^46, Ton ^47-49 und Kohlenstoff-Nanoröhren ⁵⁰ für die Stabilisierung der zuvor genannten Emulsionen, in geeigneter Weise bezeichnet als Pickering ^{51 oder} Ramsden-Pickering-Emulsionen ^52.

In den letzten Jahren auf Kohlenstoff basierenden Nanostrukturen wie einwandige Kohlenstoffnanoröhren (SWCNTs) wurden mehrwandige Kohlenstoffnanoröhren (MWCNTs) und Fullerene ein hohes Maß an Aufmerksamkeit wie neuartigen Biomaterialien ^53,54 erhalten. Die wichtigsten Anliegen sind ihre Toxizität ^55-58, Wasserunlöslichkeit ⁵⁹ und damit ihre Biokompatibilität ^56. Ein effizienter Weg, um diese Probleme anzugehen ist die Oberflächenfunktionsierung unter Verwendung nicht-toxisch und biokompatibel Moleküle wie Lipide. In Gegenwart von Wasser, Lipide mit CNTs in einer Weise zusammenwirken, dass hydrophobe Oberfläche von CNTs aus polaren wässrigen Medium abgeschirmt wird, während die Lipidhydrophile Kopfgruppen ihre Löslichkeit oder Dispersion in Wasser helfen ^60,61. Lipide sind integrale Bestandteile von Zellorganellen wie auch einige Nahrungsmittelmaterialien, damit deren Dekoration idealerweise die in vivo Toxizität von CNTs abnehmen sollte. Biomedizinische Anwendungen basierend unabhängig auf CNTs ^18,19 und Lipidnanostrukturen ^13.9 sind unter intensiver Entwicklungs aber die Anwendungen, die Eigenschaften der beiden zu kombinieren sind noch nicht gut erforscht.

In dieser Arbeit beschäftigen wir zwei verschiedene Arten von Lipiden und drei Arten von CNTs von denen SWCNTs in der ursprünglichen Form sind während MWCNTs mit Hydroxyl und Carbonsäuregruppen funktionalisiert sind. Wir haben sehr niedrige Konzentrationen von CNTs verwendet, um die Dispersionen herzustellen, derenStabilität hängt von verschiedenen Faktoren wie zB der Art des Lipids, der Art der CNT, Verhältnis von Lipid zu CNT verwendet werden, sowie auf die Beschallung Parameter verwendet, wie Leistung und Dauer. Diese Video-Protokoll bietet technische Details eines Verfahrens zur Lipidnanopartikel mit verschiedenen CNT-Stabilisatoren kinetisch zu stabilisieren.

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Protokoll

Achtung: CNTs in dieser Arbeit sind in der nanopartikulären Form, die zusätzliche Gefahren haben im Vergleich zu ihren Massen Pendants. Das Einatmen von Graphit, sowohl natürliche als auch synthetische, können Staublunge ⁶² ähnlich wie Kohle Arbeiterlunge verursachen. Darüber hinaus gab es Bedenken, auf die Toxizität von auf Kohlenstoff basierenden Nanostrukturen und einige der früheren Studien schlagen vor, im Zusammenhang akute und chronische Toxizität mit dem Einatmen von CNTs ^63-68 verbunden. Daher vermeiden Einatmen des feinen CNT-Pulver und behandeln sie mit größter Sorgfalt. Falls eingeatmet, an die frische Luft bringen. Bei Atembeschwerden, mit reinem Sauerstoff statt und medizinische Beratung suchen. Lösung / Dispersion Formulierungen von CNTs sind ziemlich sicher zu handhaben.

Achtung: Lipide und Tenside in dieser Studie verwendet werden, sind lebensmittelechten Materialien und somit nicht gefährlich im Allgemeinen, aber sie sind reizend für die Augen und die Haut, und auch leicht entflammbar. Daher alle geeigneten Sicherheitspraktiken wie die Verwendung von en, nutzen Sie bittegineering Kontrollen (Abzug) und persönliche Schutzausrüstung (Schutzbrille, Handschuhe, Kittel, in voller Länge Hosen, geschlossene Schuhe) bei der Handhabung und Herstellung von Nanopartikel-Proben. Bei Berührung mit der Haut oder Augen sofort gründlich Haut oder Augen mit viel Wasser für mindestens 15 Minuten. Arzt aufsuchen, falls erforderlich.

