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Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells

The neural crest arises from the neuro-ectoderm during embryogenesis and persists only temporarily. Early experiments already proofed pluripotent ...

Bonn Medical School, Institute of Pathology

&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4F53;&#x5185;&#x7528;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x57FA;&#x56E0;&#x5F00;&#x5173;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x5F7B;&#x5E95;&#x6539;&#x53D8;&#x4E86;&#x73B0;&#x4EE3;&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x5730;&#x533A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7ED3;&#x5408;&#x4E24;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E; Cre/loxp &#x5E8F;&#x5217;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x91CD;&#x7EC4;&#x548C;&#x5D4C;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x914D;&#x4F53;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x751F;&#x6210;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4F7F;&#x5F97;&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x539F;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0; c-myc &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x4E3A;&#x5B9E;&#x73B0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x76EE;&#x7684;&#xFF0C;&#x4E09;&#x82EF;&#x6C27;&#x80FA;&#x8BF1;&#x5BFC; c-mycER(T) &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0; (mycER(T)) &#x63D2;&#x5165;&#x4E2D;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x8DC3;&#x7684;&#x7F57;&#x838E; 26 &#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6253;&#x9776;&#x3002;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684; ROSAMER &#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5728;&#x5E7F;&#x4E49;&#x7684; mycER(T) &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x524D;&#x9762;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x505C;&#x6B62;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x4E24;&#x4FA7;&#x662F;&#x7531; loxp &#x5E8F;&#x5217;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;ROSAMER &#x4E0E; Mox2 &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6742;&#x4EA4;&#x62AB;&#x9732; mycER(T) &#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x4E25;&#x5BC6;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x9664;&#x975E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x505C;&#x6B62;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x79FB;&#x9664;&#x4E86; cre &#x4ECB;&#x5BFC;&#x5207;&#x9664;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x90FD;&#x80FD;&#x8BC1;&#x660E; MycER(T) &#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4E09;&#x82EF;&#x6C27;&#x80FA;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BC1;&#x660E;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4E3B;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x6587;&#x5316;&#x4ECE; ROSAMER &#x5C0F;&#x9F20;&#x5EFA;&#x7ACB; 4-&#x6295;&#x5F71;-&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7EF4;&#x6301;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8FD9;&#x79CD;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FDD;&#x7559;&#x5176;&#x5206;&#x5316;&#x6F5C;&#x80FD;&#xFF0C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; NF 160&#xFF0C;4 &#x6295;&#x5F71;&#x9000;&#x9009;&#x540E;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x5236;&#x4F5C;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x4EF7;&#x503C;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5B9A;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD; c-myc &#x53D1;&#x80B2;&#x4E0E;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED3;&#x5408; Cre/loxp &#x5E8F;&#x5217;&#x91CD;&#x7EC4;&#x91CD;&#x7EC4;&#x548C;&#x4E09;&#x82EF;&#x6C27;&#x80FA;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x6D3B;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE; c-myc &#x539F;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

Development of inducible genetic switches for in vivo use with transgenic mice has revolutionized many areas in modern molecular biology. Combining two techniques, Cre/loxP-based genetic recombination and ligand-dependent activation of a chimeric protein, we generated transgenic mice which allow for the spatiotemporal control of expression and of activity of the proto-oncogene c-myc. To these ends, the gene encoding the tamoxifen-inducible c-mycER(T) fusion protein (mycER(T)) was inserted in the ubiquitously active ROSA 26 gene locus by gene targeting. In the resulting ROSAMER allele, generalized transcription of the mycER(T) gene is prevented by a preceding transcriptional stop sequence which is flanked by loxP sites. Crosses of ROSAMER transgenic mice with Mox2 cre transgenic mice revealed tight control of mycER(T) transcription in various tissues unless the transcriptional stop sequence was removed by cre-mediated excision. Furthermore, we were able to demonstrate tamoxifen-dependent activation of the MycER(T) protein in embryonic fibroblasts derived from such mice. As a proof of principle, we demonstrate that primary neural crest cultures established from ROSAMER mice maintain their proliferative capacity in a 4-OHT-dependent manner. Furthermore, we demonstrate that such neural crest cells retain their differentiation potential as shown by expression of NF 160, a marker of neuronal differentiation upon 4-OHT withdrawal. The transgenic mice produced may thus be valuable tools for studying the cell type-specific effects of c-myc activity in development and disease.

