Name: ferric chloride-induced murine thrombosis models
Uploaded: 2016-09-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ferric Chloride-induced Murine Thrombosis Models at JoVE.com

This work was supported by the National Heart Lung and Blood Institute (NHLBI) of the National Institutes of Health under award numbers R01 HL121212 (PI: Sen Gupta), R01 HL129179 (PI: Sen Gupta, Co-I: Li) and R01 HL098217 (PI: Nieman). The content of this publication is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institutes of Health.

Alle Verfahren und Manipulationen der Tiere wurden von Institutional Animal Care und Verwenden Komitees (IACUC) von der Cleveland Clinic in Übereinstimmung mit den Vereinigten Staaten Public Health Service - Politik auf der Humane Pflege und Verwendung von Tieren, und der NIH Leitfaden für die Pflege genehmigt und Verwendung von Labortieren. 1. Vorbereitungen: <ol><li> Fluoreszenzfarbstoff für Labeling Platelets <ol><li> Bereiten Rhodamin 6G-Lösung, 0,5 mg / ml, in Kochsalzlösung und sterilisiert die Lösung mit 0,22 um-Filter. </li></ol></li><li> FeCl 3 Lösung <ol><li> Machen Sie eine frische Stammlösung von 30% FeCl 3 (wasserfrei, ist gleich 1,85 M) in reinem Wasser, und Filter mit 0,45 &amp; mgr; m - Filter. Bereiten 5 ml frisch FeCl 3 -Lösung in der gewünschten Konzentration [zB 2,5% (0,154 M), 5% (0,308 M), 7,5% (0,463 M), 10% (0,617 M) und 12,5% (0,771 M)] von Verdünnen der 30% FeCl 3 -Lösung mit Wasser ina 6 cm Gewebekulturschale und halten den Deckel geschlossen. HINWEIS: Mit der Kulturschale erleichtert es , das Filterpapier zu holen , gesättigt mit FeCl 3 -Lösung , als es aus einem engen Behälter, wie ein 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen zu holen. FeCl3 ist extrem gefährlich und dass Vorsichtsmaßnahmen, wie das Tragen von Handschuhen und Laborkittel usw., Persönliche Schutzausrüstung sollte immer genommen werden. </li></ol></li><li> Filterpapiere <ol><li> Schneiden Sie das Filterpapier zu 1 mm x 2 mm Größe. Einweichen genug Stücke des geschnittenen Filterpapier in der FeCl 3 -Lösung in der gleichen Schale. </li></ol></li><li> Papaverinhydrochlorid Lösung <ol><li> Bereiten Papaverinhydrochlorid-Lösung (25 mg / ml) in Wasser und Sterilisieren der Lösung mit 0,22 um-Filter. </li></ol></li><li> Agarose Gel <ol><li> Bereiten 2% Agarosegel in PBS oder Kochsalzlösung in 6-Well-Gewebekulturplatte, ~ 1 cm Dicke und cut es zu Halbkreis mit ~ 3 cm Durchmesser. </li></ol></li></ol> 2. FeCl 3 Induced Arteria carotis Injury Thrombosis Modell <ol><li> Chirurgische Verfahren zur Thrombosemodell <ol><li> Verwenden Sie 8 bis 12 Wochen alt C57Bl6 Mäuse (oder andere Stämme wie erforderlich). Anästhesieren Mäuse mit dem Gemisch aus Ketamin (100 mg / kg) / Xylazin (10 mg / kg) über intraperitoneale Injektion. Bestätigen Sie die Tiefe der Anästhesie durch Zehe Kneifen. ANMERKUNG: Diese Menge an Ketamin / Xylazin ausreicht , um das Tier in stabiler Anästhesie zu halten und keine Schmerzen ( als Reaktion auf toe Kneifen) für mindestens 1 Std. </li><li> Entfernen Sie Fell am Hals und oberen Brustbereich mit einem kleinen Tier elektrische Klipper. Enthaarungscreme ist nicht erforderlich. Tragen Sie neutral Erdöl Augensalbe auf die Augen Trockenheit während der Narkose zu verhindern. </li><li> Sichern Sie die Maus in Rückenlage auf dem Deckel 15 cm Gewebekulturplatte. Verwenden Sie ein langes Band (~ 10 cm) hin zu sichernd Gliedmaßen und Unterkörper und zwei Stücke von kleinen Band (2 cm x 0,5 cm) Vorderbeine zu sichern. Verwenden Sie einen 4-0 Naht um die Schneidezähne zu wickeln, kleben Sie die beiden Enden des Fadens an dem Deckel gerade Maus Hals zu halten (Abbildung 2). </li><li> Legen Sie die Platte mit der Maus den Kopf in Richtung des Bedieners unter einem chirurgischen Lichtquelle. </li><li> Sterilisieren Sie die Operationsstelle mit Alkohol-Pad. Verwenden Sie die Micro-Adson Pinzette die Haut zu halten und eine chirurgische Schere verwenden, um einen kleinen Schnitt machen (2 - 3 mm). </li><li> Halten Sie die Haut des Einschnitts mit der Zange und chirurgische Schere Einsatz mit Backen in den Einschnitt geschlossen. Schieben Sie die Schere subkutan in Richtung des Manubrium oder Kinn, und dann die Schere öffnen Sie die Haut von der subkutanen Schicht zu befreien. </li><li> Schneiden Sie die Haut mit den chirurgischen Schere einen Mittelschnitt vom manubrium auf das Niveau des Zungenbeins (3A und 3B) zu machen. Unverblümt sezieren die dünne Faszie (gestrichelte Linie, in <strong&gt; 3B) zwischen den Submaxillardrüsen mit einem feinen hemostat und einer Graefe Zange (3B und 3C, blaue Pfeile). HINWEIS: Die manubrium (schwarzer Pfeil in 3C) und die Trachea (T in 3C) wird nach diesem Schritt zu sehen. </li><li> Halten Sie das Weichgewebe und die Haut an der rechten Seite des Manubrium mit den Graefe Zange gesehen, legen Sie die hemostat unter der Faszie in Richtung der 2 - Uhr - Position (gelb gestrichelte Linie in 3C), öffnen Sie die Backen der hemostat die frei Halsvene aus dem umgebenden Gewebe. </li><li> Schneiden Sie die Faszien, Weichgewebe und die Haut in Richtung der 2 - Uhr - Position (3C) mit den chirurgischen Schere , um die rechte Halsvene (3D, Pfeil) zu belichten. </li><li> Zeichnen Sie etwa 200 bis 300 &amp; mgr; l Rhodamin 6G-Lösung mit einer 1-ml-Spritze mit 22 G-Nadel, und dann ändernes bis zu 30 G Nadel. HINWEIS: Dies schützt die 30 G - Nadel vor Beschädigung seiner feinen Spitze. Direkt Zeichnen der Rhodamin 6G-Lösung mit der 30 G-Nadel wird nicht die Spitze beschädigen; jedoch berühren die Behälterwand versehentlich Schaden verursachen, die Injektion schwierig machen kann. </li><li> Spülen Sie die 30 G-Nadel durch langsames Herausdrücken des Rhodamin-6G-Lösung, stellen Sie sicher, dass keine Luftblasen bleiben in der Spritze oder die Nadel. Halten Sie 100 ul Rhodamin 6G Injektionslösung. </li><li> Bend 2 - 3 mm Spitze der Nadel in einen 90 ° Winkel mit dem Nadelhalter, der die Nadel zu tief in die Jugularvene Einführen verhindert und macht die Injektion leichter gesteuert (Figur 3D). </li><li> Injizieren Sie die Rhodamin 6G-Lösung in die rechte Halsvene zu Etikett Blutplättchen. Um die Spritze zu stabilisieren und die Nadel in Position zu halten, halten Sie die Spritze mit einer Hand und die Nadel mit den Graefe Zange mit der anderen Hand während der injection.After Injektion, klemmen die Injektionsstelle mit den Graefe Zange Blutungen zu vermeiden. </li><li> Öffnen Sie die Backen der hemostat und legen Sie sie unter den Graefe Zange die Gefäßwand der Injektionsstelle zu klemmen, und dann ligieren die Injektionsstelle mit einer 6-0 Naht. HINWEIS: Als Alternative von Schritt 2.1.15, mit dem Finger 2 min Druck auf die Injektionsstelle der Anwendung wird die Blutung zu stoppen; jedoch hat dieses Verfahren ein Risiko besteht, dass weitere Blutungen, wenn das Gerinnsel an der Injektionsstelle wird accidently entfernt. </li><li> Unverblümt sezieren das weiche Gewebe und Faszien um den linken Submaxillardrüse mit dem hemostat und Graefe Zange und ziehen Sie die Drüse in Richtung der 7 - Uhr - Position (3E) die Kopfnickermuskel (blauer Pfeil in Abbildung 3E) zu belichten. </li><li> Unverblümt sezieren die Faszie (Abbildung 3E, gestrichelte Linie) zwischen dem linken Kopfnickers und der M. omohyoideus oder sternohyoid Muskel (3E, grüner Pfeil) auf der linken Seite der Luftröhre mit dem Hämostatikum entfernt. </li><li> Führen Sie eine Nadel mit 6-0 Seidennaht (ca. 15 cm lang) unter der Mitte des Kopfnickers (blauer Pfeil in Abbildung 3E), legen Sie die beiden Enden des Fadens zusammen und ziehen Sie den Faden seitlich in Richtung der 10 - Uhr - Position . Hinweis: Dieses Verfahren sollte sorgfältig durchgeführt werden , um Verletzungen der linken Halsschlagader zu vermeiden, die außerhalb des Kopfnickers befindet. </li><li> Unverblümt trennen den dünnen M. sternohyoideus und / oder M. omohyoideus der A. carotis (CA) (Abbildung 3F Pfeil) freizulegen , nachdem die Kopfnickers Wegziehen. Schneiden Sie den M. sternohyoideus und / oder M. omohyoideus wie nötig. Verwenden Sie die hemostat das weiche Gewebe von CA zu trennen, ohne die CA berühren HINWEIS: CA durch den Vagusnerv begleitet wird, gesehen die weiße Struktur in <strong&gt; Abbildung 3G (grüner Pfeil), und in den meisten Fällen unter dem dünnen M. sternohyoideus und / oder M. omohyoideus (zwischen den gelben gepunkteten Linien in Abbildung 3F) ist. </li><li> Verwenden Sie eine feine Spitze Pinzette die seitliche Blende um die CA zu holen, während die Vagusnerv zu vermeiden und CA. Verwenden Sie eine andere feine Spitze Pinzette ein Loch auf der Faszie zwischen dem CA zu stanzen und Vagusnerv. </li><li> Führen Sie den Haken durch das Loch und sanft die CA heben, und legen Sie dann die feine Spitze Pinzette unter der CA. Bewegen Sie den Haken und Zangen in entgegengesetzte Richtungen entlang der CA adventitiellen Weichgewebe zu entfernen. Freie mindestens ~ 5 mm Länge von CA (3H, blauer Pfeil) aus dem umgebenden Gewebe. </li><li> Um die Hintergrundfluoreszenz blockieren, drücken Sie die Ende eines schwarzen