<em>In vitro</em> Cell Migration and Invasion Assays

Migration is a key property of live cells and critical for normal development, immune response, and disease processes such as cancer metastasis and ...

East Carolina University

GPR4 &#x662F;&#x8D28;&#x5B50;&#x9065;&#x611F;&#x7684; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#x5BB6;&#x65CF;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x3002;&#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x5185;, &#x95F4;&#x8D28;&#x9178;&#x6027; ph &#x503C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6FC0;&#x6D3B; GPR4 &#x8C03;&#x8282;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x9F20;&#x6807; B16F10 &#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6D41;&#x6D6A;&#x6C49; C1 &#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x8981;&#x53BB; GPR4 &#x6216;&#x63A7;&#x5236;&#x77E2;&#x91CF;&#xFF0C;&#x53D7;&#x5230;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3001; &#x4FB5;&#x88AD;&#x548C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;GPR4 &#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x5E76;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5728;&#x9178;&#x6027; ph &#x503C;&#x4E4B;&#x540E;&#xFF0C;B16F10 &#x548C;&#x6D41;&#x6D6A;&#x6C49; C1 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x662F;&#x5927;&#x5E45;&#x6291;&#x5236;&#x4E0E;&#x77E2;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x5728; Matrigel &#x5165;&#x4FB5;&#x548C;&#x5185;&#x8033;&#x5165;&#x4FB5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x51FA;&#x73B0;&#x4E86;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;&#x5728;&#x5206;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;GPR4 &#x7684;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x523A;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x5316; RhoA &#x4E0E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6CBB;&#x7597; (calpeptin) &#x4E0E;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684; Rho &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242; CN01 B16F10 &#x7EC6;&#x80DE;&#x5F3A;&#x70C8;&#x6291;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#xFF0C;&#x56DE;&#x987E;&#x6027;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2; GPR4 &#x81F4;&#x8FD0;&#x52A8;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x68C0;&#x67E5;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x6548;&#x5E94;&#xFF0C;B16F10 &#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x9759;&#x8109;&#x6CE8;&#x5165;&#x81EA;&#x4F53; C57BL/6 &#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x80BA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x4E86;&#x5927;&#x7EA6; 80 %gpr4 &#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE; B16F10 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x77E2;&#x91CF;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x7ECF;&#x5904;&#x7406;&#x540E;&#x4E0E; Rho &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5242; CN01&#xFF0C;B16F10 &#x77E2;&#x91CF;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x5E73;&#x884C;&#xFF0C;GPR4 &#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x68C0;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7531;&#x9178;&#x6027; pH GPR4 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6291;&#x5236;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x4FB5;&#x88AD;&#xFF0C;Rho &#x86CB;&#x767D;&#x81F3;&#x5C11;&#x662F;&#x90E8;&#x5206;&#x8D1F;&#x8D23;&#x6B64;&#x8868;&#x578B;&#x3002;

&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x8D28;&#x5B50;&#x9065;&#x611F; GPR4 &#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

GPR4 is a member of the proton-sensing G protein-coupled receptor family. Within tumor microenvironments, the interstitial acidic pH may activate GPR4 to regulate the behavior of tumor cells. Mouse B16F10 melanoma cells and TRAMP-C1 prostate cancer cells, genetically engineered to overexpress GPR4 or the control vector, were subject to a series of cell migration, invasion and metastasis assays. Upon GPR4 overexpression and activation in an acidic pH, the migration of B16F10 and TRAMP-C1 cells was substantially inhibited in comparison to the vector control. Similar results were observed in the Matrigel invasion and transendothelial invasion assays. At the molecular level, stimulation of GPR4 by acidosis induced the activation of RhoA and the formation of actin stress fibers. In addition, treating B16F10 cells with the known Rho activator CN01 (calpeptin) strongly inhibited cell migration, recapitulating the acidosis/GPR4-induced motility inhibition phenotype. To examine the biological effects in vivo, B16F10 melanoma cells were intravenously injected into syngeneic C57BL/6 mice and pulmonary metastasis was inhibited by approximately 80% in GPR4-overexpressing B16F10 cells in comparison to the vector control. Upon treatment with the Rho activator CN01, the phenotype of the B16F10 vector cells paralleled that of the GPR4-overexpressing cells in cell migration and metastasis assays. These findings suggest that GPR4 activation by an acidic pH inhibits tumor cell migration and invasion, and the Rho GTPase is at least partly responsible for this phenotype.

Inhibition of tumor cell migration and metastasis by the proton-sensing GPR4 receptor.

