Bereiten Sie zunächst die Graphenoxid/Kupfer-Nanokomposite vor. Am ersten Tag impfen Sie eine Kolonie der Bakterien aus der Agarplatte mit einer Schlaufe in 10 Milliliter Brühe. Inkubieren Sie die Brühe bei 37 Grad Celsius mit einem Schüttelinkubator, der auf 200 U/min eingestellt ist, für 24 Stunden.
Am zweiten Tag verdünnen Sie das Nanokomposit-Gemisch mit DPBS, um drei verschiedene Konzentrationen zu erhalten, und bereiten Sie die Kontrolllösungen für das Experiment vor. Geben Sie dann 100 Mikroliter der Nanokomposit-Suspensions- und Kontrolllösungen in 96-Well-Platten. Basierend auf den KBE verdünnen Sie die Bakteriensuspension auf eins mal 10 hoch sechs KBE pro Milliliter in tryptischer Sojabrühe.
Imxikulieren Sie 100 Mikroliter der verdünnten Bakteriensuspension in die Probenvertiefungen in der 96-Well-Platte und inkubieren Sie die Platte bei 37 Grad Celsius in einem Schüttelinkubator bei 200 U/min für 24 Stunden. Mischen Sie am dritten Tag die Probe und die Bakteriensuspensionen kräftig mit einer 200-Mikroliter-Mikropipette, bevor Sie die Probenbakterienmischung mit sterilem destilliertem Wasser zehnfach verdünnen. Verteilen Sie dann 100 Mikroliter der verdünnten Bakteriensuspension mit einem Spreader auf einer Agarplatte und inkubieren Sie die Platte 24 Stunden lang bei 37 Grad Celsius.
Zählen Sie am vierten Tag die Bakterienkolonien und bestimmen Sie die KBE-Werte, um die antibakterielle Aktivität der Nanokomposite anhand der Gleichung zu bestätigen. Die Nanokomposite zeigten eine signifikante antibakterielle Wirksamkeit gegen Methicillin-resistente Staphylococcus aureus und Pseudomonas aeruginosa und rotteten 99,8 % bzw. 84,7 % dieser Bakterien bei einer Konzentration von 500 Mikrogramm pro Milliliter aus.
