Lösen Sie die Fura-2 AM-Aliquots in Tyrodes Lösung auf, um eine Endkonzentration von 1 mikromolaren Fura-2 AM zu erhalten, die den Zellen zugesetzt wird. Saugt das Medium an und ersetzt es durch Tyrodes Lösung, die Fura-2 AM enthält. 15 Minuten bei 37 Grad Celsius in einem Inkubator oder dem auf Optik basierenden Messsystem inkubieren. Entfernen Sie die Tyrodenlösung, die Fura-2 AM enthält, und waschen Sie die Vertiefungen zweimal mit frischer Tyrodenlösung.
Zum Schluss werden die Zellen für weitere fünf Minuten bei 37 Grad Celsius in Tyrodes Lösung inkubiert, um die Entesterung von Fura-2 AM zu ermöglichen. Platzieren Sie die Platte in dem auf Optik basierenden Messsystem, um mit den Kontraktilitätsmessungen fortzufahren. Wählen Sie eine Vertiefung aus, wählen Sie einen Bereich innerhalb der Vertiefung aus, um die synchronisierte Kontraktion und Entspannung zu beobachten, und klicken Sie dann auf Start, und fügen Sie die Messung hinzu. Zusätzlich zu den Kontraktilitätsspuren wird ein ratiometrisches Calcium-Transient in Echtzeit auf dem Bildschirm angezeigt.