GPR4 est membre de la famille des r&eacute;cepteurs coupl&eacute;s aux prot&eacute;ines G d&eacute;tection de proton. Au sein des micro-environnements tumorale, l&#39;acide pH interstitiel peut activer GPR4 pour r&eacute;glementer le comportement des cellules tumorales. Cellules de m&eacute;lanome de souris B16F10 et TRAMP-C1 cancer de la prostate, g&eacute;n&eacute;tiquement pour surexprimer GPR4 ou le vecteur de contr&ocirc;le, ont &eacute;t&eacute; soumis &agrave; une s&eacute;rie de migration cellulaire, l&#39;invasion et m&eacute;tastase de dosages. Une surexpression de GPR4 et activation &agrave; un pH acide, la migration des cellules B16F10 et TRAMP-C1 est substantiellement inhib&eacute;e par rapport &agrave; la lutte antivectorielle. Des r&eacute;sultats similaires ont &eacute;t&eacute; observ&eacute;s dans l&#39;invasion de Matrigel et invasion transendoth&eacute;liale dosages. Au niveau mol&eacute;culaire, la stimulation de GPR4 par l&#39;acidose induite par l&#39;activation de RhoA et la formation des fibres de stress d&#39;actine. De plus, le traitement de cellules de B16F10 avec l&#39;activateur de Rho connu CN01 (calpeptin) fortement inhibe la migration cellulaire, r&eacute;capitulant le ph&eacute;notype inhibition de la motilit&eacute; acidose/GPR4-induite. Afin d&#39;examiner les effets biologiques in vivo, B16F10 cellules de m&eacute;lanome ont &eacute;t&eacute; inject&eacute;es par voie intraveineuse syng&eacute;niques C57BL/6 m&acirc;les et m&eacute;tastase pulmonaire est inhib&eacute;e par environ 80 % dans les cellules surexprimant-GPR4 B16F10 par rapport &agrave; la lutte antivectorielle. Par traitement avec l&#39;activateur de Rho CN01, le ph&eacute;notype des cellules B16F10 vector est parall&egrave;le &agrave; celle des cellules surexprimant-GPR4 dans la migration cellulaire et des essais de m&eacute;tastase. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que l&#39;activation GPR4 par un pH acide inhibe invasion et migration des cellules tumorales et la GTPase Rho est au moins en partie responsable de ce ph&eacute;notype.

Inhibition de la migration des cellules tumorales et des m&eacute;tastases par les r&eacute;cepteurs GPR4 proton.

GPR4 ist ein Mitglied der Familie der Proton Erkennung von G-Protein-gekoppelter Rezeptor. Innerhalb von Tumor Mikroumgebungen kann der interstitielle saure pH-Wert GPR4 regulieren das Verhalten der Tumorzellen aktivieren. Maus B16F10 Melanomzellen und Prostatakrebszellen TRAMP-C1, gentechnisch, GPR4 oder der Steuerelement-Vektor, &uuml;berexprimiert unterliegen einer Reihe von Zellmigration, Invasivit&auml;t und Metastasierung Proben waren. Nach GPR4-&Uuml;berexpression und Aktivierung in einem sauren pH-Wert war die Migration von B16F10 und TRAMP-C1 Zellen erheblich im Vergleich zu der Vektorregelung gehemmt. &Auml;hnliche Ergebnisse wurden in der Matrigel-Invasion und Transendothelial Invasion Proben beobachtet. Auf molekularer Ebene induzierte Stimulation des GPR4 durch Azidose die Aktivierung von RhoA und die Bildung von Aktin Spannung Fasern. Behandlung von B16F10 Zellen mit den bekannten Rho-Aktivator CN01 (Calpeptin) stark gehemmt zus&auml;tzlich Zellmigration, Redebeitr&auml;ge der Motilit&auml;t Azidose/GPR4-induzierte Hemmung Ph&auml;notyp. Um die biologischen Effekte, die in-vivo zu untersuchen, wurden B16F10 Melanomzellen in syngenen C57BL/6 M&auml;usen intraven&ouml;s injiziert und pulmonale Metastasierung von etwa 80 % in B16F10 GPR4-&uuml;berexprimierenden Zellen im Vergleich zu der Vektorregelung gehemmt wurde. Bei der Behandlung mit der Rho-Aktivator CN01 parallel der Ph&auml;notyp der Zellen B16F10 Vektor, die GPR4-&uuml;berexprimierenden Zellen in Zellmigration und Metastasierung Assays. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass GPR4 Aktivierung durch einen sauren pH-Wert Tumor Zelle Migration und Invasion hemmt und der Rho-GTPase zumindest mitverantwortlich f&uuml;r diese Ph&auml;notyp.

Hemmung der Tumor-Zellmigration und Metastasierung durch die Proton-Sensorik-GPR4-Rezeptor.

GPR4 &egrave; un membro della famiglia dei recettori accoppiati a proteine G protone-sensing. All&#39;interno di microambienti tumorali, il pH acido interstiziale pu&ograve; attivare GPR4 per regolare il comportamento delle cellule tumorali. Cellule di melanoma mouse B16F10 e cellule tumorali della prostata TRAMP-C1, geneticamente ai overexpress GPR4 o il controllo vettoriale, sono stati sottoposti a una serie di migrazione cellulare, invasione e metastasi dosaggi. GPR4 sovraespressione e attivazione di un pH acido, la migrazione di cellule B16F10 e vagabondo-C1 era sostanzialmente inibita rispetto al controllo vettoriale. Risultati simili sono stati osservati in Matrigel invasione e invasione transendoteliale dosaggi. A livello molecolare, la stimolazione del GPR4 da acidosi indotta l&#39;attivazione di RhoA e la formazione delle fibre di actina lo stress. Inoltre, trattando le cellule B16F10 con il noto attivatore Rho CN01 (calpeptin) fortemente inibito migrazione cellulare, ricapitolando il fenotipo di inibizione motilit&agrave; acidosi/GPR4-indotta. Per esaminare gli effetti biologici in vivo, B16F10 cellule di melanoma sono state iniettate per via endovenosa in topi C57BL/6 Carlo e metastasi polmonari &egrave; stata inibita da circa l&#39;80% nelle cellule con sovraesprimono relativa GPR4 B16F10 rispetto al controllo vettoriale. Previo trattamento con l&#39;attivatore di Rho CN01, il fenotipo delle cellule B16F10 vettore parallelo che delle cellule con sovraesprimono relativa GPR4 nella migrazione cellulare e dosaggi di metastasi. Questi risultati suggeriscono che GPR4 attivazione da un pH acido inibisce l&#39;invasione e la migrazione delle cellule tumorali, e la GTPasi Rho &egrave; almeno in parte responsabile di questo fenotipo.