1. Herstellung von Lipid / Wasser Bulkphasen

Achtung: Bewahren Sie die Lipide im Kühlschrank bei 4 ° C. Reiner Qualität Lipide sollten in den Gefrierschrank (-20 ° C) gelagert werden. Aliquotieren sie in kleine Glasfläschchen Kontamination des gesamten Bestand und die Bequemlichkeit der Handhabung zu vermeiden. Andere Chemikalien einschließlich CNTs und Tenside können bei RT gelagert werden, sondern halten sie vor direkter Sonneneinstrahlung schützen.

1. Halten Lipide, also Dimodan U (DU) und Phytantriol (PT) bei RT für 15 bis 20 Minuten vor dem Öffnen der Flasche / Fläschchen Deckel, um Kondensation von Feuchtigkeit zu vermeiden.
   (Anmerkung: DU ist ein destilliertes Glycerid, umfassend 96% Monoglyceride undRest sind Di- und freie Fettsäuren. Zwei Hauptkomponenten Monoglycerid in DU sind Linoleat (62%) und Oleat (25%). Daraus ergibt sich die hydrophobe Teil von DU enthält hauptsächlich C18-Ketten (91%), die genaue Zusammensetzung sich wie folgt ist; C18: 2 (61,9%), C18: 1 (24,9%) und C18: 0 (4,2%), wobei C18 18C-Kette und die Zahl nach dem Doppelpunkt anzeigt, zeigt die Anzahl von C = C-Bindungen. PT ist ein Gemisch von 3,7,11,15-Tetramethyl-1,2,3-hexadecantriol optische Isomere. Sie stellen keine Esterfunktion enthalten, aber aus stark verzweigten phytanyl Schwanz mit einem tri-hydroxy Kopfgruppe. Beide DU und PT bilden kubische Phasen in Gegenwart von überschüssigem Wasser, das ist auch der Fall für die Kerne von stabilisierten Lipidpartikel ^{13, 45).}
2. Schmelzen Sie die Lipide von Fläschchen in ein heißes Wasserbad oder einen Becher mit Wasser gehalten über 60 ° C stellen (Heizung Magnetrührer: 230 V, 50 Hz, 630 W oder ähnliches verwendet werden, um das Wasser in einem Becher zu heizen).
3. Alternativ Wärme Fläschchen Blockheizungen mit. erwärmen, um die Lipid nicht Fläschchen direkt auf der heißen Platte enthält, um Temperaturgradienten und anschließende Lipid Zersetzung zu vermeiden.
4. Man wiegt 500 mg des geschmolzenen Lipids in zuvor gewogenen Mikrozentrifugenröhrchen (mit konischen Schnappkappe, 1,5 ml), einer Pasteurglaspipette mit einem Latex-Lampe verwendet wird.
5. In 500 ml hochreinem Wasser (Wasserwiderstand = 18,2 M & Omega; · cm) zu der obigen Reaktionsgefäß.
6. Mischen Sie die Komponenten manuell für 15 Minuten mit winzigen (custom-built) Spachtel. Machen Sie so einen Spatel durch das scharfe Ende einer Spritzennadel Abflachung (0,9 mm x 40 mm Kanülenlänge) mit einem Zangen.
7. Zentrifuge der Lipid / Wasser-Gemisch für 10 min bei einer Geschwindigkeit von 2000 x g. rühren Mischung erneut manuell für 10 Minuten, dann Gleichgewicht kommen sie für 24 Stunden. Bevor die Proben Charakterisierung, rühren sie für 5 Minuten und dann bei Raumtemperatur lassen.
8. Um die Bildung eines Gleichgewichts Lipidphase im gesamten Rohr gewährleisten, führen etwa 10 Frost-Tau-Zyklen und inte Durchführung rmittently einen Zentrifugationsschritt wie oben definiert. Sowohl die DU und PT Form hochviskose Masse Lipidphasen was es schwierig macht, sie zu handhaben manuell (Abbildung 1).
   Hinweis: Die oben genannten Protokoll (Teil 1) ist nur notwendig, wenn ein Nanostrukturverhalten zu vergleichen möchten (Gittertyp und Dimensionen der Selbstorganisation) von verteilten Teilchen mit der Masse Lipidphase und / oder verwenden Sie es als eine Kontrolle der zu bestätigen Beibehaltung der ursprünglichen Nanostruktur.

