Besonderer Dank geht an Sarah Kossak, Mitchell Guanzon, Sung Yeun Yang und Li Guo Jia, für ihre Zusammenarbeit während der endoskopischen Beurteilung ihrer Versuchstiere.

1. Einrichten des Endoskopie-System <ol><li> Stellen Sie das System vor der Endoskopie Anästhesie die Mäuse nach der Anleitung des Herstellers. Verwenden Sie ein Video Ureteroskop für den Menschen für dieses Protokoll entwickelt (Abbildung 1). Der Außendurchmesser des Einführungsrohres beträgt 9,9 Fr (3,3 mm), dessen distales Ende 8.5 Fr (2,8 mm), und der Innendurchmesser des Instrumentenkanals 6 Fr (1,2 mm). </li><li> [9] Obwohl die Verwendung von Endoskopen nicht auf die Übertragung von Krankheiten in Verbindung gebracht worden, Sterilisieren des Endoskops und der Linse mit 70% Ethanol 10 oder mit geeigneten Techniken bei der Arbeit mit sporenbildenden Mikroorganismen. Bereiten bakteriostatische steriles Gleitmittel und nicht kratz wischen Gewebe, um die Endoskopspitze zu sättigen. </li><li> Bringen Sie ein 3-ml-Spritze voller Luft (oder eine geeignete CO 2-Gasgemisch) an die Spitze des Instrumentenkanals. </li><li> Schalten Sie den Strom an und richten Sie den Weißabgleich in normalen weißen Licht,sowie Narrow Band Imaging (NBI)-Modus, wenn anwendbar. Seit 2001 hat NBI diagnostische Bildgebung gewährt hat, es feinen Blutgefäßstrukturen auf Schleimhäuten, einschließlich Colitis und Tumorläsionen, die charakteristisch abnormale Gefäß 11 haben betont. NBI-Filter-Modus beschränkt die Wellenlänge des einfallenden Lichts, um 390-445 nm und 530-550 nm, die Strukturen mit Hämoglobin hervorhebt. </li><li> Drucken Sie das Formular Scoring-Bewertung (Abbildung 2), um Ihre Ergebnisse aufzuzeichnen. Machen Sie sich mit erwarteten normalen und NBI Bilder (3A) sowie die Definition und Qualitäten der einzelnen Kriterien vor der Prüfung vertraut (siehe Abschnitt 6.1). </li><li> Vorbereitung einer farbstoffbasierten Lösung auf Phosphat-gepufferter Salzlösung (PBS) für Chromoendoskopie, falls gewünscht. In Chromoendoskopie wird die Prüfung durchgeführt, mit einem Farbstoff als Kontrastmittel zu Schleimhautveränderungen zu markieren. Verwenden Methylenblau (0,1-1%) und Indigokarmin (0,1%)-Lösungen (Abbildung 3B). Anmerkungdaß Methylenblau ist ein Oxidations-Reduktionsmittels, die oxidierende Radikale, indirekte Vernetzung der Aminosäurereste und Abbau der DNA 12, die mit der Probe Analyse stören könnten produzieren kann. </li></ol> 2. Allgemeine Anästhesie der Maus <ol><li> Wählen Sie das Narkosemittel und Art der Anwendung. Konsultieren Sie einen Tierarzt von einem Tier Ressource Einrichtung oder Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) in Bezug auf eine mögliche Störung von Medikamenten mit dem Immunsystem und Forschungsziele. Einige Medikamente können Zytokinprofils Ausdruck bei Tieren beeinflussen, einschließlich 13 Nagetiere. Verwenden injizierbaren Tribromethanol für Terminal Verfahren oder Isofluran für das Überleben Endoskopien, zusammen mit den entsprechenden Kontrollen. </li><li> Für die Induktion, verwalten 4-5% Isofluran in 100% Sauerstoff bei einer Rate von 0,2-0,5 L / min; verwenden 0,5-2% für die Wartung. Dieses Protokoll ist nicht für alle Tiere geeignet. Fragen Sie Ihren Tierarzt Anlagefür die richtige Anleitung und Schulung. Halten Sie sich an relevanten IACUC Empfehlungen, die höchsten Standards für den Tierschutz zu erreichen. Stellen Sie sicher, dass die Maus, wenn vollständig betäubt. </li><li> &quot;Strap&quot; der narkotisierten Maus an einer Tragfläche in einer Tabelle oder dorsalen Bauchlage mit Labor Klebeband. Hüten Sie sich vor der anatomischen Orientierung auf Ihrem Bildschirm Endoskop. Sichern Sie ihre unteren Extremitäten und Schwanz. Ein Band von Band kann auch auf der Brust angebracht werden, um eine Bewegung weg von dem Beatmungsgerät zu verhindern, aber nicht einzuschränken Brustatmungsbewegungen. </li></ol> 3. Detaillierte endoskopische Untersuchung <ol><li> Suchen Sie nach perianalen Läsionen, bevor Sie das Endoskop in den Mastdarm, dann durch den Anus voran den Umfang. </li><li> Bestreichen Sie die Endoskop mit sterilen OP-Gleitmittel. Achten Sie darauf, die Oberfläche der CCD (Charge Coupled Device)-Sensor. </li><li> Legen Sie das Endoskop und die Aufnahme zu starten. Aufgenommene Videos sind nützlich für meticulous Auswertung der Endoskopie, wenn nach der Prüfung erforderlich ist. Versuchen Sie, die Endoskopie in der kürzesten Länge der Zeit, Darm-/ Schleimhautreizungen zu minimieren, durchzuführen. </li><li> Bewerben Luft mit einer Spritze auseinander die Darmwände langsam eingestellt. Je nach Größe des Maus verwenden 1-2 ml Luft. Vermeiden Sie übermäßige Luftinsufflation, es kann Atemnot und Tod des narkotisierten Maus verursachen. </li><li> Voraus das Endoskop nach vorne, wie Sie den Weg mit Luft oder sanfte Drehung des Anwendungsbereichs zu löschen. Sie das Endoskop voran nicht, wenn Sie nicht sehen, das Darmlumen. Perforationen oder rektale / Darm Tränen können in dieser Phase vor allem bei jungen Mäusen (&lt;8-10 Wochen alt) auftreten. Machen Sie Fotos wie nötig. </li><li> Da der Anwendungsbereich geht, zu bewerten, ob es spontane Blutungen (definiert als natürliche Schleimhautblutungen nicht mit traumatischen Endoskopie verbunden sind). Spontane Blutungen beobachtet werden, wie das Endoskop in den Mastdarm und Dickdarm. </li><li> WieSess die Transparenz der Darmwand. Transparenz ist die Fähigkeit, um die intra-Blutgefäße in den Dickdarm zu visualisieren und dem der anderen umliegenden Eingeweide (Abbildung 4) definiert. Sanfte Bewegung der Rahmen (vor-zurück, rechts, links) wird dazu beitragen, zu bestimmen, ob die Blutgefäße in den Kontext anderer Eingeweide gesehen werden. Mesenterialen Fettgewebe kann auch gesehen werden. Beachten Sie, wenn das Rektum in der Beckenhöhle weniger transparent als der Dickdarmwand in die Bauchhöhle erscheint. </li><li> Überprüfen Sie, die Art und Anzahl der fokalen Läsionen (ödematösen Bereichen, Erosionen, Geschwüre, Tumormassen) zu bestimmen. Dies wird in der Scoring-Formular mit der Dickdarmentzündung Partitur und die dezimalen Kennungen, die entwickelt worden sind, aufgezeichnet werden. </li><li> Sobald der Bereich, in dem der Doppelpunkt