Beginnen Sie mit der subkutanen Verabreichung von 0,3 Milligramm pro Milliliter Buprenorphin an die anästhesierte Ratte. Montieren Sie die Ratte auf dem stereotaktischen Rahmen. Als nächstes rasierst du mit einem Rasierer das Fell vom Kopf.
Desinfizieren Sie die Haut mit drei abwechselnden Runden mit 10%igem Povidon-Jod und Alkohol unter Verwendung steriler Wattestäbchen und reiben Sie jedes Mal drei bis fünf Sekunden lang in verschiedene Richtungen. Tragen Sie Augensalbe auf, um Trockenheit vorzubeugen. Machen Sie nun mit einem sterilen Skalpell einen zwei Zentimeter langen Schnitt entlang der Mittellinie des Kopfes und reinigen Sie den Schädel dann sorgfältig mit sterilen Tupfern und Kochsalzlösung.
Identifizieren Sie das Bregma mit einer 10-Mikroliter-Hamilton-Spritzennadel, die auf dem stereotaktischen Gerät montiert ist, und stellen Sie es auf 00 ein. Verschieben Sie die vorderen posterioren und lateralen Koordinaten des Geräts. Erzeugen Sie mit einem Dentalbohrer ein Gratloch von einem Millimeter.
Geben Sie vier Mikroliter des Freisetzungscocktails in die 10-Mikroliter-Hamilton-Spritze und senken Sie dann die Nadel vorsichtig mit einem stumpfen oder konischen Rand ab, um Kontakt mit der Dura herzustellen. Führen Sie die Nadel bis zur gewünschten Tiefe von 3,5 Millimetern ein. Zwei Mikroliter des Freisetzungscocktails mit einer Geschwindigkeit von einem Mikroliter pro Minute aufgießen.
Lassen Sie die Nadel weitere zwei Minuten an Ort und Stelle und ziehen Sie sie dann langsam heraus, um das Auftauchen des Freisetzungscocktails zu verhindern. Vernähen Sie den Einschnitt mit 5/0 Nylon und reinigen Sie den vernähten Bereich mit einem Antiseptikum. Bringen Sie das Tier dann in den Überwachungsbereich nach der Operation.
Die Injektion von mehr als drei Mikrolitern des Freisetzungscocktails führte zu unspezifischen mechanischen Verletzungen. Die Injektion von zwei Mikrolitern des Cocktails führte zur Entstehung von Doublecortin-Immun-Positiv-Clustern, die auch nach acht Monaten noch sichtbar waren. Die Immunfärbung des Gehirns ergab Denudationsstellen auf der Ependymschicht, die sich nur auf der Ebene der Injektionen befanden.
Ein allmählicher Rückgang der Störungen der Ependymalschicht wurde in den hinteren und anterioren Bereichen der subependymalen Zone beobachtet.