Kunststoff Kaffee Rührer flach, crosscut den Kaffee Rührer in einem 3 mm Stück, und dann in Längsrichtung entlang der Faltenkanten geschnitten zu bekommen zwei Stücke von &quot;U&quot; -Form Kunststoff (3H, grün Pfeil). </li><liSpülen Sie &gt; ein Stück dieses &quot;U&quot; -Form Kunststoff mit Kochsalzlösung und halten Sie es mit einer Pinzette und legen Sie sie unter dem CA während sanft die CA mit dem Haken (3H, grüner Pfeil) anheben. Unmittelbar 2-3 Tropfen Kochsalzlösung gelten die CA zu vermeiden Trocknen </li></ol></li><li> Echtzeit - Aufzeichnung Video <ol><li> Übertragen Sie die Maus und die Platte Deckel zusammen mit dem Mikroskoptisch und in einer geeigneten Position unter dem 10X Wasserlinse. Füllen Sie den Raum zwischen dem 10X-Objektiv und dem CA mit Kochsalzlösung. </li><li> Starten Sie die digitale Videoaufzeichnung Software-Anwendung, und starten Sie eine neue Datei und benennen Sie es entsprechend. Nehmen normale Gefäßbilder und notieren Sie sich die Rahmennummer, wenn die Videoaufzeichnung gestoppt wird. HINWEIS: Verweisen Sie auf das Video - Recording - Software auf dem Computer für die Aufzeichnung. Wir verwenden die digitale Videoaufzeichnung Software und die folgenden Beschreibungen zu dieser Anwendung basieren. HINWEIS: Da mechanische traUMA das Endothel verletzen kann und zur Thrombusbildung 20 führen , ist es notwendig , zu bestätigen , dass es vor der Gefäßwand an den FeCl 3 Verletzungen keine chirurgische Verletzung ist. Es ist auch notwendig , um zu bestätigen , dass es keine verbleibenden Gewebe um die CA ist, die eine Barriere bilden kann , und die Wirkung von FeCl 3 -induzierten Verletzung dämpfen. Schreiben Sie die Rahmennummer der Datensätze nach unten wird es einfach, die Videos zu analysieren später verstrichenen Zeiten nach. </li><li> Bewegen Sie die Maus mit Plattendeckel aus dem 10fach-Objektiv. Falten Sie eine Ecke von einem Papiertuch eine dünne und feine Spitze zu machen und verwenden Sie es sorgfältig die Saline auslöschen um die CA (CA vermeiden berühren) sowie in anderen Orten im Operationsfeld. Dies ist wichtig , Verdünnung der verwendeten FeCl 3 -Lösung zu vermeiden. </li><li> Verwenden Sie eine feine Spitze Pinzette und ein Stück Filterpapier holen , gesättigt mit FeCl 3 -Lösung und legen Sie sie direkt auf dem CA und halten Sie es vor Ort für 1 min. HINWEIS: To Hilfe Visualisierung der Blutkreislauf und Ernte genaue Daten, legen Sie das Filterpapier nahe dem distalen Ende des freiliegenden CA (Abbildung 3I) und ein kurzes Segment am proximalen Seite (grüner Pfeil in Abbildung 3I) lassen für die Beobachtung der Blutfluss zu spät Phase (siehe unten). </li><li> Entfernen Sie das Filterpapier (dieser Zeitpunkt wird als Beginn der &quot;nach der Verletzung&quot; definiert) und spülen Sie die CA mit Kochsalzlösung (mindestens 2 ml). </li><li> Setzen Sie die Maus mit Platten Deckel zurück auf die 10X-Objektiv; das Schiff beobachten und aufzeichnen Videobilder zu starten. Schreiben Sie die Video-Frame-Nummer am Ende der ersten Minute der Aufnahme nach unten. HINWEIS: Die Thrombusbildung wird durch Akkumulation der fluoreszierenden Thrombozyten identifiziert, die in Echtzeit von Videobildern auf dem Bildschirm oder unter dem Mikroskop beobachtet wird. Nehmen Sie Videobilder direkt nach der Maus wieder unter die Lupe zu nehmen. Halten der Aufnahme zu dem Ende der ersten Minute nach dem Entfernen filter Papier. Beobachten Sie das gesamte Gefäß von dem distalen zu den proximalen Websites Informationen über die Verletzung zu erhalten, und dann konzentrieren sich auf den Bereich von Interesse (in der Regel ist das Zentrum des verletzten Bereich) für weitere Bildgebung. </li><li> Record Videobilder für 10 sec pro Minute für die ersten 10 min (beispielsweise von 2.55 Uhr bis 03.05 Uhr) und dann 10 sec jede Minute bis zum Ende des Experiments. Notieren Sie sich die Rahmennummern nach unten, wenn jeder Aufnahme beendet wird. HINWEIS: Die Endpunkte des Modells sind: 1) wenn der Blutfluss wurde für&gt; 30 Sekunden aufgehört; oder 2) wenn Okklusion nicht in 30 Minuten nach der Verletzung gesehen. In diesem Fall verwenden 30 min für die statistische Analyse. Stellen Sie Belichtungszeit der Videoaufzeichnung als 10 ms am Anfang, so wird es leicht sein, den Blutfluss über die Thromben zu beobachten. Wenn die Thromben groß werden und die Fluoreszenz sättigt dem Sensor der Kamera wird es schwierig, den Blutfluss über Thromben zu identifizieren. Um dieses Problem zu lösen, bewegen Sie den Imaging-center zum proximalen heil Website (Abbildung 3I, grüner Pfeil) , wo der Blutfluss noch deutlich beobachtet werden kann. Wir erhöhen auch die Expose Zeit auf 15 oder 20 ms, wenn am proximalen un-verletzten Stelle konzentriert, so kann der Blutfluss deutlicher beobachtet werden. Wenn der Blutfluss aufhört, zahlreiche größere Zellen (Leukozyten) beginnen an der Gefäßwand an dem proximalen Stelle des Thrombus zu rollen. Fluss stoppt der Regel innerhalb von 2 bis 3 Minuten nach dem Auftreten der großen Zellen. Notieren Sie sich die Expose Zeit auf dem Aufzeichnungsblatt, wenn es geändert wird. Es dauert in der Regel ca. 30 min von der Anästhesie bis zum Ende des Experiments, wenn die normale Wildtyp C57Bl6 Mäuse verwendet wurden. VORSICHT HINWEIS: Verwenden Sie die weiße aggregierten Blutplättchen Gerinnsel nicht als Zeichen des Blutflusses Einstellung, die keine genaue Daten geben , und es wird durch die Belichtungszeit beeinflusst. Der weiße Gerinnsel bedeckt das Gefäßlumen bedeutet nicht, den Blutfluss nicht mehr (siehe die repräsentative Video 1). </li><liAm Ende des Experiments&gt;, einschläfern die Mäuse mit Überdosis Ketamin / Xylazin (200/20 mg / kg), gefolgt von Genickbruch nach keinen Atem und Herzschlag bestätigt. </li></ol></li></ol> 3. FeCl 3 Induced Mesenterialarterie / Vein Thrombosis Modell <ol><li> Anesthetize 8 bis 12 Wochen alten C57Bl6 Mäuse als 2.1.1 in Abschnitt erwähnt. Bewerben Tierarzt Salbe auf die Augen Trockenheit während der Narkose zu verhindern. </li><li> Injizieren Papaverine Lösung (insgesamt 0,4 mg / Maus) intraperitoneal Darmperistaltik zu hemmen. </li><li> Entfernen Sie Fell am Hals und Bauch mit einem Tier elektrische Klipper. Enthaarungscreme ist nicht erforderlich. </li><li> Sichern Sie die Maus in Rückenlage auf dem Deckel 15 cm Gewebekulturplatte. Verwenden Sie vier Stücke von kleinen Band (2 cm x 0,5 cm), um alle Beine zu sichern. Verwenden Sie ein 4 -0 Naht um die Schneidezähne zu wickeln, kleben Sie die beiden Enden des Fadens an dem Deckel den Hals gerade zu halten (Abbildung 2). </li><li> Befolgen Sie die Anweisungen 2.1.4 -2.1.15 die Halsvene zur Injektion von Rhodamin 6G Etikett Blutplättchen zu belichten. </li><li> Führen Sie einen Mittelschnitt durch die Haut von xiphoid zu Unterbauch der chirurgischen Schere (4A). Pick - up die Mitte Peritoneum (auch genannt linea alba, 4A, Pfeil) mit Graefe Zange, die klar ist und keine Blutgefäße, heben Sie etwa 2 - 3 mm hoch, bestätigen keine Darm unter der Schnittlinie, und schneiden Sie das Peritoneum geöffnet in längs~~POS=TRUNC mit den feinen Schere (4B). </li><li> Wieder sichern die Mäuse nach rechts Seitenlage. Setzen Sie den Halbkreis Agarose - Gel nahe dem Bauch, und exteriorisieren sanft den Darm und breitete sie auf der Oberseite des Gels mit den Graefe Zange (4C). Verwenden Sie die zweite Zweige für die Thrombose - Experiment (4C, Pfeil). HINWEIS: Verwenden Sie die hemostat oder Micro-Adson Pinzette den Darm zu exteriorisieren zu helfen. Vermeiden Sie die verletzenDarm und das Gefäß. </li><li> Platz 5 - 6 Tropfen Kochsalzlösung, die Feuchtigkeit des Darmes und der Behälter zu halten. Übertragen Sie die Maus mit dem Plattendeckel zusammen mit dem Mikroskoptisch und in geeignete Position unter dem 10X trockenen Linse. HINWEIS: Verwenden Sie ein trockenes Objektiv , weil die jejunoileal Membran nicht Salzlösung aufnehmen kann. Stellen Sie sicher, Salzlösung auf den freiliegenden Gewebe fallen sie feucht zu halten. </li><li> Blot, der die Salzlösung rund um die mesenterischen Arterie und Vene vor der Behandlung. </li><li> Verwenden Sie eine feine Spitze Pinzette , um ein Stück Filterpapier holen , gesättigt mit 12,5% FeCl 3 -Lösung und legen Sie sie direkt auf die mesenteriale Arterie und Vene für 1 min (4D). Entfernen Sie das Filterpapier (dieser Zeitpunkt wird als Beginn der &quot;nach der Verletzung&quot; definiert) und spülen Sie die verletzte mesenteric Arterie und Vene mit Kochsalzlösung (mindestens 2 ml). </li><li> Setzen Sie die Maus mit Plattendeckel wieder unter dem 10X trockenen Linse; Beachten Sie die Gefäße und beginnen zu record Videobilder wie in 2.2 erwähnt). HINWEIS: Die Endpunkte dieses Experiments sind: 1) wenn der Blutfluss wurde für&gt; 30 Sekunden aufgehört; oder 2) wenn Okklusion nicht in 30 min nach der Verletzung gesehen, und in diesem Fall 30 min für die statistische Analyse verwendet werden. </li><li> Am Ende des Experiments einschläfern die Mäuse mit Überdosis Ketamin / Xylazin (200/20 mg / kg), gefolgt von Genickbruch nach kein Atem und Herzschlag bestätigt werden. </li></ol>