Cell type-specific conditional regulation of the c-myc proto-oncogene by combining Cre/loxP recombination and tamoxifen-mediated activation.

D&eacute;veloppement d&#39;inductibles interrupteurs g&eacute;n&eacute;tiques pour utilisation in vivo sur des souris transg&eacute;niques a r&eacute;volutionn&eacute; plusieurs domaines de la biologie mol&eacute;culaire moderne. Combinant les deux techniques, recombinaison Cre/loxP-bas&eacute; et ligand-d&eacute;pendants d&#39;activation d&#39;une prot&eacute;ine chim&eacute;rique, nous avons g&eacute;n&eacute;r&eacute; des souris transg&eacute;niques qui permettent le contr&ocirc;le spatio-temporelle d&#39;expression et de l&#39;activit&eacute; du proto-oncog&egrave;ne c-myc. &Agrave; ces fins, le g&egrave;ne codant pour la prot&eacute;ine de fusion c-mycER(T) inductible par le tamoxif&egrave;ne (mycER(T)) a &eacute;t&eacute; ins&eacute;r&eacute; dans le locus du g&egrave;ne 26 actif contiennent toutes des ROSA en ciblant les g&egrave;nes. Dans l&#39;all&egrave;le ROSAMER qui en r&eacute;sulte, g&eacute;n&eacute;ralis&eacute;e de transcription du g&egrave;ne mycER(T) est emp&ecirc;ch&eacute;e par une s&eacute;quence de stop transcriptionnelle pr&eacute;c&eacute;dent flanqu&eacute; de loxP sites. Croisements de souris transg&eacute;niques ROSAMER avec Mox2 cre des souris transg&eacute;niques ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; un contr&ocirc;le rigoureux de la transcription mycER(T) dans divers tissus &agrave; moins que la s&eacute;quence d&#39;arr&ecirc;t de la transcription a &eacute;t&eacute; supprim&eacute;e par l&#39;excision induite par la cre. En outre, nous avons pu d&eacute;montrer le tamoxif&egrave;ne d&eacute;pendant d&#39;activation de la prot&eacute;ine MycER(T) dans des fibroblastes embryonnaires de ces souris. Une preuve de principe, nous d&eacute;montrons que les cultures primaires de cr&ecirc;te neurale cr&eacute;&eacute;s des souris ROSAMER maintiennent leur capacit&eacute; prolif&eacute;rative en fonction de 4 OHT. De plus, nous d&eacute;montrons que ces cellules neurales de cr&ecirc;te conservent leur potentiel de diff&eacute;renciation, comme indiqu&eacute; par l&#39;expression de NF 160, un marqueur de diff&eacute;renciation neuronale apr&egrave;s le retrait de 4-OHT. Les souris transg&eacute;niques produites peuvent ainsi &ecirc;tre de pr&eacute;cieuses outils pour &eacute;tudier les effets sp&eacute;cifiques au type de cellule de l&#39;activit&eacute; de c-myc dans le d&eacute;veloppement et la maladie.

R&eacute;gulation sp&eacute;cifique au type cellulaire conditionnelle du proto-oncog&egrave;ne c-myc en combinant la recombinaison Cre/loxP et activation par le tamoxif&egrave;ne.

Zelltypspezifische bedingten Verordnung des c-myc Proto-Onkogen durch Kombinieren Cre / loxP-Rekombination und Tamoxifen-vermittelte Aktivierung.

