Wählen Sie zunächst flache rechteckige Magnete aus, um die Magnetsets für Streifenmuster zusammenzustellen. Schneiden Sie 2 Millimeter dicke Silikonplatten in Rechtecke mit den Maßen 2 x 8 x 30 Millimeter. Bauen Sie dann die rechteckigen Magnete und Silikonplatten Schicht für Schicht zusammen.
Für Punkt-Array-Muster montieren Sie die zylindrischen Miniaturmagnete und stellen Sie sicher, dass jeder Magnetsatz aus 36 zylindrischen Magneten besteht, die in einem 6 x 6-Raster angeordnet sind. Um ein Zellkulturgerät vorzubereiten, verwenden Sie einen Stanzer, um ein 1 x 1 Zentimeter großes rechteckiges Loch in die 2 Millimeter dicke Silikonplatte zu bohren. Schneide die Silikonplatte um das Loch herum, um eine runde Form mit dem Loch in der Mitte herzustellen.
Zur Sterilisation legen Sie die Formen in den Ultraschallreiniger. Sterilisieren Sie die Formen 10 Minuten lang mit reinem Wasser. Ersetzen Sie dann das Wasser für 10 Minuten durch 75%iges Ethanol.
Trocknen Sie die Formen in einer Sterilisatorbox bei 65 Grad Celsius für 60 Minuten. Befestigen Sie als Nächstes die sterilisierte Silikonform an einem 25 Millimeter großen runden Glaszellenträger und drücken Sie die Form vorsichtig an, damit das Silikon am Glas haftet. Platzieren Sie die Magnetsets auf einer 6-Well-Platte und positionieren Sie das Zellkulturgerät auf dem Magnetset.
Zur Herstellung von 30 Millimolar Gd-DTPA Injektionslösung werden 30 Mikroliter Gd-DTPA mit 470 Mikrolitern vollständigem Zellkulturmedium gemischt. Um die Zellmuster zu erzeugen, zentrifugieren Sie die HUVEC-Suspension 5 Minuten lang bei 200 G. Und resuspendieren Sie das Pellet in Gd-DTPA-haltigem Medium.
Stellen Sie nach der Zellzählung die Zelldichte mit einem Gd-DTPA-haltigen Medium auf ca. 2 mal 10 bis 5 Zellen pro Milliliter ein. Mischen Sie die Zellsuspension vorsichtig und geben Sie 200 Mikroliter in den Hohlraum der Zellkulturform, um eine randvolle flüssige Oberfläche zu schaffen. Inkubieren Sie die Platte für 3-6 Stunden, bis die Zellen am Substrat haften.
Ersetzen Sie nach der Inkubation das Gd-DTPA-haltige Medium durch ein vollständiges Nährmedium und nehmen Sie das Zellkulturgerät aus dem Magnetset. Um ein Zellkulturgerät für die Musterung von Streifenzellen vorzubereiten, ersetzen Sie die dicken Silikonplatten des Geräts durch dünne Platten. Nachdem Sie den ersten Zelltyp strukturiert haben, wie zuvor gezeigt, bewegen Sie das Zellkulturgerät 1 Millimeter von den Magneten unten nach rechts.
Wenden Sie das gleiche Musterungsverfahren auf den zweiten Zelltyp an. Und bewegen Sie das dritte Zellkulturgerät 1 Millimeter von den Magneten unten nach rechts. Mustern Sie den dritten Zelltyp, wie gezeigt.
Nachdem Sie alle Arten von Zellen strukturiert haben, waschen Sie die Objektträger zweimal mit 200 Mikrolitern PBS. Zum Schluss ersetzen Sie das PBS durch ein vollständiges Zellkulturmedium. Viabilitätstests, die an den HUVECs durchgeführt wurden, die 12 Stunden lang mit Gd-DTPA behandelt wurden, zeigten keine signifikante Abnahme der Zellviabilität mit Ausnahme von 50 Millimolar Gd-DTPA, was zu einem statistischen Unterschied führte, aber eine Lebendrate von etwa 90 % beibehielt.