biegt sich kaudal in den proximalen Dickdarm erreicht ist, ziehen Sie die Endoskop langsam und schauen auf das Vorhandensein von Kontaktblutungen (die wegen Brüchigkeit, nachdem die Schleimhaut trittEndoskop vorgeschoben oder entfernt). Es ist nicht notwendig, um den Darm Oberfläche absichtlich kratzen. Gesunde kolorektalen Schleimhaut nicht nach entsprechender endoskopische Untersuchung bluten. </li></ol> 4. Biopsie <ol><li> Wenn Biopsien benötigt werden, legen Sie die Biopsiezange durch das Endoskop Kanal für Instrumente gewidmet. Überwachen Sie den Fortschritt der Zange am Endoskop Bildschirm, um Darm-Perforation zu verhindern. </li><li> Öffnen der Biopsiebecher der Zange um eine 60-80 ° cup-Vollwinkel, und sie auf dem Gebiet von Interesse. Übermäßig geöffnet Zange oder Druck können zusätzliche Schichten der Darmgewebe, das in einem Biopsie-induzierte Perforation der Darmwand transparent gesunde Ergebnisse zu erreichen. Wenn Perforation auftritt, das Tier einschläfern während der Narkose nach Ihrer IACUC Empfehlungen. Perforationen führen Endotoxämie und Peritonitis. </li><li> Schließen Sie die Biopsie-Tassen, und ziehen Sie sie aus, während die Zange geschlossen. </li><li> Remohabe die Probe von der Zange durch Spülen der Gewebe mit einer Lösung, die sanft zum Gewebe und der Zange ist. RNA und später PBS sind gemeinsame Arbeits Lösungen, und wenn erforderlich, mit der Nadel, um die Probe zu entfernen. Vermeiden Erodieren der forcep Tassen oder Schneiden. </li></ol> 5. Erwachen aus der Narkose <ol><li> Nach Abschluss der Prüfung, eine warme Umgebung zu der Maus, bis er sich erholt. Verwenden Sie entweder eine elektrische Licht oder eine warme Unterlage, auf 37 ° C eingestellt Überhitzung vermeiden, periphere Vasodilatation beeinträchtigt Tier Erholung. Überwachen Sie die Maus eng bis zur vollständigen Genesung. </li></ol> 6. Integrierte Endoskopische Scoring System von Darmkrebs Gesundheit mit Dezimal Identifiers <ol><li> Verwenden Sie die Scoring-Form (Abbildung 2) und die Parameterdefinitionen unten (Endoskopische Beurteilung der Murine Colorectal Entzündungen und Tumoren Mit einem Dezimal-gewichtete Scoring System: Parameter-Definitionen und-Protokoll) fürBeispiele und das optionale &quot;Distal-Proximal Endoskopische Colitis Scoring System&quot; (D-PECS) als Leitlinien für die Beurteilung nonbiased und detaillierte Aufzeichnungen. </li><li> Note die vier Parameter des kolorektalen Entzündung auf das Punktesystem Form (Abbildung 2) beschrieben. Akribisch bewerten die Perianalregion, Darm Transparenz, Art der Darm-Blutungen (wenn vorhanden) und Vorhandensein und die Menge von fokalen Läsionen (erosive, Colitis und / oder Tumor). </li><li> Bei der Beurteilung von Tumoren zu Forschungszwecken, untersuchen Sie die Menge, die Lage und Größe, und beschreiben sie mit Hilfe der Colon-Karte und Balkendiagramm auf der Scoring-Form. Die numerische Summe der erzielten Ergebnisse und der Anzahl der Läsionen (wenn zutreffend) die Hintergrund Kolon-Entzündungen, die vorherrschende Art der Verletzung, und die Anzahl der Läsionen zu bestimmen. </li></ol>

