Zu Beginn entnehmen Sie Embryonen von frisch verpaarten weiblichen Mäusen. Bereiten Sie 12 Mikrotröpfchen Kalium-Simplex-optimiertes Medium am Boden einer 35-Millimeter-Petrischale vor. Bedecken Sie die Mikrotröpfchen mit drei bis fünf Millilitern Mineralöl und stellen Sie die Petrischalen zum Ausgleich in einen 37 Grad Celsius heißen Inkubator mit 5 % Kohlendioxid.
Übertragen Sie die Mausembryonen mit einer Transferpipette vom M2-Medium auf das KSOM-Medium. Legen Sie die gewaschenen Embryonen in die vorbereiteten KSOM-Mikrotröpfchen und inkubieren Sie sie vier Tage lang bei 37 Grad Celsius mit 5 % Kohlendioxid. Wählen Sie vorteilhafte Blastozysten nach ihrer Größe, der inneren Zellmasse, der Anzahl der Trophoblastzellen und dem Grad der Ausdehnung aus.
Geben Sie einen Milliliter 2%ige Gelatine in eine 12-Well-Kulturplatte und inkubieren Sie 30 Minuten lang bei 37 Grad Celsius. Saugen Sie dann die überschüssige Gelatine ab und lassen Sie den Boden des Tellers vollständig trocknen. Säen Sie humane Endometrium-Adenokarzinomzellen oder Ishikawa-Zellen in die mit Gelatine beschichtete 12-Well-Platte und inkubieren Sie die Platte 24 Stunden lang.
Setzen Sie vorsichtig fünf bis 15 frische Blastozysten in jede Vertiefung der 12-Well-Platte mit den Zellen ein. Beobachten Sie die Embryonen nach 48 Stunden unter einem Mikroskop, um ihren Anhaftungsstatus zu beurteilen, nachdem Sie die Platte dreimal bewegt haben. Ungebundene Embryonen schwimmen oder rollen über die Oberfläche der Zellen.
Berechnen Sie schließlich die Einnistungsrate des Embryos in Gegenwart verschiedener Östrogenkonzentrationen. Die Ergebnisse zeigten, dass nahe physiologische Konzentrationen von 17 beta-Östradiol die Einnistungsraten der Embryonen im Vergleich zur Kontrolle ohne 17 beta-Östradiol erhöhten. Ultrahohe Konzentrationen von 17 Beta-Östradiol um 100 Nanomolare reduzierten jedoch die Einnistungsraten der Embryonen erheblich.
