Der geschlossene Aufprallstrahlmischer richtet in einer größeren Mischkammer zwei Ströme mit hoher Reynoldszahl aufeinander. Der lineare Impuls jedes Strahls wird durch die Bildung von turbulenten Wirbeln im Mikrometerbereich abgeführt, die eine schnelle und gleichmäßige Vermischung der Lösungsmittel- und Lösungsmittelströme bewirken. Um mit der Formulierung der Lipid-Nanopartikel zu beginnen, füllen Sie zwei Fünf-Milliliter-Spritzen mit Ethanol und verriegeln Sie jede in einer Einlassöffnung des geschlossenen Aufprallstrahls oder CIJ-Mischers.
Drücken Sie die Spritzen schnell zusammen und sammeln Sie das Mischerabwasser als Abfall. Entfernen Sie die Ethanol-Spülspritzen aus dem CIJ. Blasen Sie einen trockenen Stickstoffstrom durch die Einlassadapter, um die internen Kanäle des CIJ zu trocknen.
Mischen Sie die Lipid-Stammlösungen und verdünnen Sie sie mit Ethanol in einem 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen. 100 Millimolare pH-4-Acetat-Puffer auf 10 Millimolar in einem Gesamtvolumen von vier Millilitern verdünnen. Zur Vorbereitung des Antisolventenstroms mischen Sie RNA mit Acetatpuffer in einem 1,5-Milliliter-Röhrchen.
Bereiten Sie 500 Mikroliter Lösung in einer Ein-Milliliter-Spritze vor. Drehen Sie die Spritze um und stoßen Sie jegliche Luft aus dem wässrigen Lösungsmittelstrom aus. Sammeln Sie auf ähnliche Weise 500 Mikroliter Lipidlösung in einer Ein-Milliliter-Spritze.
Drehen Sie dann die Spritze um, um Luft aus dem ethanischen Lösungsmittelstrom auszustoßen. Positionieren Sie den sauberen CIJ-Mischer über dem Abschreckbadfläschchen. Stecken Sie die beiden Spritzen in die Einlassöffnungen des CIJ-Mischers ein.
Drücken Sie beide Spritzen schnell zusammen, um die Lösungsmittel- und Antilösungsmittelströme zu mischen und die Lipid-Nanopartikel im Abschreckbad zu sammeln. Nehmen Sie den CIJ-Mischer aus dem Abschreckbad, während die Spritzen noch angebracht sind. Halten Sie den CIJ über einen Abfallbehälter und entfernen Sie die Spritzen, so dass das verbleibende Rückhaltevolumen in den Abfallbehälter fließen kann.
Verschließen Sie nun das Quenchbad mit der Lipid-Nanopartikel-Dispersion und schwenken Sie das Fläschchen vorsichtig.