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	<li>Huang, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonoscopy+in+mice.">Colonoscopy in mice.</a> Surg. Endosc. 16, 22-24 (2002).</li><li>Wirtz, S., Becker, C., Blumberg, R., Galle, P. R., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+T+cell-dependent+experimental+colitis+in+SCID+mice+by+local+administration+of+an+adenovirus+expressing+IL-18+antisense+mRNA.">Treatment of T cell-dependent experimental colitis in SCID mice by local administration of an adenovirus expressing IL-18 antisense mRNA.</a> J. Immunol. 168, 411-420 (2002).</li><li>Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Miniaturized+multichannel+near+infrared+endoscope+for+mouse+imaging.">Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging.</a> Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).</li><li>Becker, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+colitis+and+colon+cancer+development+in+mice+using+high+resolution+chromoendoscopy.">In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy.</a> Gut. 54, 950-954 (2005).</li><li>Ravnic, D. J., Konerding, M. A., Huss, H. T., Wolloscheck, T., Pratt, J. P., Mentzer, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+microvideo+endoscopy+of+the+colonic+microcirculation.">Murine microvideo endoscopy of the colonic microcirculation.</a> J. Surg. Res. 142, 97-103 (2007).</li><li>Hamilton, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+for+mast+cell+tryptase+in+acute+experimental+colitis.">Essential role for mast cell tryptase in acute experimental colitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 290-295 (2011).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+colonoscopy+in+live+mice.">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li><li>Hensley, H. H., Merkel, C. E., Chang, W. C., Devarajan, K., Cooper, H. S., Clapper, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoscopic+imaging+and+size+estimation+of+colorectal+adenomas+in+the+multiple+intestinal+neoplasia+mouse.">Endoscopic imaging and size estimation of colorectal adenomas in the multiple intestinal neoplasia mouse.</a> Gastrointest. Endosc. 69, 742-749 (2009).</li><li>Banerjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+control+during+GI+endoscopy.">Infection control during GI endoscopy.</a> Gastrointest. Endosc. 67, 781-790 (2008).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleaning+and+disinfection+of+equipment+for+gastrointestinal+endoscopy.+Report+of+a+Working.">Cleaning and disinfection of equipment for gastrointestinal endoscopy. Report of a Working.</a> Party of the British Society of Gastroenterology Endoscopy Committee. Gut. 42, 585-593 (1998).</li><li>Sano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+diagnostic+method+based+on+color+imaging+using+narrow+band+imaging+(NBI)+system+for+gastrointestinal+tract.">New diagnostic method based on color imaging using narrow band imaging (NBI) system for gastrointestinal tract.</a> Gastrointest. Endosc. 53, 125-12 (2001).</li><li>Davies, J., Burke, D., Olliver, J. R., Hardie, L. J., Wild, C. P., Routledge, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylene+blue+but+not+indigo+carmine+causes+DNA+damage+to+colonocytes+in+vitro+and+in+vivo+at+concentrations+used+in+clinical+chromoendoscopy.">Methylene blue but not indigo carmine causes DNA damage to colonocytes in vitro and in vivo at concentrations used in clinical chromoendoscopy.</a> Gut. 56, 155-156 (2007).</li><li>Chiang, N., Schwab, J. M., Fredman, G., Kasuga, K., Gelman, S., Serhan, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetics+impact+the+resolution+of+inflammation.">Anesthetics impact the resolution of inflammation.</a> PLoS One. 3, e1879 (2008).</li><li>Zilberman, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+digital+flexible+ureteroscope:+in+vitro+assessment+of+optical+characteristics.">The digital flexible ureteroscope: in vitro assessment of optical characteristics.</a> J. Endourol. 25, 519-522 (2011).</li><li>Machida, H., Sano, Y., Hamamoto, Y., Muto, M., Kozu, T., Tajiri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Narrow-band+imaging+in+the+diagnosis+of+colorectal+mucosal+lesions:+a+pilot+study.">Narrow-band imaging in the diagnosis of colorectal mucosal lesions: a pilot study.</a> Endoscopy. 36, 1094-1098 (2004).</li><li>Dohoo, I., Martin, W., Stryhn, H., McPike, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cohort+studies.">Cohort studies.</a> Veterinary Epidemiologic Research. , 151-162 (2003).</li><li>Yiou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiology+of+pelvic+floor+disorders:+evidence+from+a+histomorphologic+study+of+the+perineum+and+a+mouse+model+of+rectal+prolapse.">The pathophysiology of pelvic floor disorders: evidence from a histomorphologic study of the perineum and a mouse model of rectal prolapse.</a> J. Anat. 199, 599-607 (2001).</li></ol>

