Beschichten Sie zunächst die Membran der zusammengebauten rekonfigurierbaren Zellkulturplattform eine Stunde lang bei Raumtemperatur mit fünf Mikrogramm pro Quadratzentimeter Fibronektin, um die Zelladhäsion zu verbessern. Anschließend wird die Beschichtungslösung mit einer p200-Pipette abgesaugt. Legen Sie die Musterschablone in die Vertiefung des Kernmoduls.
Fügen Sie dem Well und dem unteren Kanal des Geräts Zellmedien hinzu. Säen Sie menschliche Nabelvenen-Endothelzellen in den Brunnen. Stellen Sie das Gerät in eine Petrischale.
Geben Sie eine konische 15-Milliliter-Röhrchenkappe mit deionisiertem Wasser in die Petrischale, um die lokale Luftfeuchtigkeit aufrechtzuerhalten. Übertragen Sie das Petrischalen-Setup in den Inkubator. Um die Zellen unter Fluss zu kultivieren, konfigurieren Sie die Plattform vom Open-Well- in den Mikrofluidik-Modus.
Füllen Sie dazu die Reservoire und Röhrchen mit Endothelzellwachstumsmedien. Setzen Sie das untere Gehäuse auf den Probentisch. Setzen Sie das Open-Well-Core-Modul in das untere Gehäuse ein, entfernen Sie dann die Schablone, saugen Sie die Zellmedien aus dem Well des Moduls an und platzieren Sie das Flow-Modul im Well.
Platzieren Sie als Nächstes das obere Gehäuse, um das Durchflussmodul abzudichten, in der Vertiefung des Kernmoduls. Schließen Sie die Einlass- und Auslassdosierspitzen an die Anschlüsse des Durchflussmoduls an. Starten Sie die Schlauchpumpe, um den Flüssigkeitsfluss in das System einzuleiten.
Stoppen Sie die Pumpe, wenn die gewünschte Zeit für die reine Durchflussexposition erreicht ist. Entfernen Sie die Einlass- und Auslassdosierspitzen und entfernen Sie dann das obere Gehäuse. Entfernen Sie das Durchflussmodul vorsichtig mit einer Pinzette aus der Vertiefung.
Geben Sie schließlich 100 Mikroliter Zellmedien in die Vertiefung, bevor Sie den gewünschten Assay durchführen. Die Zellen kultivierten unter Fluss entlang der Flussrichtung, während die ohne Fluss kultivierten Zellen zufällig orientiert blieben. Die Exposition der Zellen gegenüber reinem Stress führte zur Hochregulierung des Kruppel-ähnlichen Faktors 2 und der endothelialen Stickstoffmonoxid-Synthase, die eine entscheidende Rolle in gesunden Blutgefäßen spielen.