Sviluppo di viscoelastico interruttori genetici per l&#39;uso in vivo con topi transgenici ha rivoluzionato molte aree della biologia molecolare moderna. Combinando le due tecniche di ricombinazione genetica basata su Cre/loxP e attivazione ligando-dipendente di una proteina chimerica, abbiamo generato topi transgenici che consentono il controllo spatiotemporal di espressione e di attivit&agrave; del proto-oncogene c-myc. A questi fini, il gene che codifica per la proteina di fusione c-mycER(T) tamoxifene-inducible (mycER(T)) &egrave; stato inserito nel locus di 26 gene ROSA ubiquitously attivo di gene targeting. Nell&#39;allele ROSAMER risultante, generalizzata trascrizione del gene della mycER(T) &egrave; impedito da una sequenza di transcriptional stop precedente fiancheggiata da siti loxP. Croci di topi transgenici ROSAMER con topi transgenici Mox2 cre rivelarono stretto controllo della trascrizione di mycER(T) in vari tessuti a meno che la sequenza di transcriptional stop &egrave; stato rimosso da escissione cre-mediata. Inoltre, siamo stati in grado di dimostrare il tamoxifene-dipendente dalla attivazione della proteina MycER(T) in fibroblasti embrionali derivate da tali topi. Come prova di principio, ci dimostrano che culture primarie cresta neurale stabilite da topi ROSAMER mantengano la loro capacit&agrave; proliferativa in modo 4-OHT-dipendente. Inoltre, noi dimostrare che tali cellule della cresta neurale conservano il loro potenziale di differenziazione come indicato dall&#39;espressione di NF 160, un marcatore di differenziazione neuronale al momento del ritiro 4-OHT. I topi transgenici prodotti possono essere cos&igrave; preziosi strumenti per studiare gli effetti specifici del tipo cella di c-myc attivit&agrave; in sviluppo e malattia.

Cella tipo specifico regolamento condizionale del proto-oncogene c-myc combinando Cre/loxP ricombinazione e attivazione mediata da tamoxifene.

&#x8A98;&#x5F15;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x73FE;&#x4EE3;&#x5206;&#x5B50;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5206;&#x91CE;&#x306B;&#x9769;&#x547D;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Cre/loxP &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30FB; &#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; c-myc &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x8A31;&#x53EF;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4E21;&#x7AEF;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30E2;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E; c-mycER(T) &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; (mycER(T)) &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x633F;&#x5165;&#x904D;&#x5728;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B6; 26 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5EA7;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306E; ROSAMER &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; mycER(T) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199; loxP &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4E21;&#x5074;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x9805;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x505C;&#x6B62;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9632;&#x304C;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8EE2;&#x5199;&#x505C;&#x6B62;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9; cre &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x5207;&#x9664;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x524A;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x9650;&#x308A; mycER(T) &#x8EE2;&#x5199;&#x8AF8;&#x81D3;&#x5668;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x306A;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x4EA4;&#x96D1; ROSAMER &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; Mox2 cre &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x304B;&#x3089;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; MycER(T) &#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x30BF;&#x30E2;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x539F;&#x5247;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; ROSAMER &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x78BA;&#x7ACB;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x6587;&#x5316;&#x306F; 4 OHT &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x5897;&#x6B96;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;NF 160&#x3001;&#x9000;&#x4F1A;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408; 4 OHT &#x795E;&#x7D4C;&#x5206;&#x5316;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3059;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FAE;&#x5206;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x6027;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x7523;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066; c-myc &#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x578B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Cre/loxP &#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3068;&#x30BF;&#x30E2;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x8A8D;&#x8A3C;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067; c-myc &#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3002;

&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD604;&#xB300; &#xBD84;&#xC790; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0; &#xD601;&#xBA85;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB450; &#xAE30;&#xC220;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; Cre/loxP &#xAE30;&#xBC18; &#xBC0F; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC885;&#xC18D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; chimeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xACB0;&#xD569; &#xC2DD; spatiotemporal &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xB610;&#xB294; proto-oncogene c myc&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB05D;, &#xC778;&#xCF54;&#xB529; tamoxifen&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; c-mycER(T) &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; (Mycer(t))&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3B8; &#xBA85;&#xB85C; &#xC0AC; 26 &#xC9C4; &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0; &#xC0BD;&#xC785; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; ROSAMER &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; mycER(T) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xD654; &#xB41C; &#xC804;&#xC0AC; loxP &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD615;&#xBC8C; &#xC55E; transcriptional &#xC911;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE08;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294;. ROSAMER Mox2 cre &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC950;&#xC640; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xC2ED;&#xC790;&#xAC00; transcriptional &#xC911;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; cre &#xC911;&#xC7AC; &#xC808;&#xB2E8; &#xD558; &#xC5EC; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xBA74; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; mycER(T) &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC19;&#xC740; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xBC30;&#xC544; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; MycER(T) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; tamoxifen &#xC885;&#xC18D; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC904; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6D0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC; ROSAMER &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xC815; &#xB41C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBB38;&#xD654; 4 OHT &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC99D;&#xC2DD; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC5EC;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; NF 160, 4 OHT &#xCCA0;&#xC218; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xAC10; &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xAC83; &#xCC98;&#xB7FC; &#xAC19;&#xC740; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC0B0; c myc &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC140; &#xC720;&#xD615;&#xBCC4; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cre/loxP &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBC0F; tamoxifen &#xC911;&#xC7AC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; c-myc proto-oncogene &#xC140; &#xC720;&#xD615;&#xBCC4; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xADDC;&#xC81C;.