Inibizione della migrazione delle cellule tumorali e metastasi dal recettore GPR4 protone-sensing.

GPR4 G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x3092;&#x611F;&#x77E5;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x4E00;&#x54E1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x816B;&#x760D;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x5185;&#x9593;&#x9699;&#x306E;&#x9178;&#x6027;&#x306E; pH &#x306F;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B; GPR4 &#x3067;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; B16F10 &#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x4E0D;&#x5B9A;&#x671F;&#x8239; C1 &#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048; GPR4 &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5236;&#x5FA1;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB; &#x30CE;&#x30B6;&#x30F3;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x30FB;&#x6D78;&#x6F64;&#x30FB;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x4E88;&#x544A;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3044;&#x305F;&#x3002;GPR4 &#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x9178;&#x6027; pH &#x3067;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x8A8D;&#x8A3C;&#x6642;&#x306B;&#x3001;B16F10 &#x3068;&#x4E0D;&#x5B9A;&#x671F;&#x8239; C1 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x52D5;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x305F;.&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B2;&#x30EB;&#x4FB5;&#x7565;&#x3068;&#x5185;&#x76AE;&#x306E;&#x4FB5;&#x7565;&#x3067;&#x8A66;&#x91D1;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;GPR4 &#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; RhoA &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;B16F10 &#x7D30;&#x80DE; (calpeptin) &#x65E2;&#x77E5;&#x306E; Rho &#x6D3B;&#x6027;&#x5264; CN01 &#x3068;&#x5F37;&#x304F;&#x6CBB;&#x7642;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;/GPR4 &#x8A98;&#x8D77;&#x904B;&#x52D5;&#x963B;&#x5BB3;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x8981;&#x7D04;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;In vivo &#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;B16F10 &#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x9759;&#x8108;&#x5185;&#x540C;&#x7CFB;&#x306E; c57bl/6 &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x7D04; 80 &#xFF05; GPR4 &#x904E;&#x5270; B16F10 &#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x80BA;&#x8EE2;&#x79FB;&#x304C;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Rho &#x6D3B;&#x6027;&#x5264; CN01 &#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B; B16F10 &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306F; GPR4 &#x904E;&#x5270;&#x7D30;&#x80DE;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x52D5;&#x3068;&#x8EE2;&#x79FB;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x4E26;&#x5217;&#x3002;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x3068;&#x4FB5;&#x7565;&#x3001;&#x9178;&#x6027; pH &#x306B;&#x3088;&#x308B; GPR4 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3066; Rho GTPase &#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x3053;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x3068; GPR4 &#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x3092;&#x611F;&#x77E5;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3002;

GPR4 G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xAC10;&#xC9C0; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC885;&#xC591; microenvironments &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC04; &#xC9C8; &#xC131; &#xC0B0; &#xC131; &#xC0B0;&#xB3C4; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD589;&#xB3D9;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; gpr4&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; B16F10 &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBC14;&#xB78C;&#xB465;&#xC774; C1 &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; overexpress GPR4 &#xB610;&#xB294; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xACFC; &#xCE68;&#xACF5; &#xC804;&#xC774;&#xC758; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. GPR4 overexpression &#xBC0F; &#xC0B0; &#xC131; Ph&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB418; &#xBA74; b16f10&#xC640; &#xBC14;&#xB78C;&#xB465;&#xC774; C1 &#xC140;&#xC758; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC740; &#xBCA1;&#xD130; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC2E4;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC800;&#xD574; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; Matrigel &#xCE68;&#xACF5;&#xACFC; transendothelial &#xCE68;&#xACF5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D; &#xD558; &#xC5EC; gpr4&#xC758; &#xC790;&#xADF9; &#xC720;&#xB3C4; Rhoa&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xD615;&#xC131; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; Rho &#xD65C;&#xC131;&#xAE30; CN01 B16F10 &#xC138;&#xD3EC; (calpeptin)&#xB97C; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC99D;/gpr4&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD615; &#xC5C5;&#xACFC; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC800;&#xD574;. In vivo &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC80;&#xC0AC;&#xD560; B16F10 &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xC138;&#xD3EC; &#xD588;&#xB2E4; syngeneic C57BL/6 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC815; &#xB9E5; &#xC8FC;&#xC0AC;&#xC640; &#xD3D0; &#xC804;&#xC774; &#xBCA1;&#xD130; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; GPR4 overexpressing B16F10 &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC57D; 80%&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Rho &#xD65C;&#xC131;&#xAE30; CN01, &#xCE58;&#xB8CC; &#xC2DC; B16F10 &#xBCA1;&#xD130; &#xC140;&#xC758; phenotype paralleled &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xC804;&#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; GPR4 overexpressing &#xC140;&#xC758;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xB0B4; &#xC2B5;, &#xC0B0; &#xC131; Ph&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; GPR4 &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC5B5;&#xC81C; Rho Gtpase&#xC740; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xBD84;&#xD560; &#xCC45;&#xC784; &#xC788;&#xB294;&#xC774; &#xD615;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xAC10;&#xC9C0; GPR4 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC804;&#xC774;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;.

