Diese Arbeit wurde von den NIH (U54CA143837), die NIH MD Anderson Cancer Center Support Grants (CA016672), der V-Stiftung (SAC) und einer uneingeschränkten Forschungsstipendium von der Kanzius Forschungsgemeinschaft (SAC, Erie, PA) finanziert. Wir danken Kristine Ash von der Abteilung für Chirurgische Onkologie, MD Anderson Cancer Center, für die administrative Unterstützung.

Eine komplette Übersicht experimentellen ist in Abbildung 1 dargestellt. Weitere Einzelheiten werden in Schritten 1-3 dargestellt. 1. Die Beurteilung RF Heizung von NP Kolloide: AuNPs als Beispiel <ol><li> In der Regel für jede NP Probe untersucht zunächst die Probe mehrmals waschen durch eine Zentrifugation Filter mit VE-Wasser (DI) in den Hintergrund Ionen und Verunreinigungen zu entfernen. Alle Ionen und Verunreinigungen werden aus der AuNP Suspension, wenn die Flüssigkeit ausgewaschen hat ähnliche HF-Erwärmungsraten (HRS) als DI-Wasser entfernt worden sein. Dieses Reinigungsverfahren ermöglicht auch höhere Konzentrationen von Nanopartikeln zu erhalten. Es ist erwähnenswert, dass, obwohl mit AuNPs in diesem Beispiel können die Grundsätze auf andere NP Materialien aufgebracht werden. </li><li> Als Beispiel Reinigung einer 500-ml-Flasche im Handel erhältlich AuNPs einem Durchmesser von 5 nm und dann dafür eine 13,56-MHz-HF-Bereich der Elektroanlageeld Stärke 90 kV / m. <ol><li> Nehmen Sie ~ 125 ml aus dem Aktien AuNP Lösung und Spaltung zwischen sechs 50 kDa Zentrifugenfilterrohre. Zentrifugieren bei 3.000 Umdrehungen pro Minute. 2 min 5 sek. Mit mehr Stammlösung entfernen gefiltert Puffer und Refill-Filter. Wiederholen, bis alle 500 ml gefiltert wurde. </li><li> Ersetzen Sie die gefilterten Puffer mit einem ähnlichen Volumen von DI-Wasser und wiederholen Sie etwa 8-mal (oder bis die gefilterten Puffer RF HRs sind äquivalent zu DI-Wasser). Beachten Sie, UV-Vis-Analyse kann auch verwendet werden, um Verunreinigungen Absorptionspeaks zu überwachen. Sobald die Puffer Verunreinigungen wurden vollständig entfernt, Pipetten etwa 0,5 ml DI-Wasser in jeden Filter und resuspendieren AuNPs durch wiederholtes Pipettieren. Dies sollte die AuNPs vollständig aus dem Filter und ermöglichen eine vollständige Resuspension. Kombinieren Sie alle sechs Suspensionen in ein 15 ml-Eppendorf-Röhrchen. </li><li> Sobald die AuNPs wurden gereinigt und konzentriert, analysiert die Probe mit ICP-OES-und / oder ICP-MS, UV-Vis-und Zeta-Potential für Daten auf concentration und NP Stabilität auf. SEM und / oder TEM-Analyse kann auch verwendet werden, um morphologische Daten zu erhalten. Detaillierte Probenaufbereitung für diese Techniken sind in der Literatur 4 gefunden werden. </li></ol></li><li> Verwendung der in den vorhergehenden Studien 8 beschrieben Kanzius RF System oder Ableitungen dieses Systems stellen eine 1,3-ml-Quarzküvette zylindrischen so dass die elektrische RF-Feld in der Luft (ohne Probe vorhanden ist) wäre ~ 90 kV / m im Inneren der Küvette. Für einen Standard-Kochsalzlösung-Probe (0,9% NaCl), das elektrische Feld würde auf ~ 1,1 kV / m ist. Dies sind die ungefähren Bedingungen verwendet, damit Vergleiche zwischen unterschiedlichen Systemen erfolgen. <ol><li> Pipette 1,3 ml einer 1.000 mg / l Probe des gereinigten AuNP Kolloid in die Quarz-Küvette und stellen diese in den HF-Bereich. Dies kann durch die Verwendung eines kundenspezifischen Teflon Probenhalter durchgeführt werden. Aussetzen Probe zu dem RF-Feld für einen Zeitraum von 120 Sekunden oder bis die Probe 70 ° C erreicht, um eine elektrische Lichtbogenbildung oder schnelles Kochen zu verhindern. Capture die Wärmebilddaten (und Steuerflächen) mit einer IR-Kamera und zugehörige Software. Wiederholen Sie diesen Vorgang dreimal. </li><li> Filtern Sie die Probe durch weitere 50 kDa Zentrifuge Filter, um die AuNPs von der DI-Wasser-Puffer zu extrahieren. Neu setzen den Puffer zu dem RF-Feld, erneut dreimal. Der Unterschied zwischen der in HRs AuNP Kolloid und dem Hintergrund DI-Puffer bestimmt die HR aufgrund der AuNPs sich. Erwarten Sie, um HRs von ~ erhalten 0,3 ° C / sec und 0,05 ° C / s, eine AuNP abhängig HR von ~ 0,25 ° C / s geben. Resuspendieren der verbleibenden AuNPs aus dem Filter in 1,3 ml Wasser für in vitro / vivo-Experimente. </li></ol></li></ol> 2. Nanopartikel-unterstützt RF-induzierte Hyperthermie: In-vitro-Studien <ol><li> Diese in vitro-Studien können zu jeder Art von Krebs, Zelltyp, der 2D-Monoschichten aufgebracht werden. In diesem Experiment verwenden menschlichen Leberzellkarzinom abgeleitet Hep3B-Zellen. <ol><li> Platte ~ 50.000 cells in den vorderen drei Vertiefungen einer Platte mit 12 Vertiefungen mit 1 ml Wachstumsmedium. Wiederholen Sie dies 6 Mal (drei Platten verwenden für NP Studien und drei Platten als Kontrollen). Inkubation bei 37,5 ° C für 24 h vor der Einführung der Nanopartikel. Sterilisieren NPs zunächst mit Biosicherheitswerk UV-Licht-Exposition für 5 min. </li><li> In jeden gut vorstellen 0,1 ml einer 1.000 mg / L AuNP Lösung und lassen für weitere 24 Stunden. 