Desarrollo de inducibles interruptores gen&eacute;ticos para uso in vivo con ratones transg&eacute;nicos ha revolucionado muchas &aacute;reas de la biolog&iacute;a molecular moderna. La combinaci&oacute;n de dos t&eacute;cnicas, basadas en Cre/loxP recombinaci&oacute;n gen&eacute;tica y dependiente de ligando la activaci&oacute;n de una prote&iacute;na quim&eacute;rica, hemos generado ratones transg&eacute;nicos que permiten el control espacio-temporal de expresi&oacute;n y de actividad de la proto-oncog&eacute;nicas c-myc. Para estos fines, el gen que codifica la prote&iacute;na de fusi&oacute;n c-mycER(T) tamoxifeno-inducible (mycER(T)) fue insertado en el locus de gene 26 ROSA ubicuo activo por gene targeting. En el alelo ROSAMER resultante, transcripci&oacute;n generalizada del gen mycER(T) es prevenido por una secuencia de parada transcripcional anterior que est&aacute; flanqueada por sitios loxP. Cruces de ratones transg&eacute;nicos ROSAMER con Mox2 cre ratones transg&eacute;nicos revelaron un control estricto de la transcripci&oacute;n de mycER(T) en varios tejidos a menos que la secuencia transcripcional stop fue quitada por la supresi&oacute;n de cre-mediada. Adem&aacute;s, hemos sido capaces de demostrar tamoxifen-dependiente de la activaci&oacute;n de la prote&iacute;na MycER(T) en los fibroblastos embrionarios derivados de esos ratones. Como una prueba del principio, demostramos que culturas primaria cresta neural establecidas de ratones ROSAMER mantienen su capacidad proliferativa de forma 4-HTO-dependiente. Adem&aacute;s, demostramos que tales c&eacute;lulas de cresta neural conservan su potencial de diferenciaci&oacute;n, como se muestra por la expresi&oacute;n de NF 160, un marcador de diferenciaci&oacute;n neuronal sobre el retiro de 4-HTO. Los ratones transg&eacute;nicos producidos as&iacute; pueden ser herramientas valiosas para el estudio de los efectos de c&eacute;lulas espec&iacute;ficas del tipo de actividad de c-myc en el desarrollo y la enfermedad.

Celular tipo-espec&iacute;fica regulaci&oacute;n condicional de proto-oncogene del c-myc combinando Cre/loxP recombinaci&oacute;n y activaci&oacute;n mediada por tamoxifeno.

Melanopsin &#x662F;&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6240;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x65F6;&#x949F;&#x5728;&#x89C6;&#x4EA4;&#x53C9;&#x4E0A;&#x6838; &#xFF08;SCN&#xFF09; &#x4E2D;&#x7684;&#x540C;&#x6B65;&#x7684;&#x5916;&#x6E90;&#x6027;&#x5149;&#x5468;&#x671F;&#x4E0E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684; photopigment&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x6CA1;&#x6709; melanopsin &#x7684;&#x4E09;&#x7EF4; (3D) &#x7ED3;&#x6784;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x662F;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x57FA;&#x4E8E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7F16;&#x7801;&#x533A;&#x57DF;&#x4E3A; melanopsin&#xFF0C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x9884;&#x6D4B;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6E90;&#x81EA;&#x5B64;&#x7ACB; mRNA &#x7684;&#x773C;&#x775B;&#x548C; Djungarian &#x4ED3;&#x9F20; (&#x9ED1;&#x7EBF;&#x6BDB;&#x8DB3;&#x9F20;&#xFF09;&#x3002;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x9F20;&#x548C;&#x5927;&#x9F20; (&#x6BCF;&#x4E2A; 89%) &#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B; (84%) melanopsin &#x5171;&#x4EAB;&#x6700;&#x5927;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x3002;&#x6839;&#x636E;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6BD4;&#x8F83;&#x725B;&#x7684;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x7684;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x662F;&#x7531;&#x4F7F;&#x7528;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x5EFA;&#x6A21;&#xFF0C;&#x540E;&#x6765;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x63D0;&#x70BC;&#x540E;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5EFA;&#x6A21;&#x4E09;&#x7EF4; melanopsin &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;Melanopsin &#x7531;&#x9AD8;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x4E03;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF;&#x548C;&#x591A;&#x4E2A;&#x5047;&#x5B9A;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7F51;&#x7AD9;&#x957F; cytoplasmatic &#x5C3E;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x5728;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x53D1;&#x8272;&#x56E2;&#x7684;&#x7F51;&#x7AD9;&#xFF0C;11-&#x72EC;&#x8054;&#x4F53;-&#x89C6;&#x7F51;&#x819C;&#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; 336 &#x4F4D;&#x7F6E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x78B1;&#x7684;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x3002;&#x5EFA;&#x6A21;&#x7ED3;&#x679C;&#x53EF;&#x80FD;&#x8868;&#x660E;&#x4E0D;&#x540C;&#x5F02;&#x6784;&#x76F8;&#x6BD4;&#x725B;&#x89C6;&#x7D2B;&#x7EA2;&#x8D28;&#x7684; melanopsin &#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x3002;