GPR4 es miembro de la familia de receptor acoplado a prote&iacute;nas G sensor de protones. En microambientes del tumor, el pH &aacute;cido intersticial puede activar GPR4 para regular el comportamiento de las c&eacute;lulas tumorales. Las c&eacute;lulas del melanoma B16F10 de rat&oacute;n y c&eacute;lulas de c&aacute;ncer de pr&oacute;stata de vagabundo-C1, gen&eacute;ticamente modificados para sobreexpresar GPR4 o el vector de control, fueron objeto de una serie de migraci&oacute;n celular, invasi&oacute;n y met&aacute;stasis ensayos. Sobreexpresi&oacute;n de GPR4 y activaci&oacute;n en un pH &aacute;cido, la migraci&oacute;n de c&eacute;lulas B16F10 y vagabundo-C1 se inhibi&oacute; sustancialmente en comparaci&oacute;n con el control de vectores. Resultados similares fueron observados en la invasi&oacute;n de Matrigel y transendothelial invasi&oacute;n ensayos. A nivel molecular, la estimulaci&oacute;n de GPR4 por acidosis inducida por la activaci&oacute;n de RhoA y la formaci&oacute;n de fibras de actina estr&eacute;s. Adem&aacute;s, tratar c&eacute;lulas B16F10 con el activador de Rho conocido CN01 (calpeptin) fuertemente inhibieron la migraci&oacute;n celular, recapitulando el fenotipo de inhibici&oacute;n de la motilidad acidosis/GPR4-inducida. Para examinar los efectos biol&oacute;gicos in vivo, las c&eacute;lulas del melanoma B16F10 fueron inyectadas por v&iacute;a intravenosa en syngeneic ratones C57BL/6 y met&aacute;stasis pulmonar fue inhibida por aproximadamente el 80% en B16F10 GPR4-overexpressing c&eacute;lulas en comparaci&oacute;n con el control de vectores. Sobre el tratamiento con el activador de Rho CN01, el fenotipo de las c&eacute;lulas de B16F10 vector paralelo de las c&eacute;lulas GPR4-overexpressing en la migraci&oacute;n celular y ensayos de met&aacute;stasis. Estos resultados sugieren que la activaci&oacute;n de GPR4 por un pH &aacute;cido inhibe la invasi&oacute;n y migraci&oacute;n de la c&eacute;lula del tumor, y la Rho GTPasa por lo menos es en parte responsable de este fenotipo.

Inhibici&oacute;n de la migraci&oacute;n de la c&eacute;lula del tumor y la met&aacute;stasis por el receptor GPR4 detecci&oacute;n de protones.

&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5FAE;&#x89C2;&#x73AF;&#x5883;&#x708E;&#x75C7;&#x90E8;&#x4F4D;&#x5F80;&#x5F80;&#x662F;&#x9178;&#x6027;&#x7684;&#x800C;&#x5176;&#x4E2D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x54CD;&#x5E94;&#x6027;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x8FD8;&#x4E0D;&#x592A;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5229;&#x7528;&#x5206;&#x5B50;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7684; GPR4&#xFF0C;&#x8D28;&#x5B50;&#x9065;&#x611F; G &#x86CB;&#x767D;&#x5076;&#x8054;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x7531; isocapnic &#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x6D3B;&#x5316;&#x589E;&#x52A0;&#x4EBA;&#x8110;&#x9759;&#x8109;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x8110;) &#x8868;&#x793A; GPR4 &#x6B65;&#x4E4B;&#x9065;&#x7684;&#x7C98;&#x63A5;&#x6027;&#x3002;GPR4 &#x9AD8;&#x6548;&#x8868;&#x8FBE;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7ED3;&#x5408;&#x6027;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x589E;&#x5F3A; U937 &#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8110;&#x7C98;&#x8FDE;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;G &#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7F3A;&#x9677;&#x5E72;&#x6BCD;&#x9898; (R115A) &#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; GPR4 &#x7684;&#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F15;&#x8D77;&#x4EFB;&#x4F55;&#x589E;&#x52A0;&#x8110;&#x7C98;&#x9644;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; G &#x86CB;&#x767D;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;RNA &#x5E72;&#x6270;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; GPR4 &#x8868;&#x8FBE;&#x51CF;&#x5C11;&#x6027;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x81F4;&#x8110;&#x9644;&#x7740;&#x529B;&#x3002;&#x6765;&#x63CF;&#x7ED8;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684;&#x51FA;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x6291;&#x5236;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x73AF;&#x5316;&#x9176;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3001; 2&#39;&#x3001; 5&#39;-dideoxyadenosine (DDA) &#x6216; SQ 22536 &#x6291;&#x5236;&#x6027;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2; GPR4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x8110;&#x7C98;&#x9644;&#x3002;&#x59CB;&#x7EC8;&#x5982;&#x4E00;&#xFF0C;&#x6CBB;&#x7597;&#x8425;&#x6A21;&#x62DF;&#x6216;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x589E;&#x52A0;&#x8110;&#x7C98;&#x5EA6;&#x3001; G(i) &#x6697;&#x793A;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; G(s) / &#x8425;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x663E;&#x793A; Epac &#x8425;&#x5730;&#x4E0B;&#x6E38;&#x6548;&#x5E94;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2; GPR4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;GPR4 &#x7684;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x6D3B;&#x5316;&#x589E;&#x52A0; E-&#x9009;&#x62E9;&#x7D20;&#x3001; &#x8840;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9ECF;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;-1 &#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;-1&#xFF0C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x6709;&#x53C2;&#x4E0E;&#x6027;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2; GPR4 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x8110;&#x7C98;&#x9644;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#x5730;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x78B3;&#x9178;&#x6027;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x4E5F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6FC0;&#x6D3B; GPR4 &#x523A;&#x6FC0;&#x8110;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x7C98;&#x63A5;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6027;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;/GPR4 &#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x8282;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x901A;&#x8FC7; G(s)/&#x8425;&#x5730;/Epac &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#xFF0C;&#x53EF;&#x5728;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

