Beginnen Sie mit der Vorbereitung der mobilen Phasen für die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC). Für die mobile Phase A oder MPA verwenden Sie fünf Millimolare Ammoniumformiate in Wasser mit 0,05 % Ameisensäure. Verwenden Sie für die mobile Phase B oder MPB 0,05 % Ameisensäure in einer Eins-zu-Eins-Mischung aus Methanol-Acetonitril.
Um mit der Entwicklung der HPLC-Methode zu beginnen, öffnen Sie die Flüssigchromatographie- oder LC-Software und erstellen Sie ein neues Protokoll. Klicken Sie dann auf die Schaltfläche Methode bearbeiten, um den binären Verlauf zu bearbeiten. Legen Sie auf der Registerkarte Binärgradient die Zeitstempel und Konzentrationen von MPA und MPB fest.
Stellen Sie die Stoppzeit auf 18 Minuten, die Durchflussmenge auf 0,400 Milliliter pro Minute und die minimalen und maximalen Druckgrenzen auf null bzw. 6.000 PSI ein. Um die HPLC zu initialisieren, fügen Sie die LC-Säule und die Säulenwächter in den HPLC-Säulenbereich ein. Beachten Sie sorgfältig die minimalen und maximalen Säulendrücke.