0,1 ml Wasser in jedes Well der drei Kontrollzellplatten und auch für die 24-Stunden verlassen. </li><li> Nach 24 Stunden vergangen sind, saugen die Zellmedien und waschen mit PBS, alle oberflächengebundenen AuNPs entfernen. Ersetzen Sie den Zellmedien. Die Zellen sind nun bereit für HF-Belastung. </li></ol></li><li> Platzieren Sie jede 12-Well-Zellpack innerhalb der HF-Feld. Warten, bis die Zellen auf 31 ° C abgekühlt Einschalten des HF-Generators und setzen für 3,5 min. Die Endtemperatur der Zellmedium wird ~ 37 ° C liegen Schalten Sie das HF-Feld. Entfernen Sie die Zellen und legen Sie sie in einem Brutschrank für 24 h vor der Analyse. <ol> &lt;li&gt; Zellen entfernen aus dem Inkubator und saugen Zellmedien. In 1,6 ml Zellmedium in jede Vertiefung sowie mit 0,4 ml MTT-Reagenz. Zellen für 4 Stunden inkubiert. Saugen Medien und ersetzen mit 2 ml Dimethylsulfoxid (DMSO). Legen Sie die Zellplatten auf einer Bank Wippe und lassen für 10 Minuten, damit die DMSO, die MTT-Reagenzien zu lösen. Schließlich Pipette 100 ul jeder Vertiefung in eine 96-Well-Platte und optisch ausgelesen und die bei 570 nm mit einem Plattenlesegerät wie dem SPECTROstar Nano-Plattenlesegerät. </li></ol></li></ol> 3. Nanopartikel-unterstützt RF-induzierte Hyperthermie: In-vivo-Studien <ol><li> Diese in-vivo-Studien kann für jede Art von Krebs, die solide Tumore in einem orthotopen Mausmodell oder Eileiter bildet angewendet werden. Im Versuch wird Hep3B Leberkrebszellen in einer Eileitertumor BALB-C Nude-Maus-Modell. </li><li> Hinweis: Alle in-vivo-Versuche sind in Übereinstimmung mit allen einschlägigen Richtlinien, Vorschriften und Aufsichtsbehörden ausgeführt. Außerdem wurde das Protokoll demonstriert unter der Leitung und Genehmigung der University of Texas MD Anderson Cancer Centers Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) durchgeführt. <ol><li> Wachsen, eine entsprechende Anzahl von Zellen (~ 100 K) in einer Zellkulturflasche mit dem geeigneten Wachstumsmedium. Inkubieren in einem 37 ° C Inkubator mit 5% CO 2 für die Dauer der Zellkultur. </li><li> Gönnen Zellen mit Trypsin (aus der Flasche zu lösen) und erzeugen eine Lösung von 2 Millionen Zellen für jeweils 25 ul. In die gleiche Menge Matrigel (auf Eis) und gründlich mischen, um den endgültigen Injektionslösung vorzubereiten. Spritzen Sie diese Lösung in der gewünschten Position auf der Maus die sich zurück und warten eine entsprechende Menge an Zeit für die Tumoren auf die gewünschte Größe (2-4 Wochen für die meisten Zellen) wachsen. Vor der HF-Belastung sollte BALB-C Nacktmäuse solide Tumoren Eileiter tragen 0,5-1 cm Durchmesser. </li></ol></li><li><ol><li> Bereiten die Mäuse durch ANAE verwendet werden (in diesem Fall BALB-c-Nacktmäusen)sthetizing sie mit einer Lösung von Ketamin und Xylazin durch IP-Injektion. Während die Mäuse Einschlafen, halten Sie sie in einem Temperaturkammer bei 37 ° C 20 Mäusen insgesamt benötigt werden, alle Lager ähnlicher Größe Tumoren. Zehn Mäuse wird in Verbindung mit und ohne AuNPs verwendet werden (letzteres ist nur PBS-Injektionen), während die verbleibenden 10 Mäuse werden zwischen HF-exponierten und nicht-exponierten Kontrollen RF aufgeteilt werden: beide Gruppen ohne AuNP Injektionen. </li><li> Einmal richtig betäubt, injizieren die AuNPs direkt in den Tumor mit einer 1-ml-Spritze mit einer 27 G-Nadel. Die AuNP ist bei einer Au-Konzentration von 200 mg / l in 0,1 ml PBS werden. Nach der Injektion mit einem OP-Tupfer, um das Blut mit einem Alkoholtupfer absorbieren und wischen Sie die Injektionsstelle. </li><li> Dann montieren Sie die Maus auf den Aufnahmekopf des HF-Generators behandelt werden. Die Maus ist so positioniert werden, dass der Tumor in der Nähe des Übertragungskopfes. Schirmen Sie die Bereiche, die nicht zu behandelnden sowie sensiblentive Bereiche wie Augen, Ohren, Zehen und mit Kupferband. Seien Sie sicher, dass das Kupferband wird entsprechend Kontakt mit der Erdungsebene, so dass keine Aufladung erfolgt. Außerdem muss die Belichtungsfläche einen Abstand von mindestens 1 cm größer ist als die Größe der gewünschten Behandlungsstelle haben. </li><li> Position IR-Wärmebildkamera, so dass der Tumor-und Behandlungsbereich sichtbar sind. Schalten Sie RF für 5 min. Notieren Sie die resultierende Temperaturkurve. Wenn die Therapie erreicht Temperaturen von mehr als 42 ° C Anschlag Behandlung sofort. </li></ol></li><li><ol><li> Nach der HF-Belastung zu erholen die Mäuse aus der Narkose in einem warmen Raum, bis sie bei Bewusstsein sind. </li><li> Wiederhole den Versuch mit der gleichen Mäuse 48 Stunden später (Schritte 3.3.1 - 3.4.1). </li><li> Nach dem Experiment euthanize die Mäuse in Übereinstimmung mit institutionellen Protokolle und Prozeduren. Das Gewicht des Tumors. Für die histologische Analyse fix die Tumoren mit Formalin und betten sie in Paraffin. Tumorschnitte sind in der Regel gefärbt Witzh Hämatoxylin und Eosin und für die Messung relevanten therapeutischen Wirksamkeit, z. B. Ki-67-Ziele, gespalten Caspase-3-usw. