Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der National Natural Science Foundation of China (82173991) und des Sichuan Science and Technology Program (2022YFS0442) unterstützt.

Siehe Tabelle 1 für Informationen über die medizinischen Materialien von Pheretima, Periplaneta americana und Hirudo. Sie wurden von Prof. Xu Runchun von der Chengdu University of Traditional Chinese Medicine als die getrockneten Körper von Pheretima aspergillum (E.Perrier), Periplaneta americana L. und Whitmania pigra Whitman identifiziert.
1. Probenentnahme
<ol><li>Zerkleinern Sie Pheretima, Periplaneta americana und Hirudo mit einem Kräutermahlwerk (siehe Materialtabelle), sieben Sie das medizinische Pulver durch die Standard-Medikamentensiebe Nr. 2 (Sieböffnung: 0,8 mm) und Nr. 4 (Sieböffnung: 0,25 mm) und sammeln Sie das Pulver zwischen den beiden Sieben, um das erforderliche Probenpulver zu erhalten. HINWEIS: Die Pheretima ist nach dem Zerkleinern fluffig, so dass ihr Pulver nicht gesiebt werden muss.</li>
	<li>Nehmen Sie 1 g Pulver (auf 0,001 g genau) in ein 50-ml-Kunststoffzentrifugenröhrchen, fügen Sie 20 ml 5%ige Trichloressigsäure (TCA)-Lösung hinzu (siehe Materialtabelle) und homogenisieren Sie bei 1.000 rmin-1 für 1 Minute mit einem Hochgeschwindigkeits-Dispersionshomogenisator.</li>
	<li>Nach der Homogenisierung wird bei 1.717 x g 5 min bei Raumtemperatur zentrifugiert, ein wenig saugfähige Watte in den Glastrichter gegeben und der Überstand in einen 50-ml-Messkolben filtriert.</li>
	<li>Wiederholen Sie den obigen Extraktionsvorgang zweimal mit 15 ml und 10 ml 5%iger TCA-Lösung. Kombinieren Sie das Filtrat und verdünnen Sie es auf 50 ml mit 5%iger TCA-Lösung.</li>
</ol>2. Vorbereitung der Reagenzien
<ol><li>20%ige Natronlauge herstellen: 20 g Natronlauge abwiegen und mit deionisiertem Wasser das Volumen in einem 100-ml-Messkolben fixieren.</li>
	<li>5%ige TCA-Lösung vorbereiten: 25 g TCA abwiegen und mit deionisiertem Wasser das Volumen in einem 500-ml-Messkolben fixieren.</li>
</ol>3. Herstellung der TMA-Standardstammlösung
<ol><li>Bereiten Sie TMA-Standardstammlösung vor: 0,0162 g TMA-Hydrochlorid-Standardprobe werden abgewogen, in 5%iger TCA-Lösung aufgelöst und das Volumen auf 100 ml festgelegt, was der Konzentration von 100 μg/ml TMA-Standardstammlösung entspricht. Bei 4 °C lagern.</li>
	<li>Bereiten Sie TMA-Standardlösung vor: Nehmen Sie ein bestimmtes Volumen TMA-Standardstammlösung und verdünnen Sie es Schritt für Schritt mit 5%iger TCA-Lösung auf Konzentrationen von 0,1 μg/ml, 0,5 μg/ml, 1 μg/ml, 2 μg/ml, 5 μg/ml und 10 μg/ml TMA-Standardlösung.</li>
</ol>4. Headspace-Verarbeitung der Probe
<ol><li>2 ml Natronlauge und 0,5 g festes Paraffin (Schmelzpunkt: 58-60 °C) werden in einem 20-ml-Headspace-Fläschchen genau abgewogen (siehe Materialtabelle).</li>
	<li>Die Durchstechflasche mit Kopfraum für ca. 30 min bei 70 °C in den Ofen geben. Das feste Paraffin schmilzt vollständig.</li>
	<li>Nehmen Sie es heraus und lassen Sie es auf Raumtemperatur abkühlen, damit das Paraffin erstarrt. Das erstarrte Paraffin versiegelt Natriumhydroxid.</li>
