Positionieren Sie zunächst die betäubte Maus auf dem Tierhalter und sichern Sie sie mit zwei Velcro Gurten. Schalten Sie den Computer ein und öffnen Sie die Software, um den Laser zu aktivieren. Stellen Sie den Tierhalter so ein, dass der Laser im Auge der Maus zentriert wird.
Visualisieren Sie den hinteren Teil durch eine Vorschau auf dem Gesicht, das Sichtfeld des oberflächlichen Gefäßplexus, einen B-Scan und den Netzhautquerschnitt innerhalb des Sichtfelds. Führen Sie eine optische Kohärenztomographie im sichtbaren Licht oder ein Vis-OCT-Volumen durch, nachdem Sie geringfügige Anpassungen am optischen Fokus vorgenommen haben. Richten Sie den Sehnervenkopf in jeder der vier Ecken des Sichtfeldes aus, um verschiedene Netzhautbereiche abzudecken.
Verwenden Sie eine intensitätsbasierte Schwellwertmethode, um die Netzhautoberfläche zu erkennen, und generieren Sie Vis-OCT-Fasergramm aus dem Volumen. Schneiden Sie die retinale Nervenfaserschicht (RNFL) ab, indem Sie die ersten 16 Mikrometer Tiefe auswählen. Berechnen Sie als Nächstes die Projektion der mittleren Intensität entlang der Achsenrichtung, um das Fasergrammbild zu erzeugen, das aus den Axonbündeln der retinalen Ganglienzellen und dem umgebenden Gefäßsystem besteht.
Richten Sie die Blutgefäße mit einem Grafikeditor aus, um die vier Bilder nachzubearbeiten. Das zusammengesetzte Vis-OCT-Fasergramm wird mit dem entsprechenden konfokalen Bild einer flach montierten Netzhaut verglichen, die mit TUJ1 für RGC-Axone immungefärbt wurde. Blutgefäße weisen unterscheidbare Verzweigungsstrukturen auf, die mit den ICAM II-markierten Blutgefäßen auf dem konfokalen Bild abgeglichen werden können.
Der direkte Vergleich zwischen konfokaler Exokoskopie ex vivo und in vivo vis-OCT ergab identische RGC-Exonbündelnetzwerke und das umgebende retinale Gefäßsystem.