&#x9884;&#x6D4B;&#x7684; 3D &#x7ED3;&#x6784;&#x7684; melanopsin&#xFF0C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x751F;&#x7269;&#x949F;&#xFF0C;&#x4ECE; Djungarian &#x4ED3;&#x9F20; (&#x9ED1;&#x7EBF;&#x6BDB;&#x8DB3;&#x9F20;) &#x975E;&#x6746;&#x3001; &#x975E;&#x9525; photopigment&#x3002;

Melanopsin is the photopigment of the retinal ganglion cells, which are involved in the synchronization of the biological clock in the suprachiasmatic nucleus (SCN) of mammals with the exogenous photoperiod. So far, no information about the three-dimensional (3D) structure of melanopsin is available. Here we report the predicted structure based on the protein-coding region of the nucleotide sequence of the gene for melanopsin, originating from isolated mRNA from the eyes of Djungarian hamsters (Phodopus sungorus). The nucleotide sequence shares the largest homologies with melanopsin of mice and rats (each 89%) and humans (84%). Based on the amino-acid sequence, and in comparison with the known structure of bovine rhodopsin, the three-dimensional melanopsin protein structure was modeled by using automated homology modeling approaches that were subsequently refined. Melanopsin consists of highly conserved seven-transmembrane domains and a long cytoplasmatic tail with multiple putative phosphorylation sites. In the binding site of the chromophore, a 11-cis-retinal is likely to be bound to lysine at position 336 as Schiff's base. The modeling results may indicate different photoisomerization within the melanopsin molecule compared with bovine rhodopsin.

Predicted 3D-structure of melanopsin, the non-rod, non-cone photopigment of the mammalian circadian clock, from Djungarian hamsters (Phodopus sungorus).

Melanopsin est le photopigment des cellules ganglionnaires r&eacute;tiniennes, qui participent &agrave; la synchronisation de l&#39;horloge biologique dans le noyau suprachiasmatic (SCN) de mammif&egrave;res avec la photop&eacute;riode exog&egrave;ne. Jusqu&#39;&agrave; pr&eacute;sent, aucune information sur la structure de trois dimensions (3D) de melanopsin est disponible. Nous rapportons ici la structure pr&eacute;dite bas&eacute;e sur la r&eacute;gion codant pour des prot&eacute;ines de la s&eacute;quence nucl&eacute;otidique du g&egrave;ne pour melanopsin, originaire de l&#39;ARNm isol&eacute; aux yeux des hamsters de Djoungarie (Phodopus sungorus). La s&eacute;quence nucl&eacute;otidique partage les plus importantes homologies avec melanopsin des souris et des rats (89 %) et des humains (84 %). Bas&eacute; sur la s&eacute;quence d&#39;acides amin&eacute;s et en comparaison avec la structure connue de la rhodopsine bovine, la structure des prot&eacute;ines en trois dimensions melanopsin a &eacute;t&eacute; mod&eacute;lis&eacute;e &agrave; l&#39;aide d&#39;homologie automatis&eacute;e, mod&eacute;lisation des approches qui ont &eacute;t&eacute; am&eacute;lior&eacute;s par la suite. Melanopsin consistant en domaines sept domaines transmembranaires hautement conserv&eacute;s et une queue longue cytoplasmique avec plusieurs sites de phosphorylation putatif. Dans le site de liaison du chromophore, un 11-cis-r&eacute;tinien est susceptible d&#39;&ecirc;tre li&eacute; &agrave; la lysine au poste 336 comme base de Schiff. Les r&eacute;sultats de la mod&eacute;lisation peuvent indiquer la photoisom&eacute;risation diff&eacute;rente au sein de la mol&eacute;cule de melanopsin compar&eacute;e &agrave; la rhodopsine bovine.