	<li>Nehmen Sie 2 ml jeder Probenextraktionslösung und geben Sie sie auf die Paraffinschicht, drücken Sie die Kappe und versiegeln Sie.</li>
	<li>Legen Sie das versiegelte Headspace-Fläschchen zur Messung auf das Gerät (siehe Materialtabelle).</li>
</ol>5. Einstellung der HS-GC-MS/MS-Analysebedingungen
<ol><li>Siehe Tabelle 2 für Headspace-Bedingungen und GC-MS-Bedingungen.</li>
	<li>Siehe Tabelle 3 für Ioneninformationen.</li>
</ol>6. Standard-Kurvenzeichnung
<ol><li>Beziehen Sie sich auf die Headspace-Probenverarbeitung in den Schritten 4.1 bis 4.3, um das Headspace-Fläschchen mit Lauge und Paraffinversiegelung vorzubereiten.</li>
	<li>2 ml 0,1 μg/ml, 0,5 μg/ml, 1 μg/ml, 2 μg/ml, 5 μg/ml und 10 μg/ml TMA-Standardlösung in eine 20-ml-Headspace-Durchstechflasche einatmen, die Kappe verschließen und auf dem Gerät messen.</li>
</ol>7. Präzisionsprüfung
<ol><li>Beziehen Sie sich auf die Proben-Headspace-Verarbeitung in den Schritten 4.1 bis 4.3, um das Headspace-Fläschchen mit Lauge und die Paraffinversiegelungsschicht vorzubereiten.</li>
	<li>2 ml 0,1 μg/ml TMA-Standardlösung in ein 20-ml-Headspace-Fläschchen geben und die Kappe verschließen. Führen Sie sechs parallele Tests in der Maschine gemäß den Anweisungen des Herstellers durch (siehe Werkstofftabelle).</li>
</ol>8. Experiment zur Wiederfindungsrate
<ol><li>Man nehme eine Ladung Pheretima, Periplaneta Americana und Hirudo (S02, S05, S07; Tabelle 1) als repräsentative Arzneimittel für das Experiment zur Wiederfindungsrate.</li>
	<li>Nehmen Sie mehrere Chargen Probenpulver (S02, S05, S07) und backen Sie sie in einem Ofen bei 50 °C für 72 Stunden, bis kein TMA mehr nachgewiesen wird.</li>
	<li>Beziehen Sie sich auf die Probenvorbereitungsmethode in den Abschnitten 4-6, um den Gehalt an TMA in gebackenem Medizinpulver nachzuweisen.</li>
	<li>Nehmen Sie 1 g gebackenes Pulver (auf 0,001 g genau), geben Sie es in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen aus Kunststoff und fügen Sie 50 μl TMA-Standardlösung hinzu. HINWEIS: Die Konzentration der TMA-Standardlösung beträgt 100 μg/ml, 1000 μg/ml und 10000 μg/ml.</li>
	<li>20 ml 5%ige TCA-Lösung zugeben und bei 1000 rmin-1 für 1 min homogenisieren.</li>
	<li>Nach der Homogenisierung wird bei 1717 x g 5 min zentrifugiert, etwas saugfähige Watte in den Glastrichter gegeben und der Überstand in einen 50-ml-Messkolben filtriert.</li>
	<li>Wiederholen Sie den obigen Extraktionsvorgang zweimal mit 15 ml und 10 ml 5%iger TCA-Lösung; Kombinieren Sie das Filtrat und verdünnen Sie es auf 50 ml mit 5%iger TCA-Lösung.</li>
</ol>9. Bestimmung der Nachweisgrenzen (LOD) und Quantifizierung (LOQ)
<ol><li>Bestimmen Sie die Detailgenauigkeit anhand der entsprechenden Konzentration, wenn das Signal-Rausch-Verhältnis (S/N) = 3 ist.</li>
	<li>Bestimmen Sie die LAQ durch die entsprechende Konzentration, wenn die S/N = 10 ist.</li>
</ol>10. Bestimmung des TMA-Gehalts der Probe
<ol><li>Nehmen Sie etwa 1 g feines Pulver von Pheretima, Periplaneta americana bzw. Hirudo, extrahieren Sie die Probe gemäß der obigen Methode und bestimmen Sie sie auf der Maschine.</li>
</ol>

