Zu Beginn werden 70 Milliliter vorgewärmtes Dulbecco's Modified Eagle Medium in eine Petrischale in einer sterilen Biosicherheitswerkbank überführt und Dexamethason in einer Konzentration von 100 Nanomolaren hinzugefügt. Stellen Sie die chirurgischen Werkzeuge zusammen, die für die Dissektion erforderlich sind, einschließlich glatter, gerader Pinzetten mit feiner Spitze. Gerade Pinzette mit feiner Spitze mit gezackten Zähnen und gerader, scharfer, feiner Schere.
Zur Präparation von Explantaten der Hintergliedmaßen. Lokalisieren Sie das Hüftgelenk einer euthanasierten Maus, die in Rückenlage auf der mit saugfähigen Unterpolstern ausgekleideten Arbeitsplatte liegt. Verwenden Sie eine feine Schere, um einen kleinen Schnitt auf der Haut zu machen, der die proximalen und vorderen Aspekte des Oberschenkels bedeckt.
Ziehen Sie dann den Schnitt mit den Fingern auseinander, um das freiliegende Oberschenkel zu dehnen und zu kneifen. Ziehen Sie die Haut vorsichtig nach distal, um die Hintergliedmaße auf Höhe des Knöchels zu enthandschuhen. Führen Sie ein Scherenblatt vorsichtig entlang der dorsalen Seite des Fußes unter die Haut ein.
Machen Sie dann einen Schnitt, der sich in Richtung der Zehen erstreckt, und ziehen Sie die Haut weiter distal, bis sie vollständig entfernt ist. Positionieren Sie die Maus so, dass Sie einen freien Blick auf den Achillessehnenansatz auf der hinteren Seite des Fersenbeins in der Nähe des Knöchels haben. Um die Pflanzterrassenzange zu entfernen, führen Sie eine Spitze der glatten Feinspitzenzange zwischen die beiden Sehnen ein.
Führen Sie die Spitze medial unter die Plantarissehne hindurch. Ziehen Sie ihn dann proximal, um den Plantaris-Muskel zu durchbrechen. Fassen Sie dann mit einer feinen gezackten Pinzette das abgetrennte proximale Ende der Plantarissehne und ziehen Sie es distal, um es vollständig zu entfernen.
Verwende am Hüftgelenk eine feine Schere, um das Becken präzise zu durchtrennen und die Hinterbeine zu isolieren. Entferne mit der Schere vorsichtig das verbleibende Becken und lege den Hüftkopf frei. In der Biosicherheitswerkbank die Explantation der Hintergliedmaßen in die Schale mit Zellkulturmedien und Dexamethason überführen.
Stellen Sie die Schale in den Inkubator und unterziehen Sie sie einer Vorbehandlung für 48 Stunden.
