Anilinblau-Färbung zur Visualisierung von Plasmodesmata in agroinfiltrierten Pflanzenblättern mittels konfokaler Mikroskopie

Zu Beginn erhalten Sie Nicotiana benthamiana-Blätter, die mit den Zellen des Agrobacterium tumefacien infiltriert sind, die die gewünschten Vektoren beherbergen. Zur Visualisierung von Plasmodesmen fügen Sie ein Aliquot von 200 Mikrolitern 1%Anilinblau auf einen Objektträger hinzu. Schneiden Sie dann mit einer Klinge den infiltrierten Blattbereich von der Vene weg und übertragen Sie ihn mit der abaxialen Seite nach oben in die Anilinblaulösung auf dem Objektträger.

Stellen Sie sicher, dass die Blattgewebeprobe vollständig untergetaucht ist, bevor Sie sie mit einem Deckglas abdecken. Legen Sie den Objektträger mit der Probe in einen Exsikkator, der an einer Vakuumpumpe befestigt ist. Evakuieren Sie für zwei Minuten bei weniger als 0,8 Pascal.

Lassen Sie dann langsam den Druck ab und inkubieren Sie den Objektträger 30 Minuten lang im Dunkeln bei Raumtemperatur. Visualisieren Sie nun das Fluoreszenzsignal von Anilinblau unter einem konfokalen Laserscanning-Mikroskop.