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Gannon, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+nanotube-enhanced+thermal+destruction+of+cancer+cells+in+a+noninvasive+radiofrequency+field.">Carbon nanotube-enhanced thermal destruction of cancer cells in a noninvasive radiofrequency field.</a> Cancer. 110, 2654 (2007).</li><li>Curley, S. A., Cherukuri, P., Briggs, K., Patra, C. R., Upton, M., Dolson, E., Mukherjee, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+radiofrequency+field-induced+hyperthermic+cytotoxicity+in+human+cancer+cells+using+cetuximab-targeted+gold+nanoparticles.">Noninvasive radiofrequency field-induced hyperthermic cytotoxicity in human cancer cells using cetuximab-targeted gold nanoparticles.</a> J. Exp. Ther. Oncol. 7, 313 (2008).</li><li>Gannon, C. J., Patra, C. R., Bhattacharya, R., Mukherjee, P., Curley, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+gold+nanoparticles+enhance+non-invasive+radiofrequency+thermal+destruction+of+human+gastrointestinal+cancer+cells.">Intracellular gold nanoparticles enhance non-invasive radiofrequency thermal destruction of human gastrointestinal cancer cells.</a> Journal of Nanobiotechnology. 6, 2 (2008).</li><li>Raoof, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+antibody-conjugated+gold+nanoparticles+in+the+endolysosomal+nanoenvironment:+implications+for+noninvasive+radiofrequency-based+cancer+therapy.">Stability of antibody-conjugated gold nanoparticles in the endolysosomal nanoenvironment: implications for noninvasive radiofrequency-based cancer therapy.</a> Nanomedicine. 8, 1096 (2012).</li><li>Glazer, E. S., Massey, K. L., Zhu, C., Curley, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+carcinoma+cells+are+susceptible+to+noninvasive+radio+frequency+fields+after+treatment+with+targeted+gold+nanoparticles.">Pancreatic carcinoma cells are susceptible to noninvasive radio frequency fields after treatment with targeted gold nanoparticles.</a> Surgery. 148, 319 (2010).</li><li>Glazer, E. S., Curley, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiofrequency+field-induced+thermal+cytotoxicity+in+cancer+cells+treated+with+fluorescent+nanoparticles.">Radiofrequency field-induced thermal cytotoxicity in cancer cells treated with fluorescent nanoparticles.</a> Cancer. 116, 3285 (2010).</li><li>Glazer, E. S., Curley, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+radiofrequency+ablation+of+malignancies+mediated+by+quantum+dots,+gold+nanoparticles+and+carbon+nanotubes.">Non-invasive radiofrequency ablation of malignancies mediated by quantum dots, gold nanoparticles and carbon nanotubes.</a> Therapeutic Delivery. 2, 1325 (2011).</li><li>Corr, S. J., Raoof, M., Mackeyev, Y., Phounsavath, S., Cheney, M. A., Cisneros, B. T., Shur, M., Gozin, M., McNally, P. J., Wilson, L. J., Curley, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrate-Capped+Gold+Nanoparticle+Electrophoretic+Heat+Production+in+Response+to+a+Time-Varying+Radiofrequency+Electric-Field.">Citrate-Capped Gold Nanoparticle Electrophoretic Heat Production in Response to a Time-Varying Radiofrequency Electric-Field.</a> J. Phys. Chem. C. 116, 24380 (2012).</li><li>Kruse, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Radio-Frequency+Coupling+Network+for+Heating+of+Citrate-Coated+Gold+Nanoparticles+for+Cancer+Therapy:+Design+and+Analysis.">A Radio-Frequency Coupling Network for Heating of Citrate-Coated Gold Nanoparticles for Cancer Therapy: Design and Analysis.</a> IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 58, 10 (2011).</li><li>Li, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Negligible+absorption+of+radiofrequency+radiation+by+colloidal+gold+nanoparticles.">Negligible absorption of radiofrequency radiation by colloidal gold nanoparticles.</a> J. Colloid Interf. Sci. 358, 47 (2011).</li><li>Liu, X., Chen, H. J., Chen, X., Parini, C., Wen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low+frequency+heating+of+gold+nanoparticle+dispersions+for+non-invasive+thermal+therapies.">Low frequency heating of gold nanoparticle dispersions for non-invasive thermal therapies.</a> Nanoscale. , (2012).</li><li>Sassaroli, E., Li, K. C. P., O'Neill, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radio+frequency+absorption+in+gold+nanoparticle+suspensions:+a+phenomenological+study.">Radio frequency absorption in gold nanoparticle suspensions: a phenomenological study.</a> J. Phys. D App. Phys. 45, 075303 (2012).</li><li>Worle-Knirsch, J. M., Pulskamp, K., Krug, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oops+they+did+it+again!+Carbon+nanotubes+hoax+scientists+in+viability+assays.">Oops they did it again! Carbon nanotubes hoax scientists in viability assays.</a> Nano Lett. 6, 1261 (2006).</li></ol>

