Bang-Sensitive Assay for the Study of Seizure-Like Behavior in Drosophila

Sammeln Sie zunächst die jungfräulichen Fliegen der tub-Gal4-Hybridlinie und die männlichen Fliegen der UAS-cac-RNAi-Linie. Geben Sie die jungfräulichen und männlichen Fliegen in dasselbe Fläschchen, um den Nachwuchs zu ernten. Nach drei bis fünf Tagen Okklusion sammeln Sie mit einer Bürste den Nachwuchs und die tub-GL4 UAS-cac-RNA-Fliegen ein.

Einen Tag vor dem Test die Fliegen in neue, saubere Fläschchen mit Futter umfüllen. Als nächstes werden vier bis sechs mit Kohlendioxid betäubte Fliegen vorsichtig in einzelne frische Fläschchen gegeben. Platzieren Sie eine Kamera auf einem Stativ vor einem Whiteboard.

Stellen Sie den Fokus der Kamera manuell mit einer leeren Phiole ein. Nun die Fläschchen mit den Fliegen auf höchster Stufe 10 Sekunden lang vortexen. Stellen Sie das Fläschchen sofort auf das Whiteboard und beobachten Sie die Fliegen auf anfallsartiges Verhalten.

Messen Sie die Erholungszeit als die Zeit, die die Fliegen benötigen, um die Fähigkeit wiederzuerlangen, aufrecht zu stehen. Die Cac-Knockdown-Fliegen zeigten signifikant höhere Raten an anfallsartigem Verhalten als die Wildtyp-Fliegen. Die Erholungsrate der Knockdown-Fliegen innerhalb einer Sekunde war signifikant geringer als bei den Wildtyp-Fliegen.