Trimethylamin-Nachweis in der tierischen Medizin mittels Headspace-GC-MS

<ol>
	<li>Fan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Material+basis+of+stench+of+animal+medicine:+a+review.">Material basis of stench of animal medicine: a review.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 47 (20), 5452-5459 (2022).</li><li>Deng, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+on+formation+and+taste-masking+technology+of+stench+of+animal+medicines.">Progress on formation and taste-masking technology of stench of animal medicines.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (10), 2353-2359 (2020).</li><li>Casaburi, A., Piombino, P., Nychas, G. J., Villani, F., Ercolini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+populations+and+the+volatilome+associated+to+meat+spoilage.">Bacterial populations and the volatilome associated to meat spoilage.</a> Food Microbiology. 45 (Pt A), 83-102 (2015).</li><li>Rouger, A., Tresse, O., Zagorec, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+contaminants+of+poultry+meat:+sources,+species,+and+dynamics.">Bacterial contaminants of poultry meat: sources, species, and dynamics.</a> Microorganisms. 5 (3), 50 (2017).</li><li>Bali&#241;o-Zuazo, L., Barranco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+liquid+chromatography-mass+spectrometric+method+for+the+simultaneous+determination+of+trimethylamine,+dimethylamine+and+methylamine+in+fishery+products.">A novel liquid chromatography-mass spectrometric method for the simultaneous determination of trimethylamine, dimethylamine and methylamine in fishery products.</a> Food Chemistry. 196, 1207-1214 (2016).</li><li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-efficient+trimethylamine+gas+sensor+based+on+Au+nanoparticles+sensitized+WO3+nanosheets+for+rapid+assessment+of+seafood+freshness.">Ultra-efficient trimethylamine gas sensor based on Au nanoparticles sensitized WO3 nanosheets for rapid assessment of seafood freshness.</a> Food Chemistry. 392, 133318 (2022).</li><li>Bota, G. M., Harrington, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+detection+of+trimethylamine+in+meat+food+products+using+ion+mobility+spectrometry.">Direct detection of trimethylamine in meat food products using ion mobility spectrometry.</a> Talanta. 68 (3), 629-635 (2006).</li><li>Neyer, P., Bernasconi, L., Fuchs, J. A., Allenspach, M. D., Steuer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivatization-free+determination+of+short-chain+volatile+amines+in+human+plasma+and+urine+by+headspace+gas+chromatography-mass+spectrometry.">Derivatization-free determination of short-chain volatile amines in human plasma and urine by headspace gas chromatography-mass spectrometry.</a> Journal of Clinical Laboratory Analysis. 34 (2), e23062 (2020).</li><li>Mitsubayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trimethylamine+biosensor+with+flavin-containing+monooxygenase+type+3+(FMO3)+for+fish-freshness+analysis.">Trimethylamine biosensor with flavin-containing monooxygenase type 3 (FMO3) for fish-freshness analysis.</a> Sensors &amp; Actuators B: Chemical. 103 (1-2), 463-467 (2004).</li><li>National Health and Family Planning Commission of the People's Republic of China. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> GB 5009. 179-2016. , 12 (2016).</li><li>Liu, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+on+material+basis+and+processing+principle+of+fishy+smell+of+Pheretima+aspergillum+by+electronic+nose+and+HS-GC-MS.">Study on material basis and processing principle of fishy smell of Pheretima aspergillum by electronic nose and HS-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 26 (12), 154-161 (2020).</li><li>Zheng, X., Sun, F., Du, L., Huang, Y., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+on+changes+of+volatile+components+in+Gecko+before+and+after+processing+by+HS-SPME-GC-MS.">Comparison on changes of volatile components in Gecko before and after processing by HS-SPME-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 28 (15), 145-152 (2022).</li><li>Yoshiharu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Odor olfactory measurement. , (2004).</li><li>Jia, Z. W., Mao, B. P., Miao, S., Mao, X. H., Ji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+sulfur+dioxide+residues+in+sulfur+fumigated+Chinese+herbs+with+headspace+gas+chromatography.">Determination of sulfur dioxide residues in sulfur fumigated Chinese herbs with headspace gas chromatography.</a> Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (2), 277-281 (2014).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Arzneimittel tierischen Ursprungs stammen aus dem ganzen Körper, aus Organen oder Geweben, aus physiologischen oder pathologischen Produkten, aus Ausscheidungen oder Sekreten und aus verarbeiteten Produkten von Tieren. TMA ist eine wichtige Quelle für fischigen Geruch in Arzneimitteln tierischen Ursprungs. Es handelt sich um eine typische übelriechende Substanz mit einer sehr niedrigen Riechschwelle (0,000032 × 10-6 V/V) und einem starken Fischgeruch13. Derzeit kann die gängige HS-...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated from:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
Haozhou Huang2 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin3 
Xiaoming Bao4 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
3TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4Shimadzu (China) Co., Ltd
to:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
JiaBao Liao2 
Haozhou Huang3 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin4 
Xiaoming Bao5 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2China Resources Sanjiu Modern Chinese Medicine Pharmaceutical Co., Ltd 
3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
5Shimadzu (China) Co., Ltd

