Bereiten Sie zunächst die eine behandelte AAV-Probe der DNA und den dd_PCR Mastermix vor. Geben Sie 2,2 Mikroliter der verdünnten Probe zu 19,8 Mikrolitern dd_PCR Mastermix in jedes Röhrchen des PCR-Streifens mit acht Röhrchen und mischen Sie gut. Übertragen Sie 20 Mikroliter des Gemisches in die Vertiefungen, die in der mittleren Probenreihe einer tröpfchenerzeugenden Kartusche enthalten sind.
Füllen Sie dann 60 Mikroliter Tröpfchenerzeugungsöl in die Bohrlöcher um, die in der unteren Ölreihe der Tröpfchenerzeugungspatrone enthalten sind. Platzieren Sie eine Gummidichtung über der Tröpfchenerzeugungspatrone und setzen Sie sie dann in den Tröpfchengenerator ein. Nachdem die Tröpfchen erzeugt wurden, übertragen Sie mit einer Achtkanalpipette langsam 42,5 Mikroliter Lösung aus der Tröpfchenerzeugungskartusche auf eine Multi-Well-PCR-Platte.
Versiegeln Sie die PCR-Platte mit einer Aluminiumfolienabdeckung mit einer Heißsiegelmaschine für fünf Sekunden bei 180 Grad Celsius. Legen Sie die Platte zur Amplifikation in einen Thermocycler mit einem 96-Deep-Well-Reaktionsmodul, verschließen Sie es fest und führen Sie das PCR-Programm aus. Wenn Sie fertig sind, laden Sie die Platte in ein Tröpfchenlesegerät, geben Sie die erforderlichen Informationen in die Systemsoftware ein und starten Sie die Messung.
Im 1D-Amplitudendiagramm wurde eine klare Trennung zwischen positiven und negativen Tröpfchen beobachtet, was auf eine erfolgreiche Messung hindeutet. Das zweite 1D-Amplitudendiagramm zeigte Tröpfchenregen mit Tröpfchen, die zwischen der positiven und der negativen Wolke verstreut waren, was auf ein mögliches Problem mit der Messgenauigkeit hindeutet. Die Ausgangsdaten eines AAV-Laufs zeigten konsistente Ergebnisse, wenn eine Probe in Duplikaten bei zwei verschiedenen Verdünnungen gemessen wurde.
