Zerkleinern Sie zunächst die medizinischen Materialien Pheretima, Periplaneta americana und Hirudo mit einer Kräutermühle. Sieben Sie das medizinische Pulver durch Standard-Medikamentensiebe Nummer zwei und Nummer vier. Sammeln Sie das Pulver zwischen den beiden Sieben, um das erforderliche Probenpulver zu erhalten.
Nehmen Sie ein Gramm des Pulvers in ein 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen aus Kunststoff. 20 Milliliter 5%ige Trichloressigsäurelösung zugeben und bei 1.000 U/min eine Minute lang mit einem Hochgeschwindigkeits-Dispersionshomogenisator homogenisieren. Nach der Homogenisierung wird das Homogenat bei 1,717 G fünf Minuten lang bei Raumtemperatur zentrifugiert und der Überstand durch einen absorbierenden, in Watte getauchten Glastrichter in einen 50-Milliliter-Messkolben filtriert.
Nach zweimaliger Wiederholung des Extraktionsvorgangs mit 15 und 10 Millilitern 5%iger Trichloressigsäurelösung werden die Filtrate kombiniert und das Volumen mit 5%iger Trichloressigsäurelösung auf 50 Milliliter aufgefüllt. Als nächstes fügen Sie genau zwei Milliliter Natronlauge und 0,5 Gramm festes Paraffin in 20-Milliliter-Headspace-Fläschchen hinzu. Anschließend für ca. 30 Minuten bei 70 Grad Celsius in den Ofen schieben.
Nehmen Sie die Fläschchen heraus und lassen Sie sie auf Raumtemperatur abkühlen, damit sich das Paraffin verfestigt. Um den Kopfraum der Probe zu verarbeiten, geben Sie zwei Milliliter jeder Probenextraktionslösung in die erstarrten, paraffinhaltigen Fläschchen. Drücken Sie auf die Kappe und verschließen Sie die Durchstechflasche.
Legen Sie die versiegelten Headspace-Fläschchen zur Messung auf das GCMS. Um die Standardkurve zu erhalten, wird eine Reihe von zwei Millilitern Trimethylamin-Standardlösung auf die erstarrte Paraffinschicht aufgesaugt. Setzen Sie die versiegelten Headspace-Fläschchen zur Trimethylaminmessung auf das Gerät.
Um den Präzisionstest durchzuführen, werden zwei Milliliter 0,1 Mikrogramm pro Milliliter Trimethylamin-Standardlösung auf die erstarrte Paraffinschicht aufgesaugt. Führen Sie sechs parallele Tests in der Maschine gemäß den Anweisungen des Herstellers durch. Für das Experiment mit der Wiederfindungsrate werden mehrere Chargen des Probenpulvers in einem Ofen gebacken, bis kein Triethylamin mehr im GCMS nachgewiesen wird, wie zuvor gezeigt.
Als nächstes gibst du jedes Gramm ofengebackenes und feinkörniges Pulver in separate 50-Milliliter-Zentrifugenröhrchen aus Kunststoff. Geben Sie 50 Mikroliter Trimethylamin-Standardlösung in alle Röhrchen und extrahieren Sie mit 5%iger Trichloressigsäurelösung, wie zuvor gezeigt. Es wurde festgestellt, dass die Retentionszeit von Trimethylamin 2,3 Minuten mit einem scharfen Peak und keiner Störung durch andere Verunreinigungen beträgt.
Pheretima-, Periplaneta americana- und Hirudo-Proben, die durch Trocknung zur Reduzierung von Triethylamin in den Kräutern Spiked-Recovery-Tests unterzogen wurden, zeigten durchschnittliche Wiederfindungsraten von 84,49, 94,66 bzw. 85,67 %. Triethylamin wurde in neun Chargen von Kräutern mit Konzentrationen von 13,23 bis 271,63 Milligramm pro Kilogramm nachgewiesen.
