Mischen Sie zunächst die Komponenten A und B von Polydimethylsiloxan oder PDMS in einem Verhältnis von 10 zu eins. Nachdem Sie die Mischung gut umgerührt haben, gießen Sie die Mischung in eine Urform. Stellen Sie die PDMS-Form 15 Minuten lang einem Druck von einem Pfund pro Quadratzoll aus, um Luftblasen zu entfernen.
Härten Sie die PDMS-Form zwei Stunden lang bei 60 Grad Celsius aus. Entformen Sie, um die Produktionsform der Mikronadel zu erhalten. Reinigen Sie dann die Produktionsform vor dem Gebrauch mit ultrareinem Wasser.
Quantifizieren Sie den Proteingehalt der vorbereiteten Exosomenlösung mit einem BCA-Assay-Kit. Geben Sie eine angemessene Menge DPBS in die Exosomenlösung. Bereiten Sie nun eine Lösung von 200 Milligramm pro Milliliter Trehalose mit DPBS als Lösungsmittel vor.
20 Minuten lang umrühren, um eine vollständige Auflösung zu gewährleisten. Bereiten Sie als Nächstes eine Lösung aus Hyaluronsäure und Polyvinylpyrrolidon oder PVP vor, wobei DPBS bzw. Ethanol als Lösungsmittel verwendet wird. Über Nacht umrühren, um eine vollständige Auflösung zu gewährleisten.
Mischen Sie die Exosomenlösung und die Trehaloselösung im gleichen Verhältnis. Fügen Sie ein gleiches Volumen Hyaluronsäurelösung hinzu und mischen Sie gründlich, um die Spitzenlösung zu erhalten. Verarbeiten Sie die Oberfläche der PDMS-Form mit einem Plasmareiniger 30 Sekunden lang in niedriger Qualität, um ihre Hydrophilie zu verbessern.
Geben Sie 40 Mikroliter der Spitzenlösung in die PDMS-Form. Zentrifugieren Sie bei 3.000 g drei Minuten lang bei Raumtemperatur, um sicherzustellen, dass die Flüssigkeit die Nadelschicht der Form füllt. Entfernen Sie überschüssige Flüssigkeit aus der Form und trocknen Sie sie einen Tag lang bei Raumtemperatur in einem Vakuumtrockenofen.
Geben Sie dann 200 Mikroliter PVP-Lösung in die PDMS-Form. Zentrifugieren Sie bei 3.000 g drei Minuten lang bei Raumtemperatur, um sicherzustellen, dass die Flüssigkeit die Trägerschicht der Form füllt. Nachdem Sie die Form einen Tag lang getrocknet haben, entformen Sie sie, um das mit Exosomen beladene Mikronadelpflaster zu erhalten.