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M., de la Fuente, M., Arachiche, A., Wahl, J. K., Nieman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+monoclonal+antibodies+against+Protease+Activated+Receptor+4+(PAR4).">Development and characterization of monoclonal antibodies against Protease Activated Receptor 4 (PAR4).</a> Thromb Res. 135, 1165-1171 (2015).</li><li>Mumaw, M. M., de la Fuente, M., Noble, D. N., Nieman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+anionic+region+of+human+protease-activated+receptor+4+inhibits+platelet+aggregation+and+thrombosis+without+interfering+with+hemostasis.">Targeting the anionic region of human protease-activated receptor 4 inhibits platelet aggregation and thrombosis without interfering with hemostasis.</a> J Thromb Haemost. 12, 1331-1341 (2014).</li><li>Modery-Pawlowski, C. L., Kuo, H. H., Baldwin, W. M., Sen Gupta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+platelet-inspired+paradigm+for+nanomedicine+targeted+to+multiple+diseases.">A platelet-inspired paradigm for nanomedicine targeted to multiple diseases.</a> Nanomedicine (Lond). 8, 1709-1727 (2013).</li><li>Anselmo, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-like+nanoparticles:+mimicking+shape,+flexibility,+and+surface+biology+of+platelets+to+target+vascular+injuries.">Platelet-like nanoparticles: mimicking shape, flexibility, and surface biology of platelets to target vascular injuries.</a> ACS Nano. 8, 11243-11253 (2014).</li><li>Modery, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heteromultivalent+liposomal+nanoconstructs+for+enhanced+targeting+and+shear-stable+binding+to+active+platelets+for+site-selective+vascular+drug+delivery.">Heteromultivalent liposomal nanoconstructs for enhanced targeting and shear-stable binding to active platelets for site-selective vascular drug delivery.</a> Biomaterials. 32, 9504-9514 (2011).</li><li>Woollard, K. J., Sturgeon, S., Chin-Dusting, J. P., Salem, H. H., Jackson, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Erythrocyte+hemolysis+and+hemoglobin+oxidation+promote+ferric+chloride-induced+vascular+injury.">Erythrocyte hemolysis and hemoglobin oxidation promote ferric chloride-induced vascular injury.</a> J Biol Chem. 284, 13110-13118 (2009).</li><li>Ciciliano, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolving+the+multifaceted+mechanisms+of+the+ferric+chloride+thrombosis+model+using+an+interdisciplinary+microfluidic+approach.">Resolving the multifaceted mechanisms of the ferric chloride thrombosis model using an interdisciplinary microfluidic approach.</a> Blood. 126, 817-824 (2015).</li><li>Barr, J. D., Chauhan, A. K., Schaeffer, G. V., Hansen, J. K., Motto, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Red+blood+cells+mediate+the+onset+of+thrombosis+in+the+ferric+chloride+murine+model.">Red blood cells mediate the onset of thrombosis in the ferric chloride murine model.</a> Blood. 121, 3733-3741 (2013).</li><li>Dunne, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin+6+has+a+functional+role+in+platelet+aggregation+and+thrombus+formation.">Cadherin 6 has a functional role in platelet aggregation and thrombus formation.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32, 1724-1731 (2012).</li><li>Lockyer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GPVI-deficient+mice+lack+collagen+responses+and+are+protected+against+experimentally+induced+pulmonary+thromboembolism.">GPVI-deficient mice lack collagen responses and are protected against experimentally induced pulmonary thromboembolism.</a> Thromb Res. 118, 371-380 (2006).</li><li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C-terminal+CGHC+motif+of+protein+disulfide+isomerase+supports+thrombosis.">The C-terminal CGHC motif of protein disulfide isomerase supports thrombosis.</a> J Clin Invest. , (2015).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+underlying+FeCl3-induced+arterial+thrombosis.">Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 9, 779-789 (2011).</li><li>Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+thrombosis+models.">Murine thrombosis models.</a> Thromb Haemost. 92, 486-494 (2004).</li><li>Cooley, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+thrombosis.">Murine models of thrombosis.</a> Thromb Res. 129 Suppl 2, S62-S64 (2012).</li><li>Gupta, N., Li, W., McIntyre, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deubiquitinases+Modulate+Platelet+Proteome+Ubiquitination,+Aggregation,+and+Thrombosis.">Deubiquitinases Modulate Platelet Proteome Ubiquitination, Aggregation, and Thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35, 2657-2666 (2015).</li><li>Konstantinides, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+antithrombotic+consequences+of+platelet+glycoprotein+Ibalpha+and+VI+deficiency+in+a+mouse+model+of+arterial+thrombosis.">Distinct antithrombotic consequences of platelet glycoprotein Ibalpha and VI deficiency in a mouse model of arterial thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 4, 2014-2021 (2006).</li><li>Versteeg, H. H., Heemskerk, J. W., Levi, M., Reitsma, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+fundamentals+in+hemostasis.">New fundamentals in hemostasis.</a> Physiol Rev. 93, 327-358 (2013).</li><li>Yan, S. F., Mackman, N., Kisiel, W., Stern, D. M., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia/Hypoxemia-Induced+activation+of+the+procoagulant+pathways+and+the+pathogenesis+of+ischemia-associated+thrombosis.">Hypoxia/Hypoxemia-Induced activation of the procoagulant pathways and the pathogenesis of ischemia-associated thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 19, 2029-2035 (1999).</li><li>Rahaman, S. O., Li, W., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vav+Guanine+nucleotide+exchange+factors+regulate+atherosclerotic+lesion+development+in+mice.">Vav Guanine nucleotide exchange factors regulate atherosclerotic lesion development in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33, 2053-2057 (2013).</li><li>Silverstein, R. L., Li, W., Park, Y. M., Rahaman, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+cell+signaling+by+the+scavenger+receptor+CD36:+implications+in+atherosclerosis+and+thrombosis.">Mechanisms of cell signaling by the scavenger receptor CD36: implications in atherosclerosis and thrombosis.</a> Trans Am Clin Climatol Assoc. 121, 206-220 (2010).</li><li>Liu, J., Li, W., Chen, R., McIntyre, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+biologically+active+oxidized+phospholipids+show+on-going+and+increased+oxidative+stress+in+older+male+mice.">Circulating biologically active oxidized phospholipids show on-going and increased oxidative stress in older male mice.</a> Redox Biol. 1, 110-114 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Das FeCl 3 -induzierten Modell ist eines der am häufigsten verwendeten Thrombosemodelle, die nicht nur wertvolle Informationen über genetische Veränderungen auf die Thrombozytenfunktion und Thrombose 7,8,16,19,31-33 liefern kann, kann aber auch ein wertvolles Werkzeug, zur Bewertung der therapeutischen Verbindungen und Strategien zur Behandlung und Prävention von Krankheiten atherothrombotic 11,17,34-37. Hier haben wir unsere Modifikationen und Verfeinerungen dieses Modells gezeigt u...

