Bringen Sie die Welpen zunächst in einen separaten Käfig vom Muttertier entfernt, während Sie sie anfassen. Bestätigen Sie vor Beginn des Injektionsvorgangs mit dem Präpariermikroskop den Zwischenwirbelraum oder zumindest die Mittellinie des Wirbelkanals des Welpen. Laden Sie eine 25- oder 10-Mikroliter-Spritze mit 10 Mikrolitern der gewünschten Injektionssubstanz wie der Arzneimittelformulierung, dem Viruspräparat oder der künstlichen Rückenmarksflüssigkeit usw.
Sobald das Tier vollständig betäubt ist, was durch reduzierte oder fehlende Körperbewegungen bestätigt wird, positionieren Sie die Welpen vorsichtig unter dem Mikroskop. Mit dem linken Zeigefinger und Daumen den Zwischenwirbelraum entlang der Mittellinie, der sich zwischen den beidseitigen Beckengürteln befindet, vorsichtig abtasten. Drehen Sie die Basis des Schwanzes vorsichtig leicht, um die Mittellinie der Wirbelsäule zu identifizieren.
Führen Sie die Nadel vorsichtig ein und neigen Sie sie an der Stelle, an der sich die Vertiefung schneidet, in einem Winkel von 70 bis 80 Grad, wobei Sie sicherstellen, dass sie mit der zentralen Sagittalebene ausgerichtet bleibt. Wenn die Nadel den Knochen berührt, verringern Sie den Winkel allmählich auf etwa 30 Grad und schieben Sie die Nadel etwa zwei Millimeter in den Zwischenwirbelraum vor. Injizieren Sie langsam bis zu 10 Mikroliter Volumen innerhalb von 50 bis 60 Sekunden.
Lassen Sie die Nadel nach Abschluss der Injektion 10 bis 20 Sekunden lang an Ort und Stelle. Ziehen Sie die Nadel mit einer sanften Drehung zurück, um ein Auslaufen zu vermeiden. Legen Sie den Welpen nach der Injektion 10 bis 15 Minuten lang auf ein Heizkissen, damit sich der Welpe vollständig erholen und wieder aufwärmen kann.
Die intrathekale Injektion von schnellem Grün bei Wildtyp-Neugeborenen führte sofort zu einer weiten Verbreitung der verabreichten Lösung. YFP-Reportermäuse zeigten 10 Tage nach intrathekaler Injektion der CRISPR-Cas9-basierten Geneditierung eine weit verbreitete YFP-Expression im gesamten Gehirn.