Wir haben nichts zu offenbaren.

Diese Protokolle ermöglichen dem Experimentator, um den Umfang, in dem Nanomaterialien (in diesem Fall AuNPs) kann RF-Hyperthermie zur Behandlung von Krebs erhöhen vollständig zu analysieren. Das erste Protokoll speziell mit der Analyse der Wärmeerzeugung aus hoch-konzentriert und gereinigt AuNP Proben. Obwohl auch andere Gruppen haben die Wärmeproduktion in erster Linie von den Puffern, die die AuNPs sind und nicht in den AuNPs sich 9-11 ausgesetzt berichtet, nutzten ihre HF-Systeme niedrigere Konzentra...

Die Absorption von HF-Energie, die durch biologisches Gewebe (aufgrund ihrer inhärenten elektrischen Permittivität) führt zu erhöhten Gewebetemperaturen als Funktion der Zeit, die schließlich zum Tod führt durch Hyperthermie Zelle. Es wird vermutet, dass Krebs Hyperthermie kann durch den Einsatz von Nanomaterialien, die gezielt in der Krebszelle verinnerlichen und fungieren als RF-Wärmewandler, so dass die benachbarten gesunden, normalen Zellen intakt optimiert werden. Mehrere Berichte haben bereits gezeigt, dass eine Vielzahl von Nanopartikeln kann so effektiv RF Wärmequellen, die in der Krebshilfe Nekrose 4.1 handeln. In dieser Hinsicht, Gold-Nanopartikel (AuNPs) 3-5, Kohlenstoff-Nanoröhren ein, und Quantenpunkte 6, 7 spannende Eigenschaften zeigen, wenn in in vitro und in vivo RF Experimente verwendet. Obwohl die genaue Natur des Heizmechanismus dieser Nanopartikel, wenn sie einem HF-Feld ausgesetzt wird noch diskutiert wird, eine Reihe vongrundlegende Experimente mit AuNPs hat große Bedeutung sowohl NP Größe und Aggregations platziert. Es wurde gezeigt, dass nur AuNPs mit Durchmessern &lt;10 nm wird erwärmt, wenn sie einem HF-Feld 8 ausgesetzt. Außerdem ist dieser Heizmechanismus signifikant abgeschwächt, wenn die AuNPs aggregiert werden. Diese Aggregation Zustand wurde auch in in-vitro-Modelle, die Bedeutung auf die Optimierung AuNP kolloidalen Stabilität innerhalb endolysomal intrazellulären Kompartimenten für eine wirksame Therapie RF 4 angeordnet validiert. Allerdings können die Techniken und experimentellen Grundlagen für die Erhebung und Bewertung dieser Daten problematisch sein, vor allem bei der Validierung von HF-Wärme Profile NP Kolloide. Mehrere Berichte haben gezeigt, dass Joule Erwärmung des ionischen Hintergrund Suspension, die Nanopartikel sind in abgehängten kann die Hauptquelle der RF Wärmeproduktion und nicht die Nanopartikel selbst 9-12 sein. Obwohl unsere jüngsten Papier 8 hat validiert ter von HF-Wechselwirkungen Verwendung bei der Erzeugung von Wärme aus AuNPs von Durchmessern von weniger als 10 nm, wollen wir diese Protokolle im Detail in diesem Artikel beschreiben. Wir haben auch die Protokolle und Techniken erforderlich, um die Wirksamkeit der Hyperthermie AuNPs als Wärmemittel in in vitro und in vivo Experimente für Leberkrebsmodellen zu bewerten demonstrieren. Obwohl wir in erster Linie auf einfache Kolloide Citrat bedeckten AuNPs können die gleichen Techniken auf andere AuNP Hybride wie Antikörper-und Chemotherapie-konjugierten Komplexen angewendet werden. Durch die Beachtung dieser Grundsätze der Experimentator sollte hoffentlich in der Lage, schnell zu bewerten das Potenzial für jedes Nanomaterial, um eine effektive RF-induzierte Thermo hyperthermic Mittel sein.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagent/Material</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 ml gold nanoparticles (5 nm)</td>
			<td>Ted Pella, INC</td>
			<td>15702-5</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-4/-15 Centrifugal Filter Units (50 kDa)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC805024/UFC910096</td>
			<td>(4 ml and 15 ml volumes)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM X1 Cell Culture Media</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>10-101-CV</td>
			<td>(add extra nutrients as necessary)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F4135-500 ml</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper Tape</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>16072</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanzius RF System (13.56 MHZ)</td>
			<td>ThermMed, LLC, Inc. (Erie, PA, USA)</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IR Camera</td>
			<td>FLIR SC 6000, FLIR Systems, Inc. (Boston, MA, USA)</td>
			<td>Contact FLIR</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3 ml Quartz Cuvette</td>
			<td>ThermMed, LLC, Inc. (Erie, PA, USA)</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon Sample holder with Rotary Stage</td>
			<td>ThermMed, LLC, Inc. (Erie, PA, USA)</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPECTROstar Nano Microplate reader</td>
			<td>BGM Labtech</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-Vis spectrometer</td>
			<td>Applied Nanofluorescence, Houston, TX)</td>
			<td>NS1 NanoSpectralyzer</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ICP-OES</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>Optima 4300 DV</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zetasizer</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>Zen 3600 Zetasizer</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