Arterielle Thrombose (Blutgerinnsel) ist eine häufige Komplikation vieler systemischen mit chronischer Entzündung assoziierte Erkrankungen, einschließlich Atherosklerose, Diabetes, Fettleibigkeit, Krebs und chronische Autoimmun rheumatologischen Erkrankungen. Thromben, die in den arteriellen Kreislauf stammen aus unangemessenen Thrombozytenaktivierung, Aggregation und anschließende gerinnungsMechanismen auftreten, und sind in Herzinfarkt, Schlaganfall und Extremitätenverlust verwickelt. Die Behälterwand ist ein komplexes System , das mehrere Zelltypen einschließt und durch eine Vielzahl von äußeren Faktoren ab, einschließlich Scherspannung, zirkulierenden Blutzellen, Hormonen und Cytokinen, sowie die Expression von Antioxidationsmittel - Proteine ​​in der Gefäßwand. In vitro Experimente replizieren kann nicht beeinflusst dieser komplexen Umgebung und deshalb in - vivo - Studien an Tiermodellen sind entscheidend besseres Verständnis der Mechanismen bei thrombotischer Erkrankungen beteiligt zu ermöglichen. Die Mäuse wurden sim gezeigt zu haben,Ilar Mechanismen für den Menschen im Hinblick auf die Thrombose, Arteriosklerose, Entzündungen und Diabetes 1,2. Weiterhin transgenen und Knockout-Mäuse können die Funktion von spezifischen Genprodukten in einer komplexen physiologischen oder pathologischen Umgebung zu testen erstellt werden. Solche Studien der menschlichen Pathologie nachahmen und bei der Charakterisierung von Arzneimittelwirkungen auf Thrombose wichtige Details bereitstellt, als auch, um Entdeckung neuer Wege und Therapien in Verbindung stehen wichtige mechanistische Informationen zur Verfügung stellen kann. Pathologische arterielle Thromben entstehen durch Schicht Verletzung oder Dysfunktion und Exposition des Blutstroms in die subendothelialen Matrix 3,4 an Endothelzellen. Verschiedene Thrombose Modelle wurden diese Endotheleinrisses zu induzieren entwickelt, wie mechanische Verletzungen, photo Verbindung Rose Bengal-basierte oxidative Schädigung und Laser-Verletzung 5. In diesem Spektrum, Eisenchlorid (FeCl 3) -induzierten Gefäßverletzung ein weit verbreitetes Modell der Thrombose ist. Dieses Reagenz, wennaufgetragen auf die äußere Aspekt der Gefäße induziert , auf vaskulären Zellen oxidativer Schädigung 6-8, mit dem Verlust der endothelialen Zellschutz von Thrombozyten und Komponenten der Gerinnungskaskade zirkuliert. Die FeCl 3 Modell ist einfach und empfindlich auf beiden Antikoagulans und Anti-Thrombozyten Drogen, und hat auf carotis und Oberschenkelarterien, Jugularvenen und mesenterialen und cremasterica Arteriolen und Venolen bei Mäusen, Ratten, Meerschweinchen und Kaninchen 6-15 durchgeführt worden ist . Ein messbarer Parameter in diesem Modell ist die verstrichene Zeit von der Verletzung Gefäßverschluss zu vervollständigen, gemessen als Blutfluss Aufhören mit einem Doppler - Durchflussmesser oder unter direkter Beobachtung mit Intravitalmikroskopie 6,7,9. Eine Reihe von Zeiten zwischen 5 bis 30 min wurde in verschiedenen Studien in C57Bl6 Mäusen 7-10,16, berichtet darauf hindeutet , dass FeCl 3 Konzentrationen, die Art der Anästhesie, OP - Techniken, Maus Alter, genomischen Hintergrund, Verfahren b Messunglood Fluss und andere Umgebungsvariablen haben erhebliche Auswirkungen in diesem Modell. Diese große Variabilität macht es schwierig, Studien von verschiedenen Forschungsgruppen zu vergleichen und kann Erkennung von subtilen Unterschiede erschweren. Mit einer Vision solche Variabilitäten zu minimieren und eine gleichmäßig reproduzierbare in vivo Modellsystem etablieren, haben wir die FeCl 3 -induzierten Arteria carotis Modell verfeinert, die die Daten in hohem Maße reproduzierbar mit minimaler Variation macht 6-10,16-19. In diesem Papier beschreiben wir, und die Fähigkeiten teilen und mehrere repräsentative experimentelle Beispiele berichten, die von diesem Modell profitieren können.