3D-structure pr&eacute;dite de melanopsin, le photopigment non-rod, non-c&ocirc;ne de l&#39;horloge circadienne chez les mammif&egrave;res, des hamsters de Djoungarie (Phodopus sungorus).

Prognostizierte 3D-Struktur von Melanopsin, die nicht-Stab, nicht-Kegel Photopigment der circadianen Uhr von S&#xE4;ugetieren, von Dsungarischen Hamstern (Phodopus sungorus).

Melanopsina &egrave; il photopigment delle cellule gangliari della retina, che sono coinvolte nella sincronizzazione dell&#39;orologio biologico nel nucleo soprachiasmatico (SCN) dei mammiferi con il fotoperiodo esogeno. Finora, nessuna informazione circa la struttura tridimensionale (3D) di melanopsina &egrave; disponibile. Riportiamo la struttura prevista basata sulla regione di codificazione della proteina della sequenza nucleotidica del gene per la melanopsina, originario di mRNA isolato dagli occhi di Phodopus criceti (Phodopus sungorus). La sequenza nucleotidica condivide i pi&ugrave; grande omologie con melanopsina di topi e ratti (ogni 89%) e gli esseri umani (84%). La struttura della proteina melanopsina tridimensionale basato sulla sequenza di amminoacido e confronto con la struttura conosciuta della rodopsina bovina, &egrave; stata modellata utilizzando approcci che sono stati successivamente raffinati di modellazione automatizzato di omologia. Melanopsina &egrave; costituito da domini transmembrane sette altamente conservate e una coda lunga citoplasmatiche con pi&ugrave; siti di fosforilazione putativo. Nel sito di legame del cromoforo, un 11-cis-retinale rischia di essere associato a lisina in posizione 336 come base di Schiff. I risultati della modellazione possono indicare diverse Fotoisomerizzazione all&#39;interno della molecola di melanopsina rispetto ai bovino rodopsina.

Struttura 3D previsto di melanopsina, il photopigment non-rod, non cono dell&#39;orologio circadiano dei mammiferi, da Phodopus criceti (Phodopus sungorus).

&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; &#x30A8;&#x30F3;&#x30BB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30ED;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5916;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x65E5;&#x9577;&#x3068;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x8996;&#x4EA4;&#x53C9;&#x4E0A;&#x6838; (SCN) &#x306E;&#x540C;&#x671F;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7DB2;&#x819C;&#x795E;&#x7D4C;&#x7BC0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x3068;&#x3053;&#x308D;&#x3001;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E; 3 &#x6B21;&#x5143; (3 D) &#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30AC;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3; &#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; (&#x30C9;&#x30EF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30CF;&#x30E0; &#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#xFF09; &#x306E;&#x76EE;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F; mRNA &#x304B;&#x3089;&#x767A;&#x4FE1;&#x306E;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5869;&#x57FA;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x4E88;&#x6E2C;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3068;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8; &#xFF08;&#x5404; 89 &#xFF05;&#xFF09; &#x3068;&#x4EBA;&#x9593; &#xFF08;84 &#xFF05;&#xFF09; &#x306E;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x5171;&#x6709;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x30A6;&#x30B7;&#x306E;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x69CB;&#x9020;&#x81EA;&#x52D5;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x30E2;&#x30C7;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x6D17;&#x7DF4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7BC0;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 7 &#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x9577;&#x3044;&#x30A6;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B2;&#x30CA;&#x30FC;&#x5C3E;&#x8907;&#x6570;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x767A;&#x8272;&#x56E3;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;11 cis &#x30EC;&#x30C1;&#x30CA;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x4F4D;&#x7F6E; 336 &#x30B7;&#x30C3;&#x30D5;&#x306E;&#x5869;&#x57FA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30B7;&#x306E;&#x30ED;&#x30C9;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x5149;&#x7570;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

