Legen Sie zu Beginn die Biochips Modell BC002 in eine Petrischale aus Glas und spülen Sie alle Hohlräume 45 Minuten lang mit sterilem 70%igem Ethanol. Spülen Sie dann die Hohlräume zweimal mit sterilem, doppelt destilliertem Wasser. Beschichten Sie die Biochip-Membran des oberen Hohlraums mit einer 1.000-Mikroliter-Pipette mit blauer Spitze mit steriler Kollagen-IV-Lösung.
Inkubieren Sie den Chip 30 Minuten lang bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid. Nach der Inkubation spülen Sie die untere und obere Kammer zweimal mit sterilem PBS, das Magnesium und Kalzium enthält. Die obere Kammer jeder Kavität wird mit 250 Mikrolitern Endothelzell- oder EC-Medium, das Penicillin-Streptomycin enthält, und die untere Kammer mit 150 Mikrolitern gefüllt.
Waschen Sie die konfluente Endothelzellkultur der menschlichen Nabelschnurvene in einem T25-Kolben mit fünf Millilitern DPBS ohne Magnesium- und Calcium-PBS. Fügen Sie einen Milliliter 0,25 Trypsin und ein millimolares EDTA in PBS hinzu. Und drei Minuten bei 37 Grad Celsius inkubieren.
Fügen Sie nach der Inkubation fünf Milliliter PBS und 5% FCS hinzu, um die Trypsinaktivität zu stoppen. In einem konischen 50-Milliliter-Röhrchen zentrifugieren Sie die Suspension fünf Minuten lang bei 350 g. Und suspendieren Sie das Pellet wieder in einem Milliliter EC-Medium.
Geben Sie 10 Mikroliter einer ein- bis 10 verdünnten Zellsuspension in ein Mikrozentrifugenröhrchen mit 10 Mikrolitern Trypanblau-Färbung. Zählen Sie die Zellen manuell mit einer Neubauer-Kammer. Nach der Zählung wird das Endothelzellmedium in der oberen Kammer des Biochips durch 200 Mikroliter EC-Medium ersetzt, das 0,4 mal 10 hoch der Potenz von sechs menschlichen Endothelzellkulturen für Nabelvenen enthält.
Platzieren Sie die Petrischale aus Glas mit den Biochips bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid. Führen Sie einen täglichen Medienwechsel mit 300 Mikrolitern EC-Medium für die obere Kammer und 200 Mikrolitern RPMI+medium für die untere Kammer durch. Nachdem Sie die Monozyten mit einem Milliliter PBS gewaschen haben, inkubieren Sie sie sieben Minuten lang in vorgewärmtem PBS, das Lidocain und EDTA bei 37 Grad Celsius und 5 % Kohlendioxid enthält.
Sammeln und zentrifugieren Sie die Zellen sieben Minuten lang bei 350 g. Nach der erneuten Suspendierung in einem Milliliter RPMI+Zählung werden die Zellen wie zuvor gezeigt wieder aufgezählt. Samen 0,1 mal 10 hoch sechs Monozyten, die in 200 Mikrolitern RPMI+ in der unteren Kammer suspendiert sind.
Platzieren Sie die Biochip-Ports nach unten, so dass die Zellen an der Membran anhaften.