Keine finanziellen oder Konflikt offen Interessen.

Es gibt mehrere Überlegungen zur Modifikation und Fehlerbehebung der endoskopische Technik in Mäusen. Kritische Aspekte des Verfahrens, die während der Nutzung der flexiblen Endoskopie gemeistert werden müssen, gehören die Einstellung der Luftmenge benötigt, um Blähungen und Atemwegs Kompromiss der Maus zu verhindern, und kleinere technische Aspekte der Ansichtssteuerung bei der Koordinierung der Winkelung und Drehmomentsteuerungen . Drehmomentregelung ist wichtig, um das Risiko einer Darmdurchbruch zu minimieren...

Murine Endoskopie hat als nützliches Forschungswerkzeug für über ein Jahrzehnt 1-3 durchgeführt. Bis heute haben die meisten Studien unter Verwendung muriner Endoskopie starre Endoskope verwendet, obwohl einige auch Sigmoidoskopie. Murine Endoskopie liefert sofortige Ergebnisse und eine objektive Schätzung der Höhe der Darm Normalität, der Schwere der Entzündung und Tumorprogression im Vergleich zu indirekten Maßnahmen wie Gewichtsverlust, Durchfall und Histologie (was suboptimal ist, wenn Läsionen sind lückenhaft), während bietet Einblicke auf die allgemeine Gesundheit des Dickdarms. Vor allem ermöglicht die Endoskopie für die wiederholte Beurteilung der Versuchstiermodellen über die Zeit, im Gegensatz zu herkömmlichen histologischen Untersuchung, die das Tier eingeschläfert werden Doppelpunkte und für die Analyse geerntet 1 erfordert. Trotz dieser Vorteile hat sich die Verwendung von murinen endoskopische Technik nicht weit verbreitet gewesen, und ist durch das Fehlen von standardisierten Protokollen zur Implementie begrenztauf und Scoring von pathologischen Befund. Richtig umgesetzt, murine Endoskopie ist sehr vielversprechend, um unser Verständnis und Charakterisierung von Tiermodellen von mehreren chronischen Magen-Darm-Erkrankung Staaten, darunter entzündliche Darmerkrankungen, Colitis, und kolorektalen Tumoren weiter zu erleichtern. Der Nutzen der murinen endoskopische Technik Scharniere auf seine Reproduzierbarkeit und Objektivität, die die Existenz von standardisierten Untersuchungsverfahren und eine konsistente, nicht-redundante und zuverlässige Scoring-System für Darmerkrankungen erfordert. Mindestens drei beschreibende Bewertungssysteme für die endoskopische Beurteilung ulcerosa 4-6 sowie für Kolon-Tumoren in Mäusen 4,7,8 veröffentlicht worden. Diese berichtet, Ansätze und Scoring-Systeme sind jedoch nicht ohne weiteres vergleichbar zwischen den Studien. In vielen Fällen gibt es keine klare Definition der Kriterien für die Klassifizierung von Läsionen verwendet, und wenn Kriterien gegeben sind, stark variieren sie. Außerdemgibt es keine Berichte über Scoring-Systeme, die die Bewertung sowohl ulcerosa und Tumoren, zwei der häufigsten Darmerkrankungen, die gleichzeitig auftreten und interaktive Effekte auf das Ergebnis kann in einem einzigen Messinstrument zu integrieren. Schließlich sind die endoskopischen Scoring-Systeme, die für die Colitis existieren oft entzündliche Kategorien mit Diskriminierung beschränkt (dh. Engen Scoring-Optionen über kurze ganze Zahl Waage, oft 1-4), um richtig darstellen Fortschreiten der Krankheit Szenarien und ermöglichen den Einsatz von parametrischen statistischen Analyse. In diesem Papier beschreiben wir die Verwendung eines flexiblen Endoskops, um die Schwere von Mäuse ulcerosa und Kolontumoren bewerten und beschreiben ein Standardprotokoll für die Anwendung dieser Technologie in der anatomischen Beurteilung der perianalen Region, Rektum und distalen Kolons. Wir veranschaulichen, effektiven Fehlersuche während der Endoskopie, um Trauma-und Bildartefakte zu minimieren, und wir beschreiben eine reproduzierbare Bewertungssystembasierend auf validierten veröffentlichten klinischen Parametern. Das Scoring-System integriert Auswertung der beiden Darmentzündung und Tumoren mit einem hohen Grad an Diskriminierung mit 12 möglichen Sorten von Entzündungen, Tumor Mapping-und Zeichenoptionen und einer neuartigen Dezimaleinheit System (dh, Dezimal-Kennungen), um Ergebnisse mit spezifischen diagnostischen Wert zu markieren ( dh Tumorentwicklung, Komplikationen während der Endoskopie, etc.). Die Verwendung von Dezimalkennungen ermöglicht eine schnelle Verfolgung der relevanten Datensätze für Downstream-Analyse. Schließlich führen wir Zuverlässigkeit und Gültigkeit Testen der Scoring-System in mehreren murinen Modellen von Colitis ulcerosa und-assoziierten Krebs (Dextransulfat-Natrium (DSS)-induzierter Kolitis, Clostridium difficile-Infektion, und azoxymethane / DSS-induzierten Dickdarmkrebs).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="696">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:160px;">Webster Veterinary&#160;</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Surgical lubricant</td>
			<td style="width:160px;">Savage laboratories</td>
			<td style="width:217px;">surgilube, 0281-0205-45</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:160px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:217px;">SH30256</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">RNAlater</td>
			<td style="width:160px;">Ambion</td>
			<td style="width:217px;">AM7021</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Methylene Blue 1% Aqueous Solution</td>
			<td style="width:160px;">Fisher Science Education</td>
			<td style="width:217px;">S96393</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:240px;"></td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Flexible digital ureteroscope</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">URF-V</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Video system center</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">VISERA Pro OTV-S7 Pro</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Xenon light source</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">VISERA Pro CLV-S40 Pro</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Video recorder</td>
			<td style="width:160px;">MediCapture, Inc.</td>
			<td style="width:217px;">MediCap USB200</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Flexible biopsy cup forceps</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">FBC-3115</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Anesthesia machine</td>
			<td style="width:160px;">Euthanex Corporation</td>
			<td style="width:217px;">EZ-7000 Classic System</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flexible colonoscopy in mice to evaluate the severity of colitis and colorectal tumors using a validated endoscopic scoring system