<table><tbody><tr><td>Surgical Scissors - Tungsten Carbide</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>14502-14</td><td>cut and hold skin</td></tr><tr><td>Micro-Adson Forceps - Serrated/Straight/12 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>11018-12</td><td>cut and hold skin</td></tr><tr><td>Metzenbaum Fino Scissors - Tungsten Carbide/Curved/Blunt-Blunt/14.5 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>14519-14&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>to dissect and separate soft tissue</td></tr><tr><td>Ultra Fine Hemostat - Smooth/Curved/12.5 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>13021-12</td><td>to dissect and separate soft tissue</td></tr><tr><td>Graefe Forceps - Serrated/Straight/10 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>11050-10</td><td>to dissect and separate soft tissue</td></tr><tr><td>Dumont #5 Fine Forceps - Biology Tips/Straight/Inox/11 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>11254-20&amp;nbsp;</td><td>Isolate vessel from surounding tissue</td></tr><tr><td>Dumont #5XL Forceps - Standard Tips/Straight/Inox/15 cm</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>11253-10</td><td>Isolate vessel from surounding tissue</td></tr><tr><td>Blunt Hook- 12 cm/0.3 mm Tip Diameter</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>10062-12</td><td>Isolate vessel from surounding tissue</td></tr><tr><td>Castroviejo Micro Needle Holders</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>12061-02</td><td>Needle holders</td></tr><tr><td>Suture Thread 4-0</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>18020-40</td><td>For fix the incisors to the plate</td></tr><tr><td>Suture Thread 6-0</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>18020-60</td><td>For all surgery and ligation</td></tr><tr><td>Kalt Suture Needles</td><td>Fine Science Tools&amp;nbsp;</td><td>12050-03</td><td></td></tr><tr><td>rhodamine 6G&amp;nbsp;</td><td>Sigma</td><td>83697-1G</td><td>To lebel platelets</td></tr><tr><td>FeCl&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt; (Anhydrous)</td><td>Sigma</td><td>12321</td><td>To induce vessel injury</td></tr><tr><td>Papaverine hydrochloride</td><td>Sigma</td><td>P3510</td><td>To inhibit gut peristalsis.</td></tr><tr><td>Medline Surgical Instrument Sterilization Steam Autoclave Tapes</td><td>Medline</td><td>111625</td><td>To fix the mouse to the plate</td></tr><tr><td>Fisherbrand&amp;trade;&amp;nbsp;Syringe Filters - Sterile 0.22 &amp;micro;m</td><td>Fisher</td><td>09-720-004</td><td>For sterlization of solutions injected to mice</td></tr><tr><td>Fisherbrand&amp;trade;&amp;nbsp;Syringe Filters - Sterile 0.45 &amp;micro;m</td><td>Fisher</td><td>09-719D</td><td>To filter the FeCl&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt; solution</td></tr><tr><td>Sterile Alcohol Prep Pad</td><td>Fisher</td><td>06-669-62</td><td>To sterilize the surgical site</td></tr><tr><td>Agarose&amp;nbsp;</td><td>BioExpress</td><td>E-3120-500</td><td>To make gel stage</td></tr><tr><td>Leica DMLFS fluorescent microscope</td><td>Leica</td><td></td><td>Intravital microscope</td></tr><tr><td>GIBRALTAR Platform and X-Y Stage System with heating plate attached.</td><td>npi electronic GmbH</td><td></td><td>http://www.npielectronic.de/products/micropositioners/burleigh/gibraltar.html</td></tr><tr><td>Streampix version 3.17.2 software</td><td>NorPix</td><td></td><td>https://www.norpix.com/</td></tr></tbody></table>