Abbildung 1. Herstellung von O / W-Emulsion mit Partikel flüssige Konsistenz von hochviskosen Lipidphase mit hohem Energieeintrag (Ultraschall) und verschiedenen CNT-Stabilisatoren verwendet, nämlich SWCNT, MWCNT-OH, MWCNT-COOH (Bild aus Referenzwiedergegeben [50] mit Genehmigung der Royal Society of Chemistry)._upload / 53489 / 53489fig1large.jpg "target =" _ blank "> Bitte hier klicken, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.

2. Herstellung von Surfactant Stabilisierte Lipidteilchen

1. Bereiten einer 0,2% (w / w) oberflächenaktives Mittel (Pluronic F127) Lösung in Wasser.
   1. Man löst 200 mg des oberflächenaktiven Mittels (weißes flockiges Pulver) in 100 ml ultrareinem Wasser, indem sie es für 20-30 min (auf einer Magnetplatte mit einem magnetischen Rührstab verwendet wird) unter Rühren. Pluronic F127 ist ein nicht-ionisches oberflächenaktives Mittel und wird allgemein als Emulsionsstabilisator eingesetzt. Es ist ein Triblock-Copolymer aus PEO ₉₉ -PPO ₆₇ -PEO _99, und somit nimmt lange Zeit in Wasser auflösen.
2. In 500 mg geschmolzenem DU oder PT in eine Glasampulle (einer Pasteurglaspipette) (Scintillation Kalk-Natron-ausgestattet mit einer Folie ausgekleidet Harnstoff Kappe, 20 ml).
3. Hinzufügen 9,5 g der 0,2% F127 Lösung.
4. Auf der Sonde Ultraschall-Maschine, fest klemmen stehen die Fläschchen zu der Retorte stehen Kiefer (Retorten Set mitstehen, Klemme, Base, Stange, Gummi 3-Backen und Muffe), so dass es die Schwingungen durch Ultraschall erzeugt standhalten kann.
5. Legen Sie die feste Titan-Legierung Sonde (13 mm Durchmesser x 139 mm Länge), die an der Zell Sonicator. Höhe und Position des Fläschchens, um sicherzustellen, dass seine Seiten und dem Boden nicht mit der Sonde berühren. Ein Abstand von 0,5 cm zwischen der Sondenspitze und dem Boden der Glasampulle gute Ergebnisse.
6. Beschallen das Gemisch 10 min in einem gepulsten Modus mit 1 sec Impuls um 1 sec-Verzögerungszeit bei 35% (der maximalen) Leistungs vermittelt. Das Fläschchen wird sehr heiß aufgrund der Hitze während der Beschallung erzeugten. Daher erlauben es auf RT abkühlen, bevor sie aus der Klemme nehmen.
7. Bewahren Sie die milchig-gebildete Dispersion bei Raumtemperatur für mindestens 24 Stunden vor der weiteren Verwendung. Dies ist seine Stabilität gegenüber Phasentrennung zu gewährleisten.
   Hinweis: Vor und nach der Verwendung der Sonde, kann es mit Aceton, trocken mit einem Papiertuch, dann spülen Sie es mit hochreinem Wasser eind trocknen es noch einmal.

