Legen Sie zunächst die autoklavierten chirurgischen Instrumente auf den Operationstisch. Rasieren Sie den Bauch der anästhesierten Ratte und legen Sie die Ratte in Rückenlage auf die Operationsplatte. Reinigen Sie den Bauch mit Povidon-Jod, gefolgt von 70% Ethanol.
Tragen Sie eine Augensalbe unter die Augen der Ratte auf, um Trockenheit zu verhindern. Befestigen Sie die Ratte auf dem Operationsbrett. Starten Sie die Datenerfassungssoftware und beginnen Sie mit der Aufnahme.
Schalten Sie das Beatmungsgerät bei vier Millilitern pro Kilogramm ein und stellen Sie sicher, dass der positive Exspirationsdruck am Ende bei etwa zwei Zentimetern Wasser liegt. Führen Sie mit einer Schere eine Mittellinien-Laparotomie vom Processus xiphoideus bis zur Schambeinsymphyse durch. Führen Sie dann mit Hilfe eines stumpfen Instruments eine medial-laterale viszerale Rotation durch und machen Sie die infrahepatische untere Hohlvene sichtbar.
Injizieren Sie Heparin mit einer 20-Gauge-Nadel in die untere Hohlvene. Schneiden Sie mit einer Schere die Haut von der sternalen Kerbe bis knapp unter den Winkel des Unterkiefers und beginnen Sie, in Richtung Luftröhre zu präparieren. Sezieren Sie dann stumpf die notwendigen Gurtmuskeln, um die Luftröhre freizulegen.
Machen Sie einen Querschnitt an der vorderen Luftröhre zwischen den Knorpelringen und achten Sie darauf, dass der hintere Teil der Luftröhre nicht durchtrennt wird. Legen Sie eine 5-0 Seidennaht um die Luftröhre. Führen Sie den Endotrachealtubus in die Knorpelringe ein und befestigen Sie ihn mit der Seidennaht 5-0.
Schließen Sie den Endotrachealtubus an das Beatmungsgerät an und sorgen Sie für eine korrekte Anhebung des Brustkorbs. Führen Sie mit einer Schere eine mediane Sternotomie durch und betreten Sie die Brusthöhle. Platzieren Sie Brustwandretraktoren, um Herz und Lunge freizulegen und versehentliche Manipulationen der Lunge zu vermeiden.
Mit der Kombination aus scharfer und stumpfer Dissektion entfernen Sie den Thymus aus dem vorderen Mediastinum. Identifizieren Sie die Lungenarterie und legen Sie eine 5-0-Seidennaht um sie herum, um die Kanülierung vorzubereiten. Machen Sie einen zwei bis drei Millimeter großen Schnitt im rechtsventrikulären Ausflusstrakt, indem Sie die arterielle Kanüle mit einer Schere in die Lungenarterie einführen und mit der 5-0-Naht sichern.
Nachdem Sie die Ratte eingeschläfert haben, schließen Sie die entlüftete Lungenkonservierungsflüssigkeit schnell an die arterielle Kanüle an, um die Lunge durch Schwerkraft zu spülen. Verbinden Sie die arterielle Kanüle mit dem EVLP-Kreislauf. Schalten Sie die Rollenpumpe ein und lassen Sie eine kleine Menge Perfusat durch die Lunge und aus dem linken Ventrikel in die Brusthöhle fließen.
Sobald das Perfusat aus dem linken Vorhof zu fließen beginnt, schalten Sie die Rollenpumpe aus. Legen Sie anschließend eine kleine Pinzette in die linke Herzkammer und dehnen Sie vorsichtig den Mitralklappenanulus. Lege eine 5-0 Seidenkrawatte um das Herz und binde sie locker zusammen.
Führen Sie die Kanüle des linken Vorhofs in die linke Herzkammer ein und schieben Sie die Kanüle vor, bis sie im Vorhof zu sehen ist. Sichern Sie den linken Vorhof mit der vorgebundenen 5-0-Naht. Identifizieren Sie die Speiseröhre und klemmen Sie sie mit einem Blutstillungsmittel so nah wie möglich an das Zwerchfell.
Schneiden Sie dann die Speiseröhre unterhalb des Hämostaten. Schneiden Sie mit einer Schere alle Bänderansätze durch, die den Herz-Lungen-Block mit den umgebenden Strukturen verbinden. Präparieren Sie dann die Luftröhre vom Hals aus und schneiden Sie die Luftröhre oberhalb des Endotrachealtubus, um den Herz-Lungen-Block zu lösen.
Bewegen Sie den Herz-Lungen-Block in den Brustmantel innerhalb des EVLP-Kreislaufs und befestigen Sie die linke Vorhofkanüle am Kreislauf. Schalten Sie die Rollenpumpe ein und schließen Sie den Beatmungsmonitor an. Überprüfen Sie die Blasenfalle, um sicherzustellen, dass keine Luftembolien in das System eingebracht werden.
Ändern Sie die Beatmungs- und Perfusionseinstellungen während der ersten 15 Minuten langsam auf die gewünschten experimentellen Niveaus. Erhöhen Sie zusätzlich die Perfusionsflussrate auf die gewünschte Rate und den gewünschten Druck. Überprüfen Sie zu bestimmten Zeitpunkten die Perfusatgaswerte und Lungenfunktionstests.
Alle getesteten Perfusate zeigten eine leichte Abnahme des Sauerstoffpartialdrucks des linken Vorhofs, wobei das Erythrozyten-basierte Perfusat nach einer Stunde signifikant abnahm. In den nächsten Stunden hatten sowohl PolyhHB als auch Kontrollperfusate einen stabilen Sauerstoffpartialdruck im linken Vorhof. Der Delta-Partialdruck des Sauerstoffs nahm in der Erythrozytenperfusatgruppe nach einer Stunde signifikant ab, während er in den PolyhHB- und Kontrollperfusaten mit einem nicht signifikanten Trend stabil blieb.
Der Kohlendioxidpartialdruck des linken Vorhofs war im Erythrozyten- und Kontrollperfusat im Vergleich zu PolyhHB nach der ersten Stunde signifikant niedriger, und dieser Trend setzt sich in den folgenden Stunden fort. Der Delta-Partialdruck von Kohlendioxid war im Erythrozytenperfusat nach einer Stunde signifikant erhöht und blieb danach sowohl im PolyhHB als auch im Kontrollperfusat stabil. Lungenphysiologische Echtzeitdaten zeigen, dass das Erythrozytenperfusat den pulmonalen Gefäßwiderstand innerhalb der ersten Stunde signifikant erhöhte.
Während sowohl PolyhHB als auch Kontrollperfusate über den Zeitraum einen niedrigen und stabilen pulmonalen Gefäßwiderstand beibehielten, war die Veränderung des Lungengewichts beim Erythrozytenperfusat anfänglich signifikant, mit einem kontinuierlichen Anstieg aller Perfusate, etwas stärker bei PolyhHB. Die Compliance nahm bei den Erythrozytenperfusaten innerhalb der ersten Stunde signifikant ab, während sie bei anderen Perfusaten nicht signifikant abnahm. PolyhHB hatte nach vier Stunden die höchste Compliance.