Der Einsatz der modernen Endoskopie für Forschungszwecke hat unser Verständnis von Magen-Darm-Erkrankungen erleichtert. Insbesondere hat experimentelle Endoskopie sehr nützlich für Studien, die wiederholt Einschätzungen in einem einzigen Versuchstier, wie die Bewertung der Mechanismen von chronisch-entzündlichen Darmerkrankungen und das Fortschreiten von Darmkrebs erforderlich gewesen. Jedoch sind die verschiedenen Studien verwendeten Verfahren sehr variabel. Mindestens drei endoskopischen Scoring-Systeme sind für murine ulcerosa veröffentlicht und veröffentlichte Protokolle zur Beurteilung von kolorektalen Tumoren nicht die Anwesenheit von Begleit Kolonentzündung adressieren. Diese Studie entwickelt und validiert eine reproduzierbare endoskopische Scoring-System, die Auswertung der beiden Entzündungen und Tumoren gleichzeitig integriert. Diese neue Scoring-System besteht aus drei Hauptkomponenten: 1) Bewertung des Ausmaßes und der Schwere der Entzündung kolorektalen (basierend auf perianalen Ergebnisse, die Transparenz der wall, Schleimhautblutungen und fokale Läsionen), 2) quantitative Erfassung der Tumorläsionen (Netzkarte und Balkendiagramm) und 3) numerischen Sortierung der klinischen Fälle durch ihre pathologischen und Forschungs Relevanz basierend auf Dezimaleinheiten mit zugeordneten Kategorien von Läsionen beobachtet und endoskopischen Komplikationen (dezimal Kennungen). Die Video-und Manuskript hier vorgestellt wurden vorbereitet, nach IACUC genehmigten Protokolle, damit die Ermittler ihre eigenen Versuchsmäusen punkten mit einem gut validierten und hoch reproduzierbare endoskopische Methode, mit der Möglichkeit, System, distal von proximalen endoskopische ulcerosa (D-PECS unterscheiden ).

Die in dieser Studie präsentierten Protokoll und Bilder wurden mit einem Olympus-URF-V flexiblen Endoskops 14 und NBI 11,15 hergestellt. Video Bilder wurden in MPEG-2-Format und Bilder im JPG, TIF, PNG oder DICOM-Format mit maximal 1.280 x 1.024 Pixel, Standard-USB-Flash-Speicher tragbaren übertragbar gespeichert. NBI verbessert den visuellen Kontrast von Hämoglobin-haltige Gewebe. Normales Licht und NBI-Bildgebung sind die Hauptmerkmale, die normale Anatomie des kolorektalen Schleimhaut und die...

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Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

In den vergangenen Jahren wurden neue Generation Endoskope wichtige diagnostische Forschung Hilfsmittel zum Auswerten murinen Colitis und kolorektalen Tumoren entwickelt. Wir stellen hier ein detailliertes Protokoll für endoskopische Beurteilung von Entzündungen und kolorektalen Tumoren in Mäusen, sowie eine neuartige Bewertungssystem, das Dezimal-Identifikatoren verwendet, um die Schwere der endoskopischen ulcerosa und kolorektalen Tumoren dokumentiert.

Flexible Koloskopie in der Maus, um die Schwere der Colitis und kolorektalen Tumoren auswerten mit einem validierten Endoskopische Scoring System

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental ...

flexible-colonoscopy-mice-to-evaluate-severity-colitis-colorectal

Research

JoVE Journal

Medicine

31.6K Aufrufe.  Case Western Reserve University School of Medicine, Cleveland.  In den vergangenen Jahren wurden neue Generation Endoskope wichtige diagnostische Forschung Hilfsmittel zum Auswerten murinen Colitis und kolorektalen Tumoren entwickelt. Wir stellen hier ein detailliertes Protokoll für endoskopische Beurteilung von Entzündungen und kolorektalen Tumoren in Mäusen, sowie eine neuartige Bewertungssystem, das Dezimal-Identifikatoren verwendet, um die Schwere der endoskopischen ulcerosa und kolorektalen Tumoren dokumentiert. 