GPR4 &#x7684;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x6D3B;&#x5316;&#x589E;&#x52A0;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x8425;/Epac &#x9014;&#x5F84;&#x3002;

Endothelium-leukocyte interaction is critical for inflammatory responses. Whereas the tissue microenvironments are often acidic at inflammatory sites, the mechanisms by which cells respond to acidosis are not well understood. Using molecular, cellular and biochemical approaches, we demonstrate that activation of GPR4, a proton-sensing G protein-coupled receptor, by isocapnic acidosis increases the adhesiveness of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) that express GPR4 endogenously. Acidosis in combination with GPR4 overexpression further augments HUVEC adhesion with U937 monocytes. In contrast, overexpression of a G protein signaling-defective DRY motif mutant (R115A) of GPR4 does not elicit any increase of HUVEC adhesion, indicating the requirement of G protein signaling. Downregulation of GPR4 expression by RNA interference reduces the acidosis-induced HUVEC adhesion. To delineate downstream pathways, we show that inhibition of adenylate cyclase by inhibitors, 2',5'-dideoxyadenosine (DDA) or SQ 22536, attenuates acidosis/GPR4-induced HUVEC adhesion. Consistently, treatment with a cAMP analog or a G(i) signaling inhibitor increases HUVEC adhesiveness, suggesting a role of the G(s)/cAMP signaling in this process. We further show that the cAMP downstream effector Epac is important for acidosis/GPR4-induced cell adhesion. Moreover, activation of GPR4 by acidosis increases the expression of vascular adhesion molecules E-selectin, VCAM-1 and ICAM-1, which are functionally involved in acidosis/GPR4-mediated HUVEC adhesion. Similarly, hypercapnic acidosis can also activate GPR4 to stimulate HUVEC adhesion molecule expression and adhesiveness. These results suggest that acidosis/GPR4 signaling regulates endothelial cell adhesion mainly through the G(s)/cAMP/Epac pathway and may play a role in the inflammatory response of vascular endothelial cells.

Activation of GPR4 by acidosis increases endothelial cell adhesion through the cAMP/Epac pathway.

Interaction de l&#39;endoth&eacute;lium-leucocyte est critique pour les r&eacute;ponses inflammatoires. Consid&eacute;rant que les micro-environnements tissus sont souvent acides dans les sites inflammatoires, les m&eacute;canismes par lesquels les cellules r&eacute;agissent &agrave; l&#39;acidose ne sont pas bien compris. En utilisant des approches mol&eacute;culaires, cellulaires et biochimiques, nous d&eacute;montrons que l&#39;activation de GPR4, un d&eacute;tection de proton G r&eacute;cepteur coupl&eacute; aux prot&eacute;ines, par l&#39;acidose d&eacute;bit ventilatoire augmente l&#39;adh&eacute;rence des cellules endoth&eacute;liales de veine ombilicale humaine (HUVEC) qui expriment GPR4 endog&egrave;ne. Acidose en combinaison avec la surexpression de GPR4 outre augmente adh&eacute;rence HUVEC avec U937 monocytes. En revanche, la surexpression d&#39;un mutant pr&eacute;sentant un d&eacute;faut de signalisation motif sec de prot&eacute;ine G (R115A) de GPR4 ne pas permis d&#39;obtenir une augmentation de l&#39;adh&eacute;rence des HUVEC, indiquant l&#39;obligation de signalisation de la prot&eacute;ine G. Downregulation de GPR4 expression par interf&eacute;rence ARN r&eacute;duit l&#39;adh&eacute;rence HUVEC induite par l&#39;acidose. Pour d&eacute;limiter les voies en aval, nous montrons que l&#39;inhibition de l&#39;ad&eacute;nylate cyclase par inhibiteurs, 2&#39;, 5&#39;-dideoxyad&eacute;nosine (DDA) ou le SQ 22536, att&eacute;nue l&#39;adh&eacute;rence HUVEC acidose/GPR4-induite. Syst&eacute;matiquement, un traitement avec un cAMP analogique ou un G(i) de signalisation inhibiteur augmente l&#39;adh&eacute;rence HUVEC, sugg&eacute;rant un r&ocirc;le de la s / cAMP de signalisation dans ce processus. De plus, nous montrons que le cAMP effecteur Epac est important pour l&#39;adh&eacute;rence de l&#39;acidose/GPR4-induite de cellules. En outre, l&#39;activation de GPR4 par l&#39;acidose augmente l&#39;expression des mol&eacute;cules d&#39;adh&eacute;sion vasculaires E-s&eacute;lectine, VCAM-1 et ICAM-1, qui sont fonctionnellement impliqu&eacute;es dans l&#39;adh&eacute;sion HUVEC acidose/GPR4-m&eacute;diation. De m&ecirc;me, l&#39;acidose hypercapnique pouvez &eacute;galement activer GPR4 pour stimuler l&#39;adh&eacute;rence et l&#39;expression de mol&eacute;cule adh&eacute;rence HUVEC. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que l&#39;acidose/GPR4 signalisation r&eacute;gule l&#39;adh&eacute;rence des cellules endoth&eacute;liales principalement par le biais de la voie s/cAMP/Epac et pourrait jouer un r&ocirc;le dans la r&eacute;ponse inflammatoire des cellules endoth&eacute;liales vasculaires.

