Vorbereitung von Reagenzien und Pappelmaterial für die In-vivo-Blattinokulation

Beginnen Sie mit der Zugabe von Kartoffelextraktion, Dextrose und Schnecke in Wasser, um Kartoffel-Dextrose-Schnecke oder PDA-Nährmedium für Pilzstämme vorzubereiten. Erhitzen Sie die Lösung 10 Minuten lang bei 100 Grad Celsius, um die Bestandteile vollständig aufzulösen. Schlechtes PDA-Medium in 25-Milliliter-Röhrchen.

Sterilisieren Sie alle Röhrchen 30 Minuten lang bei 121,1 Grad Celsius. Anschließend kühlen Sie die sterilisierten Röhrchen auf einer Reinbank auf 50 bis 60 Grad Celsius ab. Gießen Sie das Medium in Kulturplatten mit einem Durchmesser von 9,0 Zentimetern und kühlen Sie sie bei Raumtemperatur ab.

Schneiden Sie anschließend das Myzel des Pilzerregers, das sieben Tage lang in PDA-Medium bei 28 Grad Celsius kultiviert wurde, in etwa 0,5 Zentimeter große quadratische Würfel. Impfen Sie die Pilzwürfel in der Mitte der PDA-Platten und stellen Sie sicher, dass die Myzelseiten zum Medium zeigen. Anschließend werden die geimpften Pilzerreger in einem thermostatischen Inkubator für sieben bis 10 Tage kultiviert.

Schneiden Sie nach der Inkubation das PDA-Medium, das das Pilzmyzel enthält, in quadratische Würfel mit einer Seitenlänge von 1,0 bis 1,2 Zentimetern. Wählen Sie die neu gereiften, voll verlängerten Blätter von der Spitze der Hauptzweige 1-jähriger Pappelklone aus und stellen Sie sicher, dass die Blätter frei von Schädlingen, Krankheiten und mechanischen Beschädigungen sind. Wählen Sie bei einjährigen Zweigen von mehrjährigen Pappel-Hybridklone die oberen fünften bis siebten Blätter der ausgewählten Zweige als inokuliertes Material aus.

Besprühen Sie die ausgewählten Pappelklone oder -zweige mit sauberem Wasser. Wischen Sie nach dem Trocknen die ausgewählten Blätter mit 75%igem Alkohol ab, entweder eine Stunde oder einen Tag vor den Impfmanipulationen.