Beginnen Sie mit der Herstellung einer 1 bis 20-fachen Verdünnung von schwarzer Tusche und Glycerinsystempuffer und zentrifugieren Sie dann 10 Minuten lang bei 15.000 g bei Raumtemperatur. Geben Sie 40 Mikroliter Tintenlösung und Glycerinsystempuffer in den ersten Abschnitt der 384-Well-Platte. Geben Sie nun 25 Mikroliter Glycerinsystempuffer in alle Verdünnungsvertiefungen und 40 Mikroliter in alle Verdünnungsvertiefungen zwei, drei und vier Vertiefungen.
Geben Sie 25 Mikroliter extrahierte Glykanprobe in die Verdünnungsvertiefung, um die Proben im Verhältnis eins zu eins zu verdünnen. Verdünnen Sie jede Probe nacheinander viermal, indem Sie 10 Mikroliter von der ersten Verdünnungsvertiefung in die Verdünnungsverdünnung zwei überführen, und mischen Sie sie dann vorsichtig mit einer Pipette. Wiederholen Sie den Vorgang, indem Sie 10 Mikroliter der Probe aus der Verdünnungsvertiefung zwei in die Verdünnungsvertiefung drei überführen.
Nachdem Sie den Vorgang für die Verdünnung von vier Vertiefungen wiederholt haben, entsorgen Sie 10 Mikroliter davon, so dass alle Vertiefungen ein Endvolumen von 40 Mikrolitern haben. Geben Sie 40 Mikroliter Tintenlösung und Glycerinsystempuffer auf die endgültige Platte. Decken Sie die Platte dann mit einer Klebehülle ab, bevor Sie sie 10 Minuten lang bei 3000 g bei Raumtemperatur zentrifugieren.
Um die Proben auf die Nitrozellulosemembran zu drucken, spülen Sie zunächst den Druckkopf und die Kapillaren mehrmals mit Glycerin-Systempuffer. Initiieren Sie einen Testdrucklauf, indem Sie eine Platte nur mit dem Puffer einlegen. Um das Gerät so zu konfigurieren, dass es direkt aus dem leeren Pufferbehälter druckt, klicken Sie auf Datei, gefolgt von Neu und wählen Sie dann Drucklauf.
Wählen Sie den Mikrotiterplattentyp und ändern Sie die Objektträgereinstellungen entsprechend. Ändern Sie als Nächstes die Einstellungen für das Mini-Array, bevor Sie die Einstellungen für die Spot-Eigenschaft bearbeiten. Klicken Sie auf die Registerkarte Übersicht, um die Platte anzuzeigen.
Wählen Sie abschließend auf der Registerkarte Optionen die Option Puffer verwenden und die Druckzeit berechnen, bevor Sie Dateispeicherorte zum Speichern der Datei zuweisen. Nachdem Sie den Speicherort gespeichert haben, drücken Sie auf Drucklauf starten, um mit dem Lauf fortzufahren. Programmieren Sie beim Drucken von extrahierten Glykanproben das System wie zuvor.
Klicken Sie auf der Registerkarte Optionen auf Quell-Mikrotiterplatten verwenden. Speichern Sie abschließend die eindeutige Grid-Datei, die für das gedruckte Microarray generiert wurde, für die nachgelagerte Analyse. Definierte Glykan-Standards wurden auch als Positivkontrollen in die gedruckten Microarrays aufgenommen.
Das für die ausgewählten Glykanstandards erhaltene Map-Bindungsprofil entspricht den zuvor berichteten Epitopspezifitäten.
