Beginnen Sie damit, identische gedruckte Microarrays aus der Nitrozellulosemembran herauszuschneiden und sie in ein geeignetes Gefäß für die Sondierung zu legen. Um die unspezifische Bindung zu reduzieren, fügen Sie den Microarrays MP-TBST-Blockierungspuffer hinzu und inkubieren Sie eine Stunde lang auf einem rotierenden Schüttler. Nach der Inkubation wird der Puffer durch frisches MP-TBST ersetzt.
Inkubieren Sie die Arrays mit monoklonalen Antikörpern und MP-TBST für zwei Stunden auf einem rotierenden Schüttler. Nach der Inkubation wird die molekulare Sondenlösung entfernt. Tauchen Sie die Arrays vollständig in sauberes TBST ein.
Ersetzen Sie den Puffer sofort durch ein frisches Volumen, um die restliche Sondenlösung zu entfernen. Legen Sie die Arrays fünf Minuten lang auf einen rotierenden Schüttler. Ersetzen Sie die TBST durch ein frisches Puffervolumen und legen Sie die Arrays für weitere fünf Minuten auf den Shaker.
Als nächstes inkubieren Sie die Arrays mit alkalischen Phosphatase-konjugierten Antikörpern für zwei Stunden auf einem rotierenden Schüttler. Sobald die Inkubation abgeschlossen ist und die Microarrays gewaschen wurden, bedecken Sie sie mit Nitroblautetrazolium und BCIP-Farbentwicklungslösung, um die Antikörperbindung chromogen nachzuweisen. Beenden Sie die Reaktion, indem Sie das Array in sauberes Leitungswasser tauchen.
Legen Sie die Arrays dann zum Trocknen zwischen Löschpapier über Nacht bei Raumtemperatur. Die relative Häufigkeit von 16 Epitopen, die diagnostisch für nicht-zellulosehaltige pflanzliche Zellwandpolysaccharide sind, wurde durch die Bindung von Glykan-gerichteten monoklonalen Antikörpern an gedruckte Extrakte nachgewiesen. Die meisten der extrahierten Glykane wurden innerhalb der alkalischen Natriumhydroxidfraktion nachgewiesen.
Für LM-10 und LM-11, die Xylan und Arabinoxylan repräsentieren, wurden starke Bindungssignale in den Schalen aller getesteten Mangosorten aufgezeichnet. LM-10 und LM-11 zeigten eine bevorzugte Bindung an den Knoblauchwurzelgewebeextrakt und eine schwache Bindung an den Blattgewebeextrakt. LM-19 steht für teilweise methylesteriertes oder unverestertes Homogalacturonan, das stark an einige Mangosortenextrakte und nur an die Kaffeefruchtfleischfraktionen gebunden ist.
