Um mit der Zelltransfektion zu beginnen, geben Sie 20 Mikroliter der HeLa-Zellsuspension in die 384-Well-Plattenwells, die verdünnte siRNA enthalten, um 700 HeLa-Zellen pro Well zu besiedeln. Nach einer Stunde Inkubation bei Raumtemperatur wird die Well-Platte für 72 Stunden bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid in einen Inkubator gelegt. Um BrdU in die transfizierten Zellen einzubauen, fügen Sie nach 56-stündiger siRNA-Transfektion 10 Mikroliter 90-Mikromolare BrdU-Lösung in jede Vertiefung hinzu.
Inkubieren Sie die Zellen 16 Stunden lang bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid. Die Spezifität der BrdU-Inkorporation in die mitochondriale DNA von HeLa-Zellen wurde anhand von rho0-Zellen untersucht, denen die mitochondriale DNA fehlte.