ferric chloride-induced murine thrombosis models

Arterial thrombosis (blood clot) is a common complication of many systemic diseases associated with chronic inflammation, including atherosclerosis, diabetes, obesity, cancer and chronic autoimmune rheumatologic disorders. Thrombi are the cause of most heart attacks, strokes and extremity loss, making thrombosis an extremely important public health problem. Since these thrombi stem from inappropriate platelet activation and subsequent coagulation, targeting these systems therapeutically has important clinical significance for developing safer treatments. Due to the complexities of the hemostatic system, in vitro experiments cannot replicate the blood-to-vessel wall interactions; therefore, in vivo studies are critical to understand pathological mechanisms of thrombus formation. To this end, various thrombosis models have been developed in mice. Among them, ferric chloride (FeCl3) induced vascular injury is a widely used model of occlusive thrombosis that reports platelet activation and aggregation in the context of an aseptic closed vascular system. This model is based on redox-induced endothelial cell injury, which is simple and sensitive to both anticoagulant and anti-platelets drugs. The time required for the development of a thrombus that occludes blood flow gives a quantitative measure of vascular injury, platelet activation and aggregation that is relevant to thrombotic diseases. We have significantly refined this FeCl3-induced vascular thrombosis model, which makes the data highly reproducible with minimal variation. Here we describe the model and present representative data from several experimental set-ups that demonstrate the utility of this model in thrombosis research.