protocols for assessing radiofrequency interactions with gold nanoparticles and biological systems for non-invasive hyperthermia cancer therapy

Krebs-Therapien, die weniger toxisch und invasiv als die existierende sind sehr wünschenswert. Der Einsatz von elektrischen HF-Felder, die tief in den Körper eindringen und minimale Toxizität, werden derzeit als ein brauchbares Mittel der nicht-invasiven Krebstherapie untersucht. Es ist vorgesehen, dass die Wechselwirkungen von HF-Energie mit verinnerlicht Nanopartikel (NP) kann die Wärme, die dann dazu führen kann Überhitzung (Hyperthermie) der Zelle zu befreien, schließlich endet in Zelle Nekrose. Im Fall von nicht-biologischen Systemen stellen wir ausführliche Protokolle über die Quantifizierung der Wärme durch hochkonzentrierte NP Kolloide befreit. Für biologische Systeme, bei der in-vitro-Experimente beschreiben wir die Verfahren und Bedingungen, die zur Krebszellen, um HF-Energie effektiv aussetzen ohne Groß Medien Heizung Artefakte deutlich Verschleierung der Daten eingehalten werden müssen. Schließlich geben wir eine detaillierte Methodik foder in vivo Mausmodellen mit Eileiterleberkrebs Tumoren.

1. Erfassen der HF-Erwärmung von NP Kolloide: AuNPs als Beispiel. Nach dem folgenden Abschnitt 1.1 - 1.2.3 erwarten, eine hochkonzentrierte, stabile und gereinigte Lösung von 5 nm und 10 nm Durchmesser AuNPs haben. Von den 500 ml-als gekauft Stammlösung erwarten, dass mindestens 4 ml Lösung in einer Konzentration von 1000 mg / L zu erhalten Der Unterschied in h zwischen den AuNPs und dem Hintergrund DI-Pufferlösung bei dieser Konzentration sollte ~ 0,25 ° C / s und 0,1 ° C / s für 5 nm ...

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Protocols for Assessing Radiofrequency Interactions with Gold Nanoparticles and Biological Systems for Non-invasive Hyperthermia Cancer Therapy | Medicine | Video

Protocols for Assessing Radiofrequency Interactions with Gold Nanoparticles and Biological Systems for Non-invasive Hyperthermia Cancer Therapy

Wir beschreiben die verwendet werden, um die Wechselwirkungen von 13,56 MHz Hochfrequenz-(RF)-Protokolle untersuchen elektrischen Felder, die mit Gold-Nanopartikel Kolloide in beiden nicht-biologischen und biologischen Systemen (in vitro / vivo). Diese Wechselwirkung ist für die Anwendung in der Krebstherapie untersucht.

Protokolle für die Beurteilung der Radiofrequenz-Wechselwirkungen mit Gold-Nanopartikel und biologische Systeme für die Nicht-invasive Krebstherapie Hyperthermie

Cancer therapies  which are less toxic and invasive than their existing counterparts are highly  desirable. The use of RF electric-fields that penetrate ...

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10.7K Aufrufe.  University of Texas M.D. Anderson Cancer Center.  Wir beschreiben die verwendet werden, um die Wechselwirkungen von 13,56 MHz Hochfrequenz-(RF)-Protokolle untersuchen elektrischen Felder, die mit Gold-Nanopartikel Kolloide in beiden nicht-biologischen und biologischen Systemen (in vitro / vivo). Diese Wechselwirkung ist für die Anwendung in der Krebstherapie untersucht. 