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated.

Erratum: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

Die Behandlung menschlicher Krankheiten durch die Verwendung von Produkten, die aus tierischen Teilen und/oder deren Nebenprodukten gewonnen werden (hier als Arzneimittel tierischen Ursprungs bezeichnet), erhält zunehmend Aufmerksamkeit. Sie spielen eine wichtige Rolle bei der Behandlung von Krebs, Herz-Kreislauf-Erkrankungen, Leberzirrhose, Mastitis und anderen Krankheiten, mit den Vorteilen einer starken Wirkung, einer geringen Dosierung und einer signifikanten und spezifischen klinischen Wirksamkeit. Tierische Arzneimittel haben jedoch im Allgemeinen einen ausgeprägten Fischgeruch, der die Compliance der Patienten stark beeinträchtigt und besonders für Kinder ungünstig ist 1,2. Der fischige Geruch kommt hauptsächlich von den Proteinen, Aminosäuren, Fetten und anderen Substanzen, die im Arzneimittel enthalten sind, die durch Fettsäureoxidation, Aminosäureabbau und andere Wege zersetzt werden, um eine Vielzahl von Substanzen mit einem fischigen Geruch zu produzieren 2,3,4. Unter ihnen ist Trimethylamin (TMA) ein flüchtiges Gas mit einem fischigen Geruch, das in verrottenden oder verdorbenen tierischen Lebensmitteln weit verbreitet ist5.
Bisher wurden Gaschromatographie (GC), Flüssigkeitschromatographie (LC), Ionenchromatographie, Spektrophotometrie, Flüssigkeitschromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS) und Sensormethoden verwendet, um TMA in der Umwelt, in Lebensmitteln und im Urin nachzuweisen 6,7,8,9. Angesichts der geringen Kontamination der GC-Säule und des Injektionssystems sowie der hohen Sensitivität, Reproduzierbarkeit und niedrigen Nachweisgrenze (0,1-1 mg/kg) wurde die Headspace-Gaschromatographie-Massenspektrometrie (HS-GC-MS) für die Lebensmittel- und biologische Analytik bevorzugt8. Derzeit hat nur China einen nationalen Standard für TMA in Lebensmitteln festgelegt, und HS-GC-MS ist die erste Methode in der Norm GB5009.179-201610. Daher wurde die oben beschriebene HS-GC-MS-Methode ausgewählt, um TMA in tierischen Arzneimitteln nachzuweisen. In einem frühen Stadium fand unsere Forschungsgruppe heraus, dass der HS-GC-MS-Nachweisstandard für TMA in Lebensmitteln den Fischgeruch in mehreren tierischen Arzneimitteln nachweisen kann. In Kombination mit den Ergebnissen der Studien11,12 konnte nachgewiesen werden, dass TMA die häufigste Schlüsselsubstanz des Fischgeruchs in tierischen Arzneimitteln ist. Es zeigte sich jedoch, dass die Reproduzierbarkeit der experimentellen Ergebnisse schlecht war und es Probleme wie TMA-Entweichen und schlechte Stabilität gab, die durch die Methodik nicht verifiziert werden konnten. Dies könnte darauf zurückzuführen sein, dass die Lauge in das Headspace-Fläschchen injiziert wurde und die schnelle Säure-Base-Reaktion zu einem erhöhten Druck im Fläschchen führte, wodurch TMA aus der Injektionspore entwich, was den stabilen und genauen Nachweis von TMA verhinderte. Daher wurde in dieser Studie eine verbesserte Detektionsmethode der Headspace-Gaschromatographie-Tandem-Quadrupol-Massenspektrometrie (HS-GC-MS/MS) vorgeschlagen, um diese Probleme anzugehen.