Activation de GPR4 par l&#39;acidose augmente adh&eacute;rence des cellules endoth&eacute;liales par la voie du cAMP/Epac.

Endothel-Leukozyten Interaktion ist entscheidend f&uuml;r entz&uuml;ndliche Reaktionen. W&auml;hrend die Gewebe Mikroumgebungen oft an entz&uuml;ndlichen Standorten sauer sind, die Mechanismen, durch die Zellen auf Azidose reagieren, nicht gut verstanden. Biochemische, Molekulare und Zellul&auml;re Ans&auml;tze verwenden, zeigen wir, dass die Aktivierung der GPR4, ein Proton-Sensorik G Protein-gekoppelter Rezeptor, durch Isocapnic Azidose erh&ouml;ht die Haftf&auml;higkeit der menschlichen Nabelschnur Vene Endothelzellen (HUVECs), die GPR4 endogen Ausdr&uuml;cken. Azidose in Kombination mit GPR4 eine &Uuml;berexpression weiter erg&auml;nzt HUVEC Haftf&auml;higkeit mit U937 Monozyten. Eine &Uuml;berexpression von G Protein signalisieren-Genen trocken Motiv Mutanten (R115A) des GPR4 nicht dagegen keine Erh&ouml;hung der HUVEC Adh&auml;sion, angibt, das Erfordernis der G Protein signaling hinausgehen. Heraufregulation des GPR4 Ausdrucks durch RNA-Interferenz reduziert die Azidose induziert HUVEC Adh&auml;sion. Um die nachgelagerten Wege abzugrenzen zeigen wir, dass Hemmung der Adenylate Cyclase durch Inhibitoren, 2&#39;, 5&#39;-Dideoxyadenosine (DDA) oder SQ 22536, d&auml;mpft Azidose/GPR4-induzierte HUVEC Adh&auml;sion. Konsequent, Behandlung mit einer analogen cAMP oder eine Signalisierung Inhibitor erh&ouml;ht HUVEC Haftf&auml;higkeit, G(i) schl&auml;gt eine Rolle der G(s) / cAMP signalisieren in diesem Prozess. Weiter zeigen wir, dass der cAMP nachgeschaltete Effektor Epac wichtig f&uuml;r Azidose/GPR4-induzierten Zelladh&auml;sion. Zudem erh&ouml;ht die Aktivierung von GPR4 durch Azidose Ausdruck der vaskul&auml;ren Adh&auml;sionsmolek&uuml;le E-selectin, VCAM-1 und ICAM-1, die funktionell in Azidose/GPR4-vermittelte HUVEC Adh&auml;sion beteiligt sind. Ebenso kann hypercapnic Azidose auch GPR4 zur F&ouml;rderung von HUVEC Adh&auml;sion Molek&uuml;l Ausdruck und Haftf&auml;higkeit aktivieren. Diesen Ergebnissen zufolge Azidose/GPR4 Signalisierung regelt endothelial Zellenadh&auml;sion haupts&auml;chlich durch die G(s)/Lager/Epac Pathway und kann in die entz&uuml;ndliche Reaktion des vaskul&auml;ren endothelialen Zellen eine Rolle spielen.

Aktivierung von GPR4 durch Azidose erh&ouml;ht endothelial Zellenadh&auml;sion durch die Lager/Epac-Pathway.

Interazione endotelio-leucociti &egrave; fondamentale per le risposte infiammatorie. Considerando che i microambienti tessuto sono spesso acide nei siti infiammatori, i meccanismi con cui le cellule rispondono a acidosi non sono ben compresi. Utilizzando approcci molecolari, cellulari e biochimici, dimostriamo che la attivazione di GPR4, un protone G protein-coupled recettore sensibile, da ipernea acidosi aumenta l&#39;adesivit&agrave; delle cellule endoteliali umane vena ombelicale (HUVECs) che esprimono GPR4 endogena. In combinazione con sovraespressione di GPR4 ulteriormente l&#39;acidosi aumenta adesione HUVEC con U937 monociti. Al contrario, sovraespressione di un mutante del motivo secco difettoso di segnalazione di proteina G (R115A) di GPR4 non suscitano alcun aumento di aderenza HUVEC, che indica l&#39;obbligo di segnalazione della proteina di G. Downregulation di GPR4 espressione di interferenza del RNA riduce l&#39;adesione HUVEC indotta da acidosi. Per delineare percorsi a valle, ci mostra che l&#39;inibizione dell&#39;adenilato ciclasi di inibitori, 2&#39;, 5&#39;-dideoxyadenosine (DDA) o 22536 SQ, attenua adesione HUVEC acidosi/GPR4-indotta. Coerentemente, il trattamento con un campo analogico o un G(i) segnalazione inibitore aumenta l&#39;adesivit&agrave; HUVEC, suggerendo un ruolo della g / cAMP segnalando in questo processo. Ulteriormente, ci mostra che l&#39;accampamento effector downstream Epac &egrave; importante per l&#39;adesione di acidosi/GPR4-indotta delle cellule. Inoltre, attivazione di GPR4 da acidosi aumenta l&#39;espressione delle molecole di adesione vascolare E-selectina, VCAM-1 e ICAM-1, che sono funzionalmente coinvolti nell&#39;adesione HUVEC acidosi/GPR4-mediata. Analogamente, hypercapnic acidosi pu&ograve; anche attivare GPR4 per stimolare adesivit&agrave; e HUVEC adesione molecola espressione. Questi risultati suggeriscono che l&#39;acidosi/GPR4 segnalazione regola l&#39;adesione delle cellule endoteliali principalmente attraverso il pathway g/Campeggio/Epac e pu&ograve; giocare un ruolo nella risposta infiammatoria delle cellule endoteliali vascolari.

