Erwerb des Blattpathotyps und Beurteilung der Resistenz von Pappeln gegen Stammkrebskrankheiten im Labor

Nehmen Sie zunächst mit Krebs geimpfte Pappelblätter, die in Plastiktüten aufbewahrt werden. Entfernen Sie vorsichtig die Kunststoffschutzfolien von den Blättern und entfernen Sie vorsichtig die Myzel-Innokulantien von den Blattoberflächen. Beobachten und identifizieren Sie die Blattpathotypen jedes Pappelklons, indem Sie die Form und Farbe der nekrotischen Flecken untersuchen.

Legen Sie dann die Blätter in ein Lineal auf schwarzem Hintergrund. Fotografieren Sie die Unterseite der Blätter mit einer Kamera oder scannen Sie sie mit einem Scanner, um Bilder mit einer Auflösung von mehr als 300 Punkten pro Zoll zu erhalten. Öffnen Sie die Bilder der erkrankten Blätter in der Software ImageJ, 1.54G.

Stellen Sie die Skala in ImageJ entsprechend dem Lineal ein, das in den Blattbildern sichtbar ist. Identifizieren Sie dann mit dem Zauberstab-Werkzeug in ImageJ die Läsionen auf den Blättern und messen Sie die Fläche jedes nekrotischen Flecks. Nachdem Sie alle nekrotischen Flecken gemessen haben, notieren Sie die Flächenwerte und exportieren Sie diese Werte als Tabelle zur weiteren Analyse.

Wenn die Läsionen um die mit Myzel bedeckten Peer-Stellen signifikant größer sind als die um die PDA-bedeckten Stellen, klassifizieren Sie sie als Krankheitsstellen. Wenn die mit Myzel bedeckten Peer-Stellen Veränderungen wie Läsionsfarbe, hyphenartige Strukturen, Pyknidien und Konidien aufweisen, definieren Sie diese als Krankheitsstellen. Berechnen Sie die durchschnittliche Fläche der effektiven PDA-Läsionsflecken für jeden Pappelhybrid-Klon.

Unterteilen Sie die mit Myzel geimpften Flecken in zwei Kategorien, Beginn und Nicht-Beginn. Berechnen Sie dann die Inzidenzrate der getesteten Pappelklonkrankheit. Berechnen Sie die durchschnittliche Fläche der kranken Flecken auf den Blättern.

Basierend auf den durchschnittlichen Flächen kranker Flecken bei allen getesteten Pappelklonen wird ein fünfstufiger Standard für die Einstufung von Krankheiten festgelegt. Berechnen Sie den Krankheitsindex jedes Pappelklons unter Verwendung des fünfstufigen Krankheitseinstufungsstandards. Überprüfen Sie anschließend mit dem Shapiro-Wilk-Test die Normalverteilung der Anzahl der Pappelklone auf die verschiedenen Resistenzstufen.

Anhand des Krankheitsindex werden alle getesteten Pappelklone in fünf oder sieben Resistenzgruppen eingeteilt. Sehr hoher Widerstand, hoher Widerstand, Widerstand, kein Widerstand und keine Anfälligkeit, Anfälligkeit, hohe Anfälligkeit und sehr hohe Anfälligkeit. Die Inokulation von Stammkrebserregern induzierte nekrotische Läsionen und sogar pyknidienähnliche Strukturen auf Pappelblättern.

Darüber hinaus beeinflussen die Blattpositionen und die Lichtverhältnisse der Blätter die Schwere der Erkrankung der Blätter.