3. Herstellung von Dispersionen der reinen CNTs in Wasser

1. In zwei getrennten Becher, wiegen 4 mg in Pulverform MWCNT-OH und MWCNT-COOH, welche beide in der Farbe schwarz sind.
2. In 500 ml hochreinem Wasser in jedes Becherglas. Ultraschallgerät mit einer Sonde, die Mischungen für 2 min in einer kontinuierlichen Impulsmodus bei 40% beschallen (der maximalen) Leistungs. Die resultierende Konzentration des MWCNT Dispersion 8 pg / ml (Stammlösung).
3. Verdünnen Sie die MWCNT Stammlösung mit geeigneten Mengen an hochreinem Wasser zu erreichen, 6.25, 5, 4, 2 ug / ml MWCNT Dispersionen.
4. Beschallen dieser Dispersionen, wie zuvor beschrieben (siehe 3.2).
5. In ähnlicher Weise zerstreuen 3 mg Pulver SWCNT (auch in der Farbe schwarz) in 500 ml hochreinem Wasser, um eine 6 ug / ml SWCNT-Dispersion (Stammlösung) zu machen.
6. Verdünnen Sie die SWCNT-Stammlösung und beschallen sie, wie oben beschrieben (siehe 3.2) 0.5 zu erhalten, 0,4, 0,3125, 0,2 ug / ml SWCNT dispersions.
   Hinweis: Alle Dispersionen sind klar für etwa 30 Minuten, wonach die CNTs beginnen am Boden absetzen.

4. Herstellung von CNT-stabilisierte Nanostrukturierte Lipidteilchen (Abbildung 1)

1. Wiegen in 500 mg des geschmolzenen DU in einem Glasfläschchen.
2. Hinzufügen 9,5 ml der 6 & mgr; g / ml SWCNT Dispersion in das Fläschchen.
3. Beschallen die CNT-DU Gemisch den gleichen Parametern wie für die Herstellung von reinen CNT-Dispersionen (siehe 3.2). Nach Abkühlen auf RT werden die CNT-stabilisierte Lipidpartikel mit konservierten intern selbstorganisierte Nanostruktur wird bereit sein.
4. In ähnlicher Weise stellt die Lipidpartikel, die 0,4 & mgr; g / ml und 0,2 ug / ml SWCNT Dispersionen.
5. Befolgen Sie die Protokolle 4.1 bis 4.4 auf Lipidpartikel mit MWCNT-OH und MWCNT-COOH aber mit unterschiedlichen Konzentrationen, nämlich 8, 4 und 2 ug / ml von CNT machen.
6. Entsprechend wird drei verschiedenen CNT-PT-Dispersionen unter Verwendung von 4 ug / ml MWCNT-OH und MWCNT-COOH Sowie 0,4 ug / ml SWCNT. Beachten Sie, dass die CNT-PT Dispersionen benötigen weniger Leistung (35% des Maximums), aber längere Zeit (15 min) in einer kontinuierlichen Impulsmodus. Kühlen Sie die Dispersionen auf RT und lassen sie für 24 Stunden, bevor sie zu charakterisieren.
   Hinweis: Die Beschallung Parameter für verschiedene Lipide unterscheiden kann (wie DU und PT hier) und für verschiedene Zusammensetzungen; sie müssen gut stabilisierte Dispersionen zu erreichen, optimiert werden.

5. Überwachung der Stabilität des CNT-stabilisierte Lipiddispersionen

1. Überwachen Sie die Stabilität der Dispersionen durch visuelle Beobachtung: prüfen, ob die Dispersionen destabilisiert werden oder wenn Klumpen wurden in den Dispersionen gebildet.
2. Machen Sie Fotos (mit Digitalkamera) in regelmäßigen Abständen. Nehmen Sie zum Beispiel Bilder von Dispersionen jeden Tag in der ersten Woche, dann jeden zweiten Tag für eine Woche einmal pro Woche für die nächsten zwei Wochen, gefolgt von, und schließlich einmal im Monat je nach Anforderung.