Attivazione di GPR4 da acidosi aumenta l&#39;adesione delle cellule endoteliali attraverso il pathway cAMP/Epac.

&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x9178;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x5FDC;&#x7B54;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x3092;&#x611F;&#x77E5; G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5171;&#x5F79;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3001;isocapnic &#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308B; GPR4 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; GPR4 &#x3092;&#x5185;&#x751F;&#x7684;&#x8868;&#x73FE;&#x3072;&#x3068;&#x81CD;&#x5E2F;&#x9759;&#x8108;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;) &#x306E;&#x5BC6;&#x7740;&#x6027;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B; GPR4 &#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; U937 &#x5358;&#x7403;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x4E0D;&#x826F;&#x4E7E;&#x71E5;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x5909;&#x7570; (R115A) GPR4 &#x4F53;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x3001;G &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x51FA;&#x3059;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;GPR4 &#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5F0F; RNA &#x5E72;&#x6E09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x306E;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x8A98;&#x8D77;&#x4ED8;&#x7740;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0B;&#x6D41;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x63CF;&#x304F;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x9054;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30B7;&#x30AF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x793A;&#x3059;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;, 2&#39;, 5&#39; &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;-dideoxyadenosine (DDA) &#x307E;&#x305F;&#x306F; SQ 22536 &#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;/GPR4 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3084;&#x6CBB;&#x7642;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x6D3B;&#x63A5;&#x7740;&#x6027;&#x3001;G(i)&#x3001;G(s) &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x5506;/&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3092;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC; Epac &#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;/GPR4 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;GPR4 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x8840;&#x7BA1;&#x63A5;&#x7740;&#x5206;&#x5B50; E-&#x30BB;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;VCAM 1&#x3001;ICAM-1&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;/GPR4 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x6D3B;&#x63A5;&#x7740;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x4E2D;&#x67A2;&#x6027;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x63A5;&#x7740;&#x5206;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x5BC6;&#x7740;&#x6027;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B; GPR4 &#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;/GPR4 &#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F; G(s)/&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;/Epac &#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x4E3B;&#x306B;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x3066;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x6027;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x62C5;&#x3046;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

GPR4 &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;/Epac &#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Endothelium &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74; &#xC870;&#xC9C1; microenvironments&#xC740; &#xC885;&#xC885; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC0B0; &#xC131;, &#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0;. &#xBD84;&#xC790;, &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, GPR4, &#xC218;&#xC6A9; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xAC10;&#xC9C0; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xCCB4;, isocapnic &#xC99D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; endogenously gpr4&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC778;&#xAC04; &#xD0EF; &#xC904; &#xC815; &#xB9E5; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; (HUVECs)&#xC758; &#xC811;&#xCC29; &#xB825; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. GPR4 overexpression &#xCD94;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D; U937 monocytes&#xC640; HUVEC &#xC811;&#xCC29;&#xC744; &#xC99D;&#xB300; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, gpr4&#xC758; G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2E0;&#xD638; &#xACB0;&#xD568; &#xAC74;&#xC870; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (R115A)&#xC758; overexpression G &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC2E0;&#xD638; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; HUVEC &#xC811;&#xCC29;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294;. RNA &#xAC04;&#xC12D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; Downregulation&#xC758; GPR4 &#xC2DD; &#xC99D; &#xC720;&#xBC1C; HUVEC &#xC811;&#xCC29;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DC;&#xD0A8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xACBD;&#xB85C; &#xC724;&#xACFD;&#xC744; &#xADF8;&#xB9AC; &#xB2E4; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xADF8; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC758; &#xC800; &#xD574;&#xC81C;, 2&#39;, dideoxyadenosine (dda &#xD611;&#xC0C1;)-5&#39; &#xB610;&#xB294; SQ 22536 adenylate cyclase &#xD45C;&#xC2DC; HUVEC &#xC811;&#xCC29; &#xC99D;/gpr4&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC57D;&#xD654;. &#xC77C;&#xAD00; &#xB418; &#xAC8C;, &#xCE58;&#xB8CC; &#xCEA0;&#xD504; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; &#xB610;&#xB294; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; HUVEC &#xC811;&#xCC29; &#xB825; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2E0;&#xD638; g(i)&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; G(S)&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; /&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638; &#xCEA0;&#xD504;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCEA0;&#xD504; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC774;&#xD399;&#xD130; Epac &#xC99D;/GPR4-&#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4; &#xB354; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC99D;&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; gpr4&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; E selectin VCAM 1, ICAM-1, HUVEC &#xC811;&#xCC29; &#xC99D;/GPR4-&#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD608;&#xAD00; &#xC811;&#xCC29; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, hypercapnic &#xC99D; GPR4 HUVEC &#xC811;&#xCC29; &#xBD84;&#xC790; &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xC811;&#xCC29; &#xB825; &#xC790;&#xADF9;&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC99D;/GPR4 &#xC2E0;&#xD638; G(s)/&#xCEA0;&#xD504;/Epac &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC8FC;&#xB85C; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558; &#xACE0; &#xD608;&#xAD00; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC5FC;&#xC99D; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC99D;&#xC5D0;&#xC758; &#xD55C; gpr4&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xCEA0;&#xD504;/Epac &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xB825; &#xC99D;&#xAC00;.