Serie: Protocols for Assessing Radiofrequency Interactions with Gold Nanoparticles and Biological Systems for Non-invasive Hyperthermia Cancer Therapy

Staining Protocols for Human Pancreatic Islets

Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and beta mass ranges from 500 to 1500 mg 1-3. With this known heterogeneity, a standard processing and staining procedure was developed so that pancreatic regions were clearly defined and islets characterized using rigorous histopathology and immunolocalization examinations. 
Standardized procedures for processing human pancreas recovered from organ donors are described in part 1 of this series. The pancreas is processed into 3 main regions (head, body, tail) followed by transverse sections. Transverse sections from the pancreas head are further divided, as indicated based on size, and numbered alphabetically to denote subsections. This standardization allows for a complete cross sectional analysis of the head region including the uncinate region which contains islets composed primarily of pancreatic polypeptide cells to the tail region.
The current report comprises part 2 of this series and describes the procedures used for serial sectioning and histopathological characterization of the pancreatic paraffin sections with an emphasis on islet endocrine cells, replication, and T-cell infiltrates. Pathology of pancreatic sections is intended to characterize both exocrine, ductular, and endocrine components. The exocrine compartment is evaluated for the presence of pancreatitis (active or chronic), atrophy, fibrosis, and fat, as well as the duct system, particularly in relationship to the presence of pancreatic intraductal neoplasia4. Islets are evaluated for morphology, size, and density, endocrine cells, inflammation, fibrosis, amyloid, and the presence of replicating or apoptotic cells using H&amp;E and IHC stains. 
The final component described in part 2 is the provision of the stained slides as digitized whole slide images. The digitized slides are organized by case and pancreas region in an online pathology database creating a virtual biobank. Access to this online collection is currently provided to over 200 clinicians and scientists involved in type 1 diabetes research. The online database provides a means for rapid and complete data sharing and for investigators to select blocks for paraffin or frozen serial sections.

This video demonstrates procedures for characterization of human pancreatic islets using hematoxylin and eosin (H&E) and immunohistochemistry (IHC). Pancreatic sections from head, body, and tail regions are stained by both H&amp;E and IHC to determine islet endocrine composition (insulin, glucagon, and pancreatic polypeptide), cell replication (Ki67), and inflammatory infiltrates (H&E, CD3). The uncinate region is localized using IHC for pancreatic polypeptide.

Färbeprotokollen for Human Pankreasinseln

Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and ...

Forschung

Medizin

Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for Cancer Therapy Monitoring

In molecular imaging, positron emission tomography (PET) and optical imaging (OI) are two of the most important and thus most widely used modalities1-3. PET is characterized by its excellent sensitivity and quantification ability while OI is notable for non-radiation, relative low cost, short scanning time, high throughput, and wide availability to basic researchers. However, both modalities have their shortcomings as well. PET suffers from poor spatial resolution and high cost, while OI is mostly limited to preclinical applications because of its limited tissue penetration along with prominent scattering optical signals through the thickness of living tissues.
 Recently a bridge between PET and OI has emerged with the discovery of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI)4-6. CLI is a new imaging modality that harnesses Cerenkov Radiation (CR) to image radionuclides with OI instruments. Russian Nobel laureate Alekseyevich Cerenkov and his colleagues originally discovered CR in 1934. It is a form of electromagnetic radiation emitted when a charged particle travels at a superluminal speed in a dielectric medium7,8. The charged particle, whether positron or electron, perturbs the electromagnetic field of the medium by displacing the electrons in its atoms. After passing of the disruption photons are emitted as the displaced electrons return to the ground state. For instance, one 18F decay was estimated to produce an average of 3 photons in water5. 
 Since its emergence, CLI has been investigated for its use in a variety of preclinical applications including in vivo tumor imaging, reporter gene imaging, radiotracer development, multimodality imaging, among others4,5,9,10,11. The most important reason why CLI has enjoyed much success so far is that this new technology takes advantage of the low cost and wide availability of OI to image radionuclides, which used to be imaged only by more expensive and less available nuclear imaging modalities such as PET.
 Here, we present the method of using CLI to monitor cancer drug therapy. Our group has recently investigated this new application and validated its feasibility by a proof-of-concept study12. We demonstrated that CLI and PET exhibited excellent correlations across different tumor xenografts and imaging probes. This is consistent with the overarching principle of CR that CLI essentially visualizes the same radionuclides as PET. We selected Bevacizumab (Avastin; Genentech/Roche) as our therapeutic agent because it is a well-known angiogenesis inhibitor13,14. Maturation of this technology in the near future can be envisioned to have a significant impact on preclinical drug development, screening, as well as therapy monitoring of patients receiving treatments.

Cerenkov Luminescence Imaging CLI for Cancer Therapy Monitoring

Use of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for monitoring preclinical cancer treatment is described here. This method takes advantage of Cerenkov Radiation (CR) and optical imaging (OI) to visualize radiolabeled probes and thus provides an alternative to PET in preclinical therapeutic monitoring and drug screening.

Cerenkov Lumineszenz Imaging (CLI) for Cancer Therapy Überwachung

In  molecular imaging, positron emission tomography (PET) and optical imaging (OI)  are two of the most important and thus most widely used modalities1-3. ...

