Um mit der Markierung der Mitochondrien zu beginnen, bereiten Sie eine 20-Mikromolare Lösung von BrdU in DMEM mit 10%igem fötalem Kälberserum oder FBS vor. Fügen Sie dann den Mitochondrien-Tracking-Farbstoff hinzu, um die Endkonzentration auf 1,1 Mikromolaren einzustellen. Geben Sie nach 15 Stunden 10 Mikroliter der Mitochondrien-Tracking-Farbstofflösung in die HeLa-Zellsuspension, die Vertiefungen enthält.
Inkubieren Sie die Zellen eine Stunde lang. Die Bedingungen, unter denen neu synthetisierte DNA-Moleküle mit BrdU markiert wurden, ermöglichten den Nachweis von BrdU-markierter DNA in den Mitochondrien von HeLa-Zellen. Das Signal, das mit Anti-BrdU-Antikörpern erhalten wurde, war spezifisch und wurde nur in Zellen beobachtet, die mit BrdU behandelt wurden.
Unabhängig von der BrdU-Behandlung wurde kein Anti-BrdU- oder Anti-DNA-Antikörpersignal in den Mitochondrien von Row-Zero-Zellen nachgewiesen. Die Quantifizierung des Fluoreszenzsignals der Anti-BrdU-Antikörper zeigte, dass die mit BrdU behandelten Zellen der Reihe Null die gleiche niedrige Fluoreszenz aufwiesen wie die unbehandelten BrdU-Zellen, während das Signal für die Elternlinien A549 und HeLa 50-fach höher war.
