Mesenchymal Stem Cell Surface Staining for Immunophenotyping

Zu Beginn zentrifugieren Sie die trypsinisierten mesenchymalen Stammzellen sechs Minuten lang bei 300 g, um das Zellpellet zu erhalten. Als nächstes wird das Pellet vor der Zellzählung in einem Milliliter MSC-Medium resuspendiert. Zentrifugieren Sie die Zellsuspension erneut und resuspendieren Sie das Pellet dann in einem geeigneten Volumen des Färbepuffers, nachdem Sie den Überstand verworfen haben.

Für die Vorbereitung der Kompensationskontrollen beschriften Sie sieben Faxröhren als ungefärbt, DAPI, V450, FITC, PE, PerCP-Cy5.5 und APC. Als nächstes bereiten Sie die einzelnen Färberöhrchen für die Kompensation vor und inkubieren sie 30 Minuten lang im Dunkeln. Waschen Sie nach der Inkubation die Zellen in jedem Röhrchen zweimal und die Kügelchen einmal mit einem Milliliter Färbepuffer.

Anschließend zentrifugieren Sie die Wirbelröhrchen bei 200 g für 10 Minuten bei Raumtemperatur. Nachdem Sie den Überstand verworfen haben, resuspendieren Sie das Pellet in 500 Mikroliter Färbepuffer. Inkubieren Sie das DAPI-Röhrchen fünf Minuten lang in einem 60 Grad Celsius heißen Wasserbad, gefolgt von einer 15-minütigen Inkubation auf Eis, um den Farbstoff einzuschließen.

Geben Sie fünf Mikroliter DAPI in die Suspension und inkubieren Sie sie bis zur Entnahme. Bereiten Sie die Zelle und die Antikörpersuspension in fünf beschrifteten Faxröhrchen gemäß der Tabelle vor. Die Röhrchen vor der Inkubation vorsichtig vortexen.

Waschen Sie dann jedes Röhrchen zweimal mit einem Milliliter des Färbepuffers. Zentrifugieren Sie das Wirbelröhrchen bei 200 g für 10 Minuten bei Raumtemperatur und resuspendieren Sie dann das verbleibende Pellet in 500 Mikroliter Färbepuffer.