Non-invasive Optical Measurement of Cerebral Metabolism and Hemodynamics in Infants

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can accurately screen for brain injury, monitor injury evolution, or assess response to therapy. The energy used by neurons is derived largely from tissue oxidative metabolism, and neural hyperactivity and cell death are reflected by corresponding changes in cerebral oxygen metabolism (CMRO2). Thus, measures of CMRO2 are reflective of neuronal viability and provide critical diagnostic information, making CMRO2 an ideal target for bedside measurement of brain health.
Brain-imaging techniques such as positron emission tomography (PET) and single-photon emission computed tomography (SPECT) yield measures of cerebral glucose and oxygen metabolism, but these techniques require the administration of radionucleotides, so they are used in only the most acute cases.
Continuous-wave near-infrared spectroscopy (CWNIRS) provides non-invasive and non-ionizing radiation measures of hemoglobin oxygen saturation (SO2) as a surrogate for cerebral oxygen consumption. However, SO2 is less than ideal as a surrogate for cerebral oxygen metabolism as it is influenced by both oxygen delivery and consumption. Furthermore, measurements of SO2 are not sensitive enough to detect brain injury hours after the insult 1,2, because oxygen consumption and delivery reach equilibrium after acute transients 3. We investigated the possibility of using more sophisticated NIRS optical methods to quantify cerebral oxygen metabolism at the bedside in healthy and brain-injured newborns. More specifically, we combined the frequency-domain NIRS (FDNIRS) measure of SO2 with the diffuse correlation spectroscopy (DCS) measure of blood flow index (CBFi) to yield an index of CMRO2 (CMRO2i) 4,5.
With the combined FDNIRS/DCS system we are able to quantify cerebral metabolism and hemodynamics. This represents an improvement over CWNIRS for detecting brain health, brain development, and response to therapy in neonates. Moreover, this method adheres to all neonatal intensive care unit (NICU) policies on infection control and institutional policies on laser safety. Future work will seek to integrate the two instruments to reduce acquisition time at the bedside and to implement real-time feedback on data quality to reduce the rate of data rejection.

We combined frequency-domain near-infrared spectroscopy measures of cerebral hemoglobin oxygenation with diffuse correlation spectroscopy measures of cerebral blood flow index to estimate an index of oxygen metabolism. We tested the utility of this measure as a bedside screening tool to evaluate the health and development of the newborn brain.

Non-invasive optische Messung des zerebralen Metabolismus und Hämodynamik bei Säuglingen

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality  and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can  accurately ...

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

Non-invasive Beurteilung der mikrovaskulären und Endothelfunktion

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

Intravital imaging has emerged as an indispensable tool in biological research. In the process, many imaging techniques have been developed to study different biological processes in animals non-invasively. However, a major technical limitation in existing intravital imaging modalities is the inability to combine non-invasive, longitudinal imaging with single-cell resolution capabilities. We show here how transplantation into the anterior chamber of the eye circumvents such significant limitation offering a versatile experimental platform that enables non-invasive, longitudinal imaging with cellular resolution in vivo. We demonstrate the transplantation procedure in the mouse and provide representative results using a model with clinical relevance, namely pancreatic islet transplantation. In addition to enabling direct visualization in a variety of tissues transplanted into the anterior chamber of the eye, this approach provides a platform to screen drugs by performing long-term follow up and monitoring in target tissues. Because of its versatility, tissue/cell transplantation into the anterior chamber of the eye not only benefits transplantation therapies, it extends to other in vivo applications to study physiological and pathophysiological processes such as signal transduction and cancer or autoimmune disease development.

Transplantation into the Anterior Chamber of the Eye for Longitudinal, Non-invasive In vivo Imaging with Single-cell Resolution in Real-time

A new approach combining intraocular transplantation and confocal microscopy enables longitudinal, non-invasive real-time imaging with single-cell resolution within grafted tissues in vivo. We demonstrate how to transplant pancreatic islets into the anterior chamber of the mouse eye.

Transplantation in die Vorderkammer des Auges für Längs-, Non-invasive<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging mit Single-cell Auflösung in Echtzeit

Intravital imaging has emerged as an indispensable tool in biological research.  In the process, many imaging techniques have been developed to study ...

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to return to normal in a large majority of patients2, which is mainly due to current lack of clinical treatment for acute stroke. This necessitates understanding the physiological effects of cerebral ischemia on brain tissue over time and is a major area of active research. Towards this end, experimental progress has been made using rats as a preclinical model for stroke, particularly, using non-invasive methods such as 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) coupled with Positron Emission Tomography (PET) imaging3,10,17. Here we present a strategy for inducing cerebral ischemia in rats by middle cerebral artery occlusion (MCAO) that mimics focal cerebral ischemia in humans, and imaging its effects over 24 hr using FDG-PET coupled with X-ray computed tomography (CT) with an Albira PET-CT instrument. A VOI template atlas was subsequently fused to the cerebral rat data to enable a unbiased analysis of the brain and its sub-regions4. In addition, a method for 3D visualization of the FDG-PET-CT time course is presented. In summary, we present a detailed protocol for initiating, quantifying, and visualizing an induced ischemic stroke event in a living Sprague-Dawley rat in three dimensions using FDG-PET.

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Brain damage resulting from cerebral ischemia may be non-invasively imaged and studied in rats using pre-clinical positron emission tomography coupled with the injectable radioactive probe, 18F-fluorodeoxyglucose. Further, the use of modern software tools that include volume of interest (VOI) brain templates dramatically increase the quantitative information gleaned from these studies.

Nicht-invasive Bildgebung und Analyse der zerebralen Ischämie in lebenden Ratten mit Hilfe der Positronen-Emissions-Tomographie mit<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to ...