Das Protokoll verbessert die Probenvorbehandlung, indem die Säure-Base-Reaktanten in der Vorbehandlung mit Hilfe von festem Paraffin, einem guten Fest-Flüssig-Phasenwechselmaterial, getrennt werden. Als sich das Paraffin mit dem Temperaturanstieg des thermostatischen Ofens langsam verflüssigte, wurde TMA auch langsam in der versiegelten Headspace-Durchstechflasche freigesetzt, wodurch der durch die heftige und schnelle Säure-Base-Reaktion verursachte Druckanstieg vermieden und ein stabiler und genauer TMA-Nachweis gewährleistet wurde. Darüber hinaus unterdrückte die Headspace-Injektion in Kombination mit MRM-Modi (Multiple Reaction Monitoring) in GC-MS/MS effektiv chemische Interferenzen in der Matrix und stellte die Zuverlässigkeit der Ergebnisse sicher. Die Ergebnisse der methodischen Validierung zeigten, dass die Linearität, der Präzisionstest und die Wiederfindungsrate der verbesserten Detektionsmethode die Anforderungen mit guter Reproduzierbarkeit und hoher Empfindlichkeit erfüllen können.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman Coulter Trading (China) Co.</td>
			<td>SSC-2-0213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chinese herbal medicine grinder</td>
			<td>Zhejiang Yongkang Xi&#39;an Hardware and Pharmaceutical Factory</td>
			<td>HX-200K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Convection oven</td>
			<td>Sanyo Electric Co., Ltd</td>
			<td>MOV-112F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decapper for 20 mm Aluminum caps</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>V1750004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic balance</td>
			<td>Shimadzu Corporation Japan</td>
			<td>AUW220D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatography mass spectrometry</td>
			<td>Shimadzu Corporation Japan</td>
			<td>TQ-8050 NX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Headspace Vial</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>25760200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer</td>
			<td>Shanghai biaomo Factory</td>
			<td>FJ200-SH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Preassembled Cap</td>
			<td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc</td>
			<td>L4150050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample sieve</td>
			<td>Zhenxing Sieve Factory</td>
			<td>/</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SH-Volatile Amine</td>
			<td>Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd</td>
			<td>227-3626-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd</td>
			<td>2022101401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid paraffin wax</td>
			<td>Shanghai Hualing Kangfu apparatus factory</td>
			<td>20221112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichloroacetic acid</td>
			<td>Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd</td>
			<td>2022102001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethylamine hydrochloride</td>
			<td>Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>AF22022108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-pure water system</td>
			<td>Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd</td>
			<td>UPR-11-5T</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved technique for trimethylamine detection in animal-derived medicine by headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry

Arzneimittel tierischen Ursprungs haben charakteristische Eigenschaften und signifikante heilende Wirkungen, aber die meisten von ihnen haben einen offensichtlichen Fischgeruch, was zu einer schlechten Compliance der klinischen Patienten führt. Trimethylamin (TMA) ist eine der wichtigsten Bestandteile des fischigen Geruchs in der tierischen Medizin. Es ist schwierig, TMA mit der bestehenden Nachweismethode genau zu identifizieren, da der erhöhte Druck im Headspace-Fläschchen durch die schnelle Säure-Base-Reaktion nach der Zugabe von Lauge verursacht wird, was dazu führt, dass TMA aus dem Headspace-Fläschchen entweicht und den Forschungsfortschritt des fischigen Geruchs von tierischen Arzneimitteln zum Stillstand bringt. In dieser Studie schlugen wir eine kontrollierte Nachweismethode vor, bei der eine Paraffinschicht als Isolationsschicht zwischen Säure und Lauge eingeführt wurde. Die Geschwindigkeit der TMA-Produktion konnte durch langsame Verflüssigung der Paraffinschicht durch thermostatische Ofenheizung effektiv gesteuert werden. Diese Methode zeigte zufriedenstellende Linearität, Präzisionsexperimente und Wiederfindungen mit guter Reproduzierbarkeit und hoher Empfindlichkeit. Sie leistete technische Unterstützung bei der Desodorierung von Arzneimitteln tierischen Ursprungs.

Treating human diseases by utilizing products derived from animal parts and/or their by-products (referred to here as animal-derived medicines) is receiving increased attention. They play an important role in treating cancer, cardiovascular disease, liver cirrhosis, mastitis, and other diseases, with the advantages of a strong effect, small dosage, and significant and specific clinical efficacy. However, animal-derived medicines generally have a prominent fishy odor, which greatly affects patients&#39; compliance, and are especially unfavorable for children1,2. The fishy odor mainly comes from the proteins, amino acids, fats, and other substances contained in the medicine, which are decomposed through fatty acid oxidation, amino acid degradation, and other ways to produce a variety of substances with a fishy odor2,3,4. Among them, trimethylamine (TMA) is a volatile gas with a fishy odor that widely exists in rotting or rotten animal-derived foods5.
Until now, gas chromatography (GC), liquid chromatography (LC), ion chromatography, spectrophotometry, liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), and sensor methods have commonly been used to detect TMA in the environment, food, and urine6,7,8,9. In view of the low contamination of the GC column and injection system, as well as the high sensitivity, reproducibility, and low detection limit (0.1-1 mg/kg), the headspace gas chromatography-mass spectrometry (HS-GC-MS) method was preferred for food and biological analysis8. At present, only China has established a national standard for TMA in food, and HS-GC-MS is the first method in the GB5009.179-2016 standard10. Therefore, the above HS-GC-MS method was selected to detect TMA in animal-derived medicine. In the early stage, our research group found that the HS-GC-MS detection standard for TMA in food could detect the fishy odor in several animal-derived medicines. Combined with the results of the studies11,12, it could be proved that TMA is the common key substance of fishy odor in animal-derived medicines. However, it was found that the reproducibility of the experimental results was poor, and there were problems such as TMA escape and poor stability, which could not be verified by the methodology. This could be due to the fact that the lye was injected into the headspace vial and the rapid acid-base reaction led to increased pressure in the vial, thus TMA escaped from the injection pore, preventing the stable and accurate detection of TMA. Therefore, this study proposed an improved headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry (HS-GC-MS/MS) detection method to address these problems.
The protocol improves the sample pretreatment by separating the acid-base reactants in the pretreatment with the help of solid paraffin, a good solid-liquid phase change material. As the paraffin slowly liquefied with the temperature rise of the thermostatic furnace, TMA was also slowly released in the sealed headspace vial, avoiding the pressure increase caused by the violent and rapid acid-base reaction and ensuring stable and accurate TMA detection. Further, the headspace injection combined with multiple reaction monitoring (MRM) modes) in GC-MS/MS effectively suppressed matrix chemical interference and ensured the reliability of the results. The results of the methodological validation proved that the linearity, precision test, and recovery rate of the improved detection method could meet the requirements, with good reproducibility and high sensitivity.