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Ergebnisse

Die folgenden Ergebnisse für a) die Stabilität der Dispersionen, b) die Größenverteilung der Lipidpartikel, c) die Art der Selbstorganisation und d) den Nachweis für die Lipid-Beschichtung der CNTs. Die Stabilität von Dispersionen (Abbildung 2) wurde mit einem 5-Megapixel-Kamera mit Autofokus und LED-Blitz überwacht.

Figur 2 ...

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Diskussion

Stabilisierung von Lipidteilchen
Drei verschiedene CNTs werden verwendet, um die Lipiddispersionen zu stabilisieren; zwei davon sind mehrwandige und mit -OH und -COOH-Gruppen funktionalisiert sind, und eine einwandige und nicht funktionalisierten (unberührte) ist. Die CNTs in der Größe variiert wie folgt (Durchmesser x Länge): MWCNT-COOH: 9,5 nm x 1,5 um; MWCNT-OH: 8-15 nm x 50 & mgr; m; SWCNT: 1-2 nm x 1-3 um. Die pulverisierten CNTs wurden in Wasser durch die Sonde Ultraschallbehandlung...

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Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Dimodan U	Danisco	15312	Store at 4 °C. Non-hazardous. Irritant to eyes and skin.
Phytantriol (> 95%, GC)	TCI Europe N.V.	P1674	Store at 4 °C. Non-hazardous. Irritant to eyes and skin.
Single walled Carbon Nanotubes (90%)	Nanostructured & Amorphous Materials, Inc.	1246YJS	Store at room temperature. Away from direct light. Irritating to eyes, skin and respiratory system.
Multi-walled carboxylic acid functionalized Carbon Nanotubes (> 80% Caron basis, > 8% carboxylic acid functionalized)	Sigma-Aldrich Co. LLC	755125	Store at room temperature. Away from direct light. Causes serious eye irritation. May cause respiratory irritation.
Graphitized Multi-walled hydroxy functionalized Carbon Nanotubes (99.9%)	Nanostructured & Amorphous Materials, Inc. (NanoAmor)	1224YJF	Store at room temperature. Away from direct light. Irritating to eyes, skin and respiratory system.
Pluronic F127	Sigma-Aldrich Co. LLC	P2443	BioReagent, suitable for cell culture. Not a hazardous substance or mixture. Store at room temperature.
Acetone (99.5%)	Fisher Scientific	10134100	Highly flammable liquid. Causes serious eye irritation. May cause drowsiness or dizziness.
Jars with loose, enfolding lids (375 ml)	VWR International Ltd	216-3308
Beaker, 1,000 ml	Fisher Scientific	12942161	heavy duty, low form, with spout and graduations
Pasteur glass pipette (150 mm length) with latex bulb	Fisher Scientific	10006021
Microcentrifuge tube conical snap cap 1.5 ml	Fisher Scientific	11558232
Spatula	Fisher Scientific	11352204
Heating magnetic stirrer	Fisher Scientific	11715704
Magnetic stirrer bars (cylindrical, opaque PTFE, 30 mm x 7 mm (l x diameter))	Fisher Scientific	10011792
Needle (0.9 mm x 40 mm cannula length)	Terumo UK Ltd	MN-2038MQ
Retort Stand Set - With stand, clamp, base, rod, rubber 3 jaw and bosshead	Camlab Ltd, UK	1177157
Millipore water equipment	Barnstead Nanopure, Thermoscientific, USA
Progen Genfuge 24D Digital Microcentrifuge	Progen Scientific	C-2400
Probe ultra-sonicator, with 13 mm	SONICS, Vibracell,  USA
5 MP camera with auto-focus and LED flash	Samsung Galaxy Fame Mobile camera
Raman Spectrometer	Horiba Jobin-Yvon LabRAM HR800 spectrometer
Mastersizer 3000	Malvern Instruments Ltd, Malvern, United Kingdom
Small angle X-ray scattering (SAXS)	SAXSpace camera (Anton Paar, Graz, Austria), X-ray generating equipment (ISO-DEBYEFLEX3003, GE Inspection Technologies GmbH), closed water circuit (Chilly 35, HYFRA, Germany).