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of care consisting of surgical debulking and combination chemotherapy consisting of platinum and taxane compounds, almost 90% of patients recur within a few years. In these patients the development of chemoresistant disease limits the efficacy of currently available chemotherapy agents and therefore contributes to the high mortality. To discover novel therapy options that can target recurrent disease, appropriate animal models that closely mimic the clinical profile of patients with recurrent ovarian cancer are required. The challenge in monitoring intra-peritoneal (i.p.) disease limits the use of i.p. models and thus most xenografts are established subcutaneously. We have developed a sensitive optical imaging platform that allows the detection and anatomical location of i.p. tumor mass. The platform includes the use of optical reporters that extend from the visible light range to near infrared, which in combination with 2-dimensional X-ray co-registration can provide anatomical location of molecular signals. Detection is significantly improved by the use of a rotation system that drives the animal to multiple angular positions for 360 degree imaging, allowing the identification of tumors that are not visible in single orientation. This platform provides a unique model to non-invasively monitor tumor growth and evaluate the efficacy of new therapies for the prevention or treatment of recurrent ovarian cancer.

We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer.

Mausmodell für nicht-invasive Bildgebungs zu erfassen und zu überwachen Eierstockkrebs Rezidiv

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic mechanisms that contribute to the onset and progression of intestinal diseases. The identification of new molecules that promote these pathologies has led to a flurry of activity focused on the development of potential new therapies to inhibit their function. As a result, various pre-clinical mouse models with an intact immune system and stromal microenvironment are now heavily used. Here we describe three experimental protocols to test the efficacy of new therapeutics in pre-clinical models of (1) acute mucosal damage, (2) chronic colitis and/or colitis-associated colon cancer, and (3) sporadic colorectal cancer. We also outline procedures for serial endoscopic examination that can be used to document the therapeutic response of an individual tumor and to monitor the health of individual mice. These protocols provide complementary experimental platforms to test the effectiveness of therapeutic compounds shown to be well tolerated by mice.

We describe methods for longitudinal monitoring of the efficacy of therapeutics for the treatment of colonic pathologies in mice using a rigid endoscope. This protocol can be readily used for the characterization of the therapeutic response of an individual tumor in live mice and also for monitoring potential disease relapse.

Nicht-invasive Beurteilung der Wirksamkeit neuer Therapeutika für Darmpathologien Verwenden der seriellen endoskopische Bildgebung von lebenden Mäusen

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

Non-invasive Assessment of Dorsiflexor Muscle Function in Mice

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively affect skeletal muscle. This can result in a loss of muscle mass (atrophy) and/or loss of muscle quality (reduced force per unit of muscle mass), both of which are prevalent in chronic disease, muscle-specific disease, immobilization, and aging (sarcopenia). Skeletal muscle function in animals can be evaluated by a range of different tests. All tests have limitations related to the physiological testing environment, and the selection of a specific test often depends on the nature of the experiments. Here, we describe an in vivo, non-invasive technique involving a helpful and easy assessment of force frequency-curve (FFC) in mice that can be performed on the same animal over time. This permits monitoring of disease progression and/or efficacy&#160;of a potential therapeutic treatment.

Measurement of rodent skeletal muscle contractile function is a useful tool that can be used to track disease progression as well as efficacy of therapeutic intervention. We describe here the non-invasive, in vivo assessment of the dorsiflexor muscles that can be repeated over time in the same mouse.

Nicht-invasive Beurteilung des releveurs Muskelfunktion bei Mäusen

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively ...

Oxygenation-sensitive Cardiac MRI with Vasoactive Breathing Maneuvers for the Non-invasive Assessment of Coronary Microvascular Dysfunction

Oxygenation-sensitive cardiac magnetic resonance imaging (OS-CMR) is a diagnostic technique that uses the inherent paramagnetic properties of deoxyhemoglobin as an endogenous source of tissue contrast. Used in combination with standardized vasoactive breathing maneuvers (hyperventilation and apnea) as a potent non-pharmacologic vasomotor stimulus, OS-CMR can monitor changes in myocardial oxygenation. Quantifying such changes during the cardiac cycle and throughout vasoactive maneuvers can provide markers for coronary macro- and microvascular function and thereby circumvent the need for any extrinsic, intravenous contrast or pharmacologic stress agents.
OS-CMR uses the well-known sensitivity of T2*-weighted images to blood oxygenation. Oxygenation-sensitive images can be acquired on any cardiac MRI scanner using a modified standard clinical steady-state free precession (SSFP) cine sequence, making this technique vendor-agnostic and easily implemented. As a vasoactive breathing maneuver, we apply a 4-min breathing protocol of 120 s of free breathing, 60 s of paced hyperventilation, followed by an expiratory breath-hold of at least 30 s. The regional and global response of myocardial tissue oxygenation to this maneuver can be assessed by tracking the signal intensity change. The change over the initial 30 s of the post-hyperventilation breath-hold, referred to as the breathing-induced myocardial oxygenation reserve (B-MORE) has been studied in healthy people and various pathologies. A detailed protocol for performing oxygen-sensitive CMR scans with vasoactive maneuvers is provided.
As demonstrated in patients with microvascular dysfunction in yet incompletely understood conditions, such as inducible ischemia with no obstructive coronary artery stenosis (INOCA), heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF), or microvascular dysfunction after heart transplantation, this approach provides unique, clinically important, and complementary information on coronary vascular function.

The assessment of microvascular function by oxygenation-sensitive cardiac magnetic resonance imaging in combination with vasoactive breathing maneuvers is unique in its ability to assess rapid dynamic changes in myocardial oxygenation in vivo and, thus, may serve as a critically important diagnostic technique for coronary vascular function.