Serie: Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

Aufbau und Verbreitung der Menschenrechte Retinoblastoma Tumore in immundefizienten Mäuse

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Forschung

Medizin

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several techniques, including infusion of exogenous bacterial toxin (endotoxemia) or bacteria (bacteremia), as well as surgical perforation of the cecum by cecal ligation and puncture (CLP)1-3. CLP allows bacteria spillage and fecal contamination of the peritoneal cavity, mimicking the human clinical disease of perforated appendicitis or diverticulitis. The severity of sepsis, as reflected by the eventual mortality rates, can be controlled surgically by varying the size of the needle used for cecal puncture2. In animals, CLP induces similar, biphasic hemodynamic cardiovascular, metabolic, and immunological responses as observed during the clinical course of human sepsis3. Thus, the CLP model is considered as one of the most clinically relevant models for experimental sepsis1-3.
Various animal models have been used to elucidate the intricate mechanisms underlying the pathogenesis of experimental sepsis. The lethal consequence of sepsis is attributable partly to an excessive accumulation of early cytokines (such as TNF, IL-1 and IFN-&gamma;)4-6 and late proinflammatory mediators (e.g., HMGB1)7. Compared with early proinflammatory cytokines, late-acting mediators have a wider therapeutic window for clinical applications. For instance, delayed administration of HMGB1-neutralizing antibodies beginning 24 hours after CLP, still rescued mice from lethality8,9, establishing HMGB1 as a late mediator of lethal sepsis. The discovery of HMGB1 as a late-acting mediator has initiated a new field of investigation for the development of sepsis therapies using Traditional Chinese Herbal Medicine. In this paper, we describe a procedure of CLP-induced sepsis, and its usage in screening herbal medicine for HMGB1-targeting therapies.

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection, and can be simulated by a surgical technique termed cecal ligation and puncture (CLP). Here we describe a method to use CLP-induced animal model to screen medicinal herbs for therapeutic agents.

Die Verwendung Tiermodell für Sepsis zu neuartigen Therapien zu beurteilen Herbal

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic mechanisms that contribute to the onset and progression of intestinal diseases. The identification of new molecules that promote these pathologies has led to a flurry of activity focused on the development of potential new therapies to inhibit their function. As a result, various pre-clinical mouse models with an intact immune system and stromal microenvironment are now heavily used. Here we describe three experimental protocols to test the efficacy of new therapeutics in pre-clinical models of (1) acute mucosal damage, (2) chronic colitis and/or colitis-associated colon cancer, and (3) sporadic colorectal cancer. We also outline procedures for serial endoscopic examination that can be used to document the therapeutic response of an individual tumor and to monitor the health of individual mice. These protocols provide complementary experimental platforms to test the effectiveness of therapeutic compounds shown to be well tolerated by mice.

We describe methods for longitudinal monitoring of the efficacy of therapeutics for the treatment of colonic pathologies in mice using a rigid endoscope. This protocol can be readily used for the characterization of the therapeutic response of an individual tumor in live mice and also for monitoring potential disease relapse.

Nicht-invasive Beurteilung der Wirksamkeit neuer Therapeutika für Darmpathologien Verwenden der seriellen endoskopische Bildgebung von lebenden Mäusen

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

A Quick Phenotypic Neurological Scoring System for Evaluating Disease Progression in the SOD1-G93A Mouse Model of ALS

The SOD1-G93A transgenic mouse is the most widely used animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). At ALS TDI we developed a phenotypic screening protocol, demonstrated in video herein, which reliably assesses the neuromuscular function of SOD1-G93A mice in a quick manner. This protocol encompasses a simple neurological scoring system (NeuroScore) designed to assess hindlimb function. NeuroScore is focused on hindlimb function because hindlimb deficits are the earliest reported neurological sign of disease in SOD1-G93A mice. The protocol developed by ALS TDI provides an unbiased assessment of onset of paresis (slight or partial paralysis), progression and severity of paralysis and it is sensitive enough to identify drug-induced changes in disease progression. In this report, the combination of a detailed manuscript with video minimizes scoring ambiguities and inter-experimenter variability thus allowing for the protocol to be adopted by other laboratories and enabling comparisons between studies taking place at different settings. We believe that this video protocol can serve as an excellent training tool for present and future ALS researchers.

This video protocol describes a sensitive, reliable, and quick method for evaluating the neuromuscular deficits in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.