Arteria carotis Thrombosis Modell Bei Mäusen mit C57BL6 Hintergrund empfehlen wir die Verwendung von 7,5% FeCl 3 Behälter für 1 min als Ausgangspunkt zu behandeln. Unter der Behandlung von 7,5% FeCl 3, Grenzen des verletzten Bereich und normalen Gefäßwand werden unter dem Mikroskop (siehe Online - Video - 1) leicht identifiziert, was darauf hindeutet , dass die endotheliale Schicht erheb...

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Ferric Chloride-induced Murine Thrombosis Models

Wir berichten über ein raffiniertes Verfahren des Eisenchlorid (FeCl 3) induzierte Thrombose - Modelle auf carotis und A. mesenterica sowie Vene, dadurch effizient Intravitalmikroskopie unter Verwendung von Zeit zu überwachen Thrombenbildung zu okklusiv.

Ferric Chloride-induzierte Murine Thrombosis Models

Arterial thrombosis (blood clot) is a common complication of many systemic diseases associated with chronic inflammation, including atherosclerosis, ...

ferric-chloride-induced-murine-thrombosis-models

Research

JoVE Journal

Medicine

21.5K Aufrufe.  Lerner Research Institute, Cleveland Clinic.  Wir berichten über ein raffiniertes Verfahren des Eisenchlorid (FeCl 3) induzierte Thrombose - Modelle auf carotis und A. mesenterica sowie Vene, dadurch effizient Intravitalmikroskopie unter Verwendung von Zeit zu überwachen Thrombenbildung zu okklusiv. 

Serie: Ferric Chloride-induced Murine Thrombosis Models

Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential therapeutic compounds (1). New compounds to be utilized in the treatment and prevention of DVT are currently being developed. The delivery of potential therapeutic antagonist compounds to an affected thrombosed vein has been problematic. In the context of therapeutic applications, a model that uses partial stasis and consistently generates thrombi within a major vein has been recently established. The Electrolytic Inferior vena cava Model (EIM) is mouse model of DVT that permits thrombus formation in the presence of continuous blood flow. This model allows therapeutic agents to be in contact with the thrombus in a dynamic fashion, and is more sensitive than other models of DVT (1). In addition, this thrombosis model closely simulates clinical situations of thrombus formation and is ideal to study venous endothelial cell activation, leukocyte migration, venous thrombogenesis, and to test therapeutic applications (1). The EIM model is technically simple, easily reproducible, creates consistent thrombi sizes and allows for a large sample (i.e. thrombus and vein wall) which is required for analytical purposes.

Electrolytic Inferior Vena Cava Model EIM of Venous Thrombosis

The electrolytic induction of endothelial activation to the internal surface of the Inferior Vena Cava results in venous type thrombus formation due to endothelial activation and partial blood stasis, two components of Virchow's triad.

Elektrolytische Inferior Vena Cava Model (EIM) von Venenthrombosen

Animal models serve a vital role in deep venous thrombosis (DVT) research in order to study thrombus formation, thrombus resolution and to test potential ...

Forschung

Medizin

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE). In the United States (U.S.), the high morbidity and mortality rates make VTE a serious health concern 1-2. After heart disease and stroke, VTE is the third most common vascular disease 3. In the U.S. alone, there is an estimated 900,000 people affected each year, with 300,000 deaths occurring annually 3. A reliable in vivo animal model to study the mechanisms of this disease is necessary.
The advantages of using the mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis are several. The mouse model allows for the administration of very small volumes of limited availability test agents, reducing costs dramatically. Most promising is the potential for mice with gene knockouts that allow specific inflammatory and coagulation factor functions to be delineated. Current molecular assays allow for the quantitation of vein wall, thrombus, whole blood, and plasma for assays. However, a major concern involving this model is the operative size constraints and the friability of the vessels. Also, due to the small IVC sample weight (mean 0.005 grams) it is necessary to increase animal numbers for accurate statistical analysis for tissue, thrombus, and blood assays such as real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, enzyme-linked immunosorbent (ELISA), zymography, vein wall and thrombus cellular analysis, and whole blood and plasma assays 4-8.
The major disadvantage with the stasis model is that the lack of blood flow inhibits the maximal effect of administered systemic therapeutic agents on the thrombus and vein wall.

The mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis yields quantifiable amounts of vein wall tissue and thrombus. It has proven useful for evaluating interactions between the vein wall and the occlusive thrombus and in assessing the progression from acute to chronic inflammation.

Maus Komplette Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombose

Venous thromboembolism (VTE) includes both deep vein thrombosis (DVT) and pulmonary embolism (PE).  In the United States (U.S.), the high morbidity and ...

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are associated with obesity, though the precise underlying mechanisms that contribute to the disease are currently being delineated.2,3 Several small animal models of obesity have been developed and are employed in a variety of studies.4 A critical component to these experiments involves the collection of regional and/or total animal fat content data under varied conditions.
Traditional experimental methods available for measuring fat content in small animal models of obesity include invasive (e.g. ex vivo measurement of fat deposits) and non-invasive (e.g. Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA), or Magnetic Resonance (MR)) protocols, each of which presents relative trade-offs. Current invasive methods for measuring fat content may provide details for organ and region specific fat distribution, but sacrificing the subjects will preclude longitudinal assessments. Conversely, current non-invasive strategies provide limited details for organ and region specific fat distribution, but enable valuable longitudinal assessment. With the advent of dedicated small animal X-ray computed tomography (CT) systems and customized analytical procedures, both organ and region specific analysis of fat distribution and longitudinal profiling may be possible. Recent reports have validated the use of CT for in vivo longitudinal imaging of adiposity in living mice.5,6 Here we provide a modified method that allows for fat/total volume measurement, analysis and visualization utilizing the Carestream Molecular Imaging Albira CT system in conjunction with PMOD and Volview software packages.

Fat content analysis is routinely conducted in studies utilizing murine obesity models. Emerging methods in small animal CT imaging and analysis are providing for longitudinal detail rich fat content analysis. Here we detail step by step procedures for performing small animal CT imaging, analysis, and visualization.

Segmentierung und Messung von FAT-Volumes in Murine Obesity Modellen mithilfe von Röntgen-Computertomographie

Obesity is associated with increased morbidity and mortality as well as reduced metrics in quality of life.1 Both environmental and genetic factors are ...