Interacci&oacute;n del endotelio-leucocito es cr&iacute;tico para las respuestas inflamatorias. Considerando que los microambientes de tejido a menudo son &aacute;cidos en los sitios inflamatorios, los mecanismos por los cuales las c&eacute;lulas responden a acidosis no son bien entendidos. Utilizando los enfoques moleculares, celulares y bioqu&iacute;micos, demostramos que la activaci&oacute;n de GPR4, un prot&oacute;n-sensor G receptor acoplado a prote&iacute;nas, por isocapnic acidosis aumenta la adherencia de las c&eacute;lulas endoteliales de la vena umbilical humana (HUVECs) que expresan GPR4 end&oacute;geno. Acidosis en combinaci&oacute;n con sobreexpresi&oacute;n de GPR4 m&aacute;s aumenta la adherencia HUVEC con U937 monocitos. En cambio, sobreexpresi&oacute;n de un mutante de adorno seco defectuoso de se&ntilde;alizaci&oacute;n de la prote&iacute;na G (R115A) de GPR4 no provocan un aumento de la adherencia HUVEC, indicando la necesidad de se&ntilde;alizaci&oacute;n de prote&iacute;na G. Downregulation de GPR4 expresi&oacute;n de ARN de interferencia reduce la adherencia HUVEC inducida por la acidosis. Delinear v&iacute;as descendentes, demostramos que la inhibici&oacute;n de la Adenilato ciclasa por inhibidores, 2&#39;, 5&#39;-didesoxiadenosine (DDA) o SQ 22536, aten&uacute;a la adherencia HUVEC acidosis/GPR4-inducida. Consistentemente, el tratamiento con un campo anal&oacute;gico o un G(i) se&ntilde;alizaci&oacute;n inhibidor aumenta la adherencia HUVEC, sugiriendo un papel de la g / cAMP se&ntilde;alizaci&oacute;n en este proceso. Adem&aacute;s demostramos que el campamento efector downstream Epac es importante para la adhesi&oacute;n celular de la acidosis, GPR4-inducido. Por otra parte, la activaci&oacute;n de GPR4 por acidosis aumenta la expresi&oacute;n de mol&eacute;culas de adhesi&oacute;n vascular E-selectina, VCAM-1 y ICAM-1, que funcionalmente est&aacute;n implicadas en la adhesi&oacute;n HUVEC acidosis/GPR4-mediada. Del mismo modo, la acidosis hiperc&aacute;pnica tambi&eacute;n puede activar GPR4 para estimular la adherencia y la expresi&oacute;n de mol&eacute;cula de adherencia HUVEC. Estos resultados sugieren que la acidosis/GPR4 se&ntilde;alizaci&oacute;n regula la adherencia de la c&eacute;lula endotelial principalmente a trav&eacute;s de la v&iacute;a g/campamento/Epac y puede desempe&ntilde;ar un papel en la respuesta inflamatoria de las c&eacute;lulas endoteliales vasculares.

Activaci&oacute;n de GPR4 por acidosis aumenta la adherencia de la c&eacute;lula endotelial a trav&eacute;s de la v&iacute;a de campo/Epac.

Acidic tissue microenvironment commonly exists in inflammatory diseases, tumors, ischemic organs, sickle cell disease, and many other pathological conditions due to hypoxia, glycolytic cell metabolism and deficient blood perfusion. However, the molecular mechanisms by which cells sense and respond to the acidic microenvironment are not well understood. GPR4 is a proton-sensing receptor expressed in endothelial cells and other cell types. The receptor is fully activated by acidic extracellular pH but exhibits lesser activity at the physiological pH 7.4 and minimal activity at more alkaline pH. To delineate the function and signaling pathways of GPR4 activation by acidosis in endothelial cells, we compared the global gene expression of the acidosis response in primary human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) with varying level of GPR4. The results demonstrated that acidosis activation of GPR4 in HUVEC substantially increased the expression of a number of inflammatory genes such as chemokines, cytokines, adhesion molecules, NF-κB pathway genes, and prostaglandin-endoperoxidase synthase 2 (PTGS2 or COX-2) and stress response genes such as ATF3 and DDIT3 (CHOP). Similar GPR4-mediated acidosis induction of the inflammatory genes was also noted in other types of endothelial cells including human lung microvascular endothelial cells and pulmonary artery endothelial cells. Further analyses indicated that the NF-κB pathway was important for the acidosis/GPR4-induced inflammatory gene expression. Moreover, acidosis activation of GPR4 increased the adhesion of HUVEC to U937 monocytic cells under a flow condition. Importantly, treatment with a recently identified GPR4 antagonist significantly reduced the acidosis/GPR4-mediated endothelial cell inflammatory response. Taken together, these results show that activation of GPR4 by acidosis stimulates the expression of a wide range of inflammatory genes in endothelial cells. Such inflammatory response can be suppressed by GPR4 small molecule inhibitors and hold potential therapeutic value.

Acidosis activation of the proton-sensing GPR4 receptor stimulates vascular endothelial cell inflammatory responses revealed by transcriptome analysis.

Nancy Leffler

Division of Hematology/Oncology,
Department of Oncology,
Division of Hematology/Oncology, Department of Oncology

East Carolina University

In vitro Cell Migration and Invasion Assays

Nancy Leffler

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Division of Hematology/Oncology,Department of Oncology,Division of Hematology/Oncology, Department of Oncology

East Carolina University

In vitro Cell Migration and Invasion Assays

Division of Hematology/Oncology,
Department of Oncology,
Division of Hematology/Oncology, Department of Oncology