A Quick Phänotypische Neurologische Scoring System zur Bewertung der Krankheitsprogression im SOD1 G93A-Mausmodell der ALS

The SOD1-G93A transgenic mouse is the most widely used animal model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). At ALS TDI we developed a phenotypic screening ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and bronchodilator drugs. Despite the availability of multiple treatments, both diseases are growing public health concerns. The majority of asthma patients are well controlled on current inhaled therapies but a substantial number of patients with severe asthma are not. Asthma affects an estimated 300 million people worldwide and approximately 20 percent have a severe form of the disease. In contrast to asthma, there are few effective therapies for COPD. An estimated 10% of the population has COPD and the trend in death rates is increasing for COPD while decreasing for other major diseases. Although developing drugs for inhaled delivery is challenging, the nose-only inhalation unit enables direct delivery of novel drugs to the lung of rodents for pre-clinical efficacy and safety/toxicology studies. Inhaled drug delivery has multiple advantages for respiratory diseases, where high concentration in the lung improves efficacy and minimizes systemic side effects. Inhaled corticosteroids and bronchodilators benefit from these advantages and inhaled delivery may also hold potential for future biologic therapies. The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs of rodents, key data required before initiating clinical development.

The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs; key data enabling clinical inhaled drug development.

Trockenpulver und Vernebelte Aerosol Inhalation von Arzneimitteln geliefert an Mäusen Mit einem Nose-only Belichtungssystem

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement classic taste-testing methods in two ways. First, we explain how to do a brief assessment of the mouth, including the tongue, to ensure that taste papillae are present and to note evidence of relevant disease. Second, we draw on genetics to validate taste test data by comparing reports of perceived bitterness intensity and inborn receptor genotypes. Discordance between objective measures of genotype and subjective reports of taste experience can identify data collection errors, distracted subjects or those who have not understood or followed instructions. Our expectation is that fast and valid taste tests may persuade researchers and clinicians to assess taste regularly, making taste testing as common as testing for hearing and vision. Finally, because many tissues of the body express taste receptors, taste responses may provide a proxy for tissue sensitivity elsewhere in the body and, thereby, serve as a rapid, point-of-care test to guide diagnosis and a research tool to evaluate taste receptor protein function.

This protocol measures human taste responses and includes a brief anatomical assessment, a short taste test, and a validation method using the subject&#39;s reported sensation and taste receptor genotype.

Geschmack-Prüfung: Eine kurze und validierten Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status epilepticus (SE) is frequently selected to recapitulate spontaneous recurrent seizures (SRS). Here we present a protocol of SE induction by intraperitoneal (i.p.) injection of pilocarpine and monitoring of chronic recurring seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram (EEG) system. We demonstrated notable behavioral changes that need attention after pilocarpine injection and their correlation with hippocampal neuronal loss at 7 days and 6 weeks post-pilocarpine. We also describe the experimental procedures of electrode implantation for video and EEG recording, and analysis of the frequency and duration of chronic recurrent seizures. Finally, we discuss the possible reasons why the expected results are not achieved in each case. This provides a basic overview of modeling chronic epilepsy in mice and guidelines for troubleshooting. We believe this protocol can serve as a baseline for suitable models of chronic epilepsy and epileptogenesis.

This manuscript describes a method of inducing status epilepticus by systemic pilocarpine injection and of monitoring spontaneous recurrent seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram system. This protocol can be utilized for studying the pathophysiologic mechanisms of chronic epilepsy, epileptogenesis, and acute seizures.

Das Pilocarpin Modell der Temporallappen-Epilepsie und EEG Monitoring mittels Radiotelemetrie System bei Mäusen

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

Murine distalen Kolostomie, ein neuartiges Modell Ablenkung Colitis bei C57BL/6 Mäusen

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Using a Knee Arthrometer to Evaluate Tissue-specific Contributions to Knee Flexion Contracture in the Rat

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ROM is called a joint contracture and results in increased morbidity. Due to the difficulty of reversing established knee contractures, early detection is important, and hence, knowing risk factors for their development is essential. The rat represents a good model with which the effect of an intervention can be studied due to the similarity of rat knee anatomy to that of humans, the rat's ability to tolerate long durations of knee immobilization in flexion, and because mechanical data can be correlated with histologic and biochemical analysis of knee tissue.
Using an automated arthrometer, we demonstrate a validated, precise, reproducible, user-independent method of measuring the extension ROM of the rat knee joint at specific torques. This arthrometer can be used to determine the effects of interventions on knee joint ROM in the rat.

The goal of the protocol is to measure the extension range of motion of the rat knee. The effects of various diseases that increase the stiffness of the knee joint and the effectiveness of treatments can be quantified.

Verwenden ein Knie Arthrometer auszuwertende gewebespezifischen Beiträge zum Knie Beugung Kontraktur in der Ratte

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

Murine Appendektomie Modell der chronischen Colitis assoziiert entaktischen Darmkrebs durch präzise Lokalisierung von Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...