Zu Beginn wird eine ausreichende Menge steriler Nährmedien vorgewärmt, während die 48-stündige Dexamethason-Vorbehandlung der männlichen Hintergliedmaßenexplantation kurz vor dem Abschluss steht. Sobald die Vorbehandlung abgeschlossen ist, bringen Sie die vorbehandelten Explantate in die Biosicherheitswerkbank. Für die entladene Gruppe wird das Vorbehandlungsmedium abgesaugt und die Explantate in frische Petrischalen überführt.
Geben Sie 70 Milliliter Nährmedien in jede Schale, bevor Sie sie in den Inkubator zurückgeben. Um die Explantatsplattformen für die Grundspannungs- und statische Aufprallgruppe vorzubereiten, schneiden Sie Schleifpapierstücke auf die Größe der Griffplatten. Für die statische Impingement-Gruppe schneiden Sie Stücke der geflochtenen Schnur ab und binden einen lockeren Überhandknoten auf halber Höhe der Schnur.
Reißen Sie Stücke der Aluminiumfolie ab, um jedes Acrylbad abzudecken, und besprühen Sie sie mit 70%igem Ethanol. Übergeben Sie die vorbereiteten Komponenten in die Biosicherheitswerkbank. Ordnen Sie die Komponenten wie Acrylbad, Sockel, Volumenreduzierungseinsätze, Clip und Griffe für die Plattformmontage an.
Platzieren Sie die Plattformkomponenten in sekundären Behältern mit ausreichendem Volumen, um mögliche Leckagen in den Nährmedien einzudämmen. Tauchen Sie die Behälter mindestens eine Stunde lang in eine Lösung von mindestens 10 % Bleichmittel. Spülen Sie die Bleichlösungen mit Leitungswasser ab.
Nachdem Sie die gespülten Komponenten in die Biosicherheitswerkbank überführt haben, verwenden Sie M3-Schrauben und Druckfedern, um die Platten an den Griffen zu befestigen. Befestigen Sie die Griffe mit einer M5-Schraube sicher an der Basis und setzen Sie die M6-Schrauben ein, bis sie die Platten berühren. Verbessern Sie die Funktionalität der Platten, indem Sie Schleifpapier mit doppelseitigem Klebeband anbringen.
Schließen Sie die Griffe, um das Anhaften des Schleifpapiers auf den Platten zu erleichtern. Um eine Plattform zu laden, öffnen Sie die Griffe vollständig und positionieren Sie mit einer Pinzette vorsichtig den Oberschenkel und das Knie zwischen den Platten. Schließen Sie die Griffe vorsichtig, um die Gliedmaße an Ort und Stelle zu halten.
Verwenden Sie eine Pinzette, um den freiliegenden Hüftkopf oder -fuß zu fassen und den Kniebeugewinkel einzustellen, während Sie die Pinzette allmählich schließen, um sie an Ort und Stelle zu halten. Für die Grundlinien-Spannungsgruppe streckst du das Kniegelenk aus, während du die Griffe schließt. Bei der statischen Impingementgruppe beugen Sie das Kniegelenk beim Schließen der Griffe.
Für die statische Impingementgruppe legen Sie den Überhandknoten der Schnur um die distale Pfote und ziehen ihn fest an. Führen Sie die Schnur durch einen Schlitz in der Basis unter dem Explantat und durch das Cliploch. Positionieren Sie den Sockel in der Acrylwanne und befestigen Sie den Clip an der Oberkante der Badewanne.
Um den Fuß zu beugen, ziehen Sie an der Sehne, bis sie mindestens 110 Grad relativ zum Schienbein erreicht. Verwende einen Permanentmarker, um die Zeichenfolge beim Verlassen des Clips zu markieren. Nehmen Sie ein Foto des Explantats in dieser dorsalflexierten Position auf, um den Dorsalflexionswinkel später zu quantifizieren.
Nehmen Sie den Sockel aus dem Setup und befestigen Sie den Volumenreduzierungseinsatz, indem Sie ihn entlang einer Schiene auf dem Sockel schieben. Setzen Sie den Sockel wieder in das Acrylbad ein und positionieren Sie den Clip an der oberen Kante neu. Verwenden Sie die markierte Zeichenfolge als Anhaltspunkt.
Ziehen Sie daran, um den Fuß wieder in seinen ursprünglichen Dorsalflexionswinkel zu bringen, und befestigen Sie die Schnur mit Klebeband an der Außenseite der Badewanne, um eine statische dorsalflexierte Position beizubehalten. Sobald das Explantat zwischen den Griffen positioniert ist, machen Sie für die Basislinienspannungsgruppe ein Foto, um den Dorsalflexionswinkel zu quantifizieren. Schieben Sie dann den Volumenreduzierungseinsatz auf den Sockel und legen Sie ihn in das Acrylbad.
Geben Sie 125 Milliliter vorgewärmtes Nährmedium zu jeder Plattform, um die Explantate einzutauchen. Nachdem Sie die Oberseite des Bades mit Aluminiumfolie abgedeckt haben, geben Sie das gesamte Setup in einen sekundären Behälter. Bringen Sie den sekundären Behälter für sieben Tage in den Inkubator und die Kultur.