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have been developed to facilitate the study of the molecular and cellular pathophysiology of this disease. In this manuscript we describe specific techniques for the quantification and characterization of atherosclerotic lesions in the murine aortic sinus and ascending aorta. The advantage of this procedure is that it provides an accurate measurement of the cross-sectional area and total volume of the lesion, which can be used to compare atherosclerotic progression across different treatment groups. This is possible through the use of the valve leaflets as an anatomical landmark, together with careful adjustment of the sectioning angle. We also describe basic staining methods that can be used to begin to characterize atherosclerotic progression. These can be further modified to investigate antigens of specific interest to the researcher. The described techniques are generally applicable to a wide variety of existing and newly created dietary and genetically-induced models of atherogenesis.

We describe procedures to quantify and characterize atherosclerotic lesions in mouse models using precision sectioning of the aortic sinus and ascending aorta combined with histochemical and immunohistochemical analysis.

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

Intrastriatal Injection of Autologous Blood or Clostridial Collagenase as Murine Models of Intracerebral Hemorrhage

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a common form of cerebrovascular disease and is associated with significant morbidity and mortality. Lack of effective treatment and failure of large clinical trials aimed at hemostasis and clot removal demonstrate the need for further mechanism-driven investigation of ICH. This research may be performed through the framework provided by preclinical models. Two murine models in popular use include intrastriatal (basal ganglia) injection of either autologous whole blood or clostridial collagenase. Since, each model represents distinctly different pathophysiological features related to ICH, use of a particular model may be selected based on what aspect of the disease is to be studied. For example, autologous blood injection most accurately represents the brain&#39;s response to the presence of intraparenchymal blood, and may most closely replicate lobar hemorrhage. Clostridial collagenase injection most accurately represents the small vessel rupture and hematoma evolution characteristic of deep hemorrhages. Thus, each model results in different hematoma formation, neuroinflammatory response, cerebral edema development, and neurobehavioral outcomes. Robustness of a purported therapeutic intervention can be best assessed using both models. In this protocol, induction of ICH using both models, immediate post-operative demonstration of injury, and early post-operative care techniques are demonstrated. Both models result in reproducible injuries, hematoma volumes, and neurobehavioral deficits. Because of the heterogeneity of human ICH, multiple preclinical models are needed to thoroughly explore pathophysiologic mechanisms and test potential therapeutic strategies.

Preclinical models of intracerebral hemorrhage are utilized to mimic certain aspects of clinical disease. Thus, mechanisms of injury and potential therapeutic strategies may be explored. In this protocol, two models of intracerebral hemorrhage are described, intrastriatal (basal ganglia) injections of autologous blood or collagenase.

Intrastriataler Injektion von Eigenblut oder Clostridien-Kollagenase als Murine Modelle der Hirnblutung

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a common form of cerebrovascular disease and is associated with significant morbidity and mortality. Lack of effective ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Orthotopische Injektion von Brustkrebszellen in das Brustfettpolster von Mäusen, das Tumorwachstum zu studieren.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Optimierter Venenthrombose-Assay in einem Mauskrebsmodell mit Gefäßclips

Venous Thrombosis Assay in a Mouse Model of Cancer

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis (CAT). Deep venous thrombosis is a common complication in cancer survivors and can be potentially fatal. The current murine venous thrombosis models typically involve a complete or partial mechanical occlusion of the inferior vena cava (IVC) using a suture. This procedure induces a total or partial stasis of blood and endothelial damage, triggering thrombogenesis. The current models have limitations such as higher variability in clot weights, significant mortality rate, and prolonged learning curve. This report introduces surgical refinements using vascular clips to address some of these limitations. Using a syngeneic colon cancer xenograft mouse model, we employed customized vascular clips to ligate the infrarenal vena cava. These clips allow residual lip space similar to a 5-0 polypropylene suture after IVC ligations. Mice with the suture method served as controls. The vascular clip method resulted in a consistent reproducible partial vascular occlusion and greater clot weights with less variability than the suture method. The larger clot weights, greater clot mass, and clot to the IVC luminal surface area were expected due to the higher pressure profile of the vascular clips compared to a 6-0 polypropylene suture. The approach was validated by gray scale ultrasonography, which revealed consistently greater clot mass in the infrarenal vena cava with vascular clips compared to the suture method. These observations were further substantiated with the immunofluorescence staining. This study offers an improved method to generate a venous thrombosis model in mice, which can be employed to deepen the mechanistic understanding of CAT and in translational research such as drug discovery.

Autor im Rampenlicht: Förderung der krebsassoziierten Thromboseforschung in Nagetiermodellen 

This article aims to present an optimized method for assessing venous thrombosis in a mouse cancer model, using vascular clips to achieve venous ligation. Optimization minimizes variability in thrombosis-related measurements and enhances relevance to human cancer-associated venous thrombosis.

Venöser Thrombose-Assay in einem Mausmodell für Krebs

This methodology paper highlights the surgical nuances of a rodent model of venous thrombosis, specifically in the context of cancer-associated thrombosis ...

Krebsforschung

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric chloride injury is now a well-established technique to rapidly and accurately induce the formation of thrombi in exposed veins or artery of small and large diameter. This model has played a key role in the study of the pathophysiology of thrombosis, in the discovery and validation of novel antithrombotic drugs and in the understanding of the mechanism of action of these new agents. Here, the implementation of this technique on a mesenteric vessel and carotid artery in mice is presented. The method describes how to label circulating leukocytes and platelets with a fluorescent dye and to observe, by intravital microscopy on the exposed mesentery, their accumulation at the injured vessel wall which leads to the formation of a thrombus. On the carotid artery, the occlusion caused by the clot formation is measured by monitoring the blood flow with a Doppler probe.

The FeCl3 induced thrombosis model in mice is described herein. A method to monitor thrombus growth by intravital microscopy observation on a mesenteric vessel and by blood flow measurement in the carotid artery is presented.

Eisenchlorid-induzierte Thrombose Mausmodell für Halsschlagader und Mesentery Vessel

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

Ferric Chloride-induzierte Murine Thrombosis Models

Zusammenfassung

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Elektrolytische Inferior Vena Cava Model (EIM) von Venenthrombosen

Maus Komplette Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombose

Segmentierung und Messung von FAT-Volumes in Murine Obesity Modellen mithilfe von Röntgen-Computertomographie

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Intrastriataler Injektion von Eigenblut oder Clostridien-Kollagenase als Murine Modelle der Hirnblutung

Orthotopische Injektion von Brustkrebszellen in das Brustfettpolster von Mäusen, das Tumorwachstum zu studieren.

Venöser Thrombose-Assay in einem Mausmodell für Krebs

Venöser Thrombose-Assay in einem Mausmodell für Krebs

Venöser Thrombose-Assay in einem Mausmodell für Krebs

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