Autor im Rampenlicht: Eine verbesserte Technik zum Nachweis von Trimethylamin in der tierischen Medizin durch Headspace-Gaschromatographie-Tandem-Quadrupol-Massenspektrometrie  

Eine verbesserte Technik zum Nachweis von Trimethylamin in der Tierarzneimittel mittels Headspace-Gaschromatographie-Tandem-Quadrupol-Massenspektrometrie

The scope of our research is a material basis in the variation of fish odor in animal medicine. This protocol provides a simple pretreatment method and accurate detection of trimethylamine in animal medicines. The simple pretreatment methods and the programmed parameters of HS-GC mass/mass of this protocol, need to be further optimized, and we still have a lot of work to do.Our protocol adopts the multi-direction monitoring mode of GC mass/mass, combined with a unique, simple pretreatment, which is not only the first pretreatment for trimethylamine analysis, but also the first analytical mode to be used.

Schematische Diagramme des Vorverarbeitungsprinzips und der Funktionsweise dieses Protokolls sind in Abbildung 1 bzw. Abbildung 2 dargestellt. Die Peakzeit der TMA betrug 2,3 Minuten, mit einer scharfen Peakform und ohne Interferenzen durch andere Verunreinigungen (Abbildung 3). Bei der Messung des linearen Bereichs von 0,1-10 μg/ml TMA-Standardlösung mit der TMA-Konzentration als Abszisse und der Peakfläche als Ordinate wurde ei...

Watch this Scientific Journal Video about An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry at JoVE.com

Hier wird eine Headspace-Gaschromatographie-Tandem-Quadrupol-Massenspektrometrie-Methode (HS-GC-MS/MS) beschrieben, die für die Bestimmung von Trimethylamin (TMA) in tierischen Arzneimitteln geeignet ist. Das Protokoll umfasst die Vorbehandlung der Proben, die Headspace-Behandlung, die Analysebedingungen, die methodische Validierung und die Bestimmung der TMA in Arzneimitteln tierischen Ursprungs.

Animal-derived medicines have distinctive characteristics and significant curative effects, but most of them have an obvious fishy odor, resulting in the ...

Der Umfang unserer Forschung ist eine wesentliche Grundlage für die Variation von Fischgeruch in der Tiermedizin. Dieses Protokoll bietet eine einfache Vorbehandlungsmethode und einen genauen Nachweis von Trimethylamin in Tierarzneimitteln. Die einfachen Vorbehandlungsmethoden und die programmierten Parameter von HS-GC Masse/Masse dieses Protokolls müssen weiter optimiert werden, und wir haben noch viel Arbeit vor uns.Unser Protokoll verwendet den multidirektionalen Überwachungsmodus von GC-Masse/Masse, kombiniert mit einer einzigartigen, einfachen Vorbehandlung, die nicht nur die erste Vorbehandlung für die Trimethylaminanalyse ist, sondern auch der erste analytische Modus, der verwendet wird.

an-improved-technique-for-trimethylamine-detection-animal-derived

Research

JoVE Journal

Chemistry

An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

1.3K Aufrufe.  Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. Der Umfang unserer Forschung ist eine wesentliche Grundlage für die Variation von Fischgeruch in der Tiermedizin. Dieses Protokoll bietet eine einfache Vorbehandlungsmethode und einen genauen Nachweis von Trimethylamin in Tierarzneimitteln. Die einfachen Vorbehandlungsmethoden und die programmierten Parameter von HS-GC Masse/Masse dieses Protokolls müssen weiter optimiert werden, und wir haben noch viel Arbeit vor uns.Unser Protokoll verwendet den multidirektionalen Überwachungsmodu...

Serie: Autor im Rampenlicht: Eine verbesserte Technik zum Nachweis von Trimethylamin in der tierischen Medizin durch Headspace-Gaschromatographie-Tandem-Quadrupol-Massenspektrometrie  

Animal-derived medicines have distinctive characteristics and significant curative effects, but most of them have an obvious fishy odor, resulting in the poor compliance of clinical patients. Trimethylamine (TMA) is one of the key fishy odor components in animal-derived medicine. It is difficult to identify TMA accurately using the existing detection method due to the increased pressure in the headspace vial caused by the rapid acid-base reaction after the addition of lye, which causes TMA to escape from the headspace vial, stalling the research progress of the fishy odor of animal-derived medicine. In this study, we proposed a controlled detection method that introduced a paraffin layer as an isolation layer between acid and lye. The rate of TMA production could be effectively controlled by slowly liquefying the paraffin layer through thermostatic furnace heating. This method showed satisfactory linearity, precision experiments, and recoveries with good reproducibility and high sensitivity. It provided technical support for the deodorization of animal-derived medicine.

Here, a headspace gas chromatography-tandem quadrupole mass spectrometry (HS-GC-MS/MS) method suitable for the determination of trimethylamine (TMA) in animal-derived medicines is described. The protocol includes sample pretreatment, headspace treatment, analysis conditions, methodological validation, and the determination of TMA in animal-derived medicines.

Forschung

Chemie

Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace GC-MS

To begin, crush the medicinal materials Pheretima, Periplaneta americana, and Hirudo with an herbal grinder. Sift the medicinal powder through standard drug sieves of number two and number four. Collect the powder between the two sieves to obtain the required sample powder.Take one gram of the powder in a 50 milliliter plastic centrifuge tube. Add 20 milliliters of 5%trichloroacetic acid solution and homogenize at 1, 000 RPM for one minute with a high speed dispersion homogenizer. After homogenization, centrifuge the homogenate at 1, 717 G for five minutes at room temperature and filter the supernatant through an absorbent cotton-dipped glass funnel into a 50 milliliter volumetric flask.After repeating the extraction process twice with 15 and 10 milliliters of 5%trichloroacetic acid solution, combine the filtrates and make up the volume to 50 milliliters with 5%trichloroacetic acid solution. Next, accurately add two milliliters of sodium hydroxide solution and 0.5 grams of solid paraffin in 20 milliliter headspace vials. Then place them in an oven at 70 degrees Celsius for about 30 minutes.Take the vials out and let them cool down to room temperature so that the paraffin solidifies. To process the sample headspace, add two milliliters of each sample extraction solution to the solidified paraffin containing vials. Press the cap and seal the vial.Put the sealed headspace vials on the GCMS for measurement. To obtain the standard curve, aspirate a series of two milliliters of trimethylamine standard solution on top of the solidified paraffin layer. Put the sealed headspace vials on the machine for trimethylamine measurement.To perform the precision test, aspirate two milliliters of 0.1 micrograms per milliliter trimethylamine standard solution on top of the solidified paraffin layer. Carry out six parallel tests in the machine following the manufacturer's instructions. For the recovery rate experiment, bake several batches of the sample powder in an oven until no triethylamine is detected in GCMS as demonstrated previously.Next, take each one gram of oven baked and fineable powder into separate 50 milliliter plastic centrifuge tubes. Add 50 microliters of trimethylamine standard solution to all the tubes and extract with 5%trichloroacetic acid solution as demonstrated previously. The retention time of trimethylamine was found to be 2.3 minutes with a sharp peak and no interference from other impurities.Pheretima, Periplaneta americana, and Hirudo samples subjected to spiked recovery tests by drying to reduce triethylamine in the herbs showed average recovery rates of 84.49, 94.66, and 85.67%respectively. Triethylamine was detected in nine batches of herbs with concentrations ranging from 13.23 to 271.63 milligrams per kilogram.