-&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x3001;&#x975E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3; &#x30A8;&#x30F3;&#x30BB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30ED;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3; &#x30B8;&#x30E3;&#x30F3;&#x30AC;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3; &#x30CF;&#x30E0;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; (&#x30C9;&#x30EF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30CF;&#x30E0; &#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#xFF09; &#x304B;&#x3089;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x6982;&#x65E5;&#x6642;&#x8A08;&#x306E;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30D7;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306E; 3 D &#x69CB;&#x9020;&#x3002;

Melanopsin exogenous photoperiod&#xC640; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xC758; suprachiasmatic &#xD575; (SCN)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC2DC;&#xACC4; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB418;&#xB294; &#xB9DD;&#xB9C9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC808; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; photopigment&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; melanopsin&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; (3D) &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC544;&#xBB34;&#xB7F0; &#xC815;&#xBCF4; &#xC81C;&#xACF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; melanopsin&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5FC;&#xAE30; &#xC21C;&#xC11C;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCF54;&#xB529; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xCE21; &#xB41C; &#xAD6C;&#xC870; Djungarian &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; (Phodopus sungorus)&#xC758; &#xB208;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; Mrna&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; melanopsin &#xC950;&#xC640; &#xC950; (&#xAC01; 89%)&#xACFC; &#xC778;&#xAC04; (84%)&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; homologies &#xACF5;&#xC720;. &#xC0B0; &#xC131; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC18C; rhodopsin&#xC758; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC870; &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C;, 3 &#xCC28;&#xC6D0; melanopsin &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xB41C; &#xD638;&#xBAB0;&#xB85C;&#xC9C0; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xC774;&#xD6C4;&#xC5D0; &#xC138;&#xB828; &#xB41C; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Melanopsin &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC874; 7 &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC0C1; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC640; &#xAE34; cytoplasmatic &#xAF2C;&#xB9AC;&#xB3C4; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xBC1C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; 11-cis-&#xB9DD;&#xB9C9; Schiff&#xC758; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; 336 &#xC704;&#xCE58;&#xC758; lysine &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xB192;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1; &#xACB0;&#xACFC; &#xC18C; rhodopsin&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; melanopsin &#xBD84;&#xC790; &#xB0B4;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; photoisomerization&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Melanopsin, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; circadian clock Djungarian &#xD584;&#xC2A4;&#xD130; (Phodopus sungorus)&#xC758; &#xBE44; &#xB300;, &#xBE44; &#xCF58; photopigment&#xC758; &#xC608;&#xCE21; &#xB41C; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xAD6C;&#xC870;.

Melanopsina es el fotopigmento de las c&eacute;lulas ganglionares de la retina, que participan en la sincronizaci&oacute;n del reloj biol&oacute;gico en el n&uacute;cleo supraquiasm&aacute;tico (SCN) de mam&iacute;feros con el fotoperiodo ex&oacute;geno. Hasta ahora, ninguna informaci&oacute;n sobre la estructura tridimensional (3D) de la melanopsina est&aacute; disponible. Aqu&iacute; divulgamos la estructura prevista basada en la regi&oacute;n codificante de la prote&iacute;na de la secuencia de nucle&oacute;tidos del gen de la melanopsina, originarios de mRNA aislado de los ojos de Djungarian h&aacute;msters (Phodopus sungorus). La secuencia de nucle&oacute;tido comparte las homolog&iacute;as m&aacute;s grandes con la melanopsina de ratones y ratas (cada 89%) y los seres humanos (84%). Basado en la secuencia de amino&aacute;cidos y en comparaci&oacute;n con la estructura conocida de la rodopsina bovina, la estructura de la prote&iacute;na de la melanopsina tridimensional fue modelada por uso automatizado homolog&iacute;a modelado enfoques que fueron posteriormente refinados. Melanopsina consiste en dominios transmembrana de siete altamente conservados y una cola larga citoplasm&aacute;tica con m&uacute;ltiples sitios de fosforilaci&oacute;n putativos. En el sitio de uni&oacute;n del crom&oacute;foro, un 11-cis-retinal es probable que la obligaci&oacute;n de lisina en la posici&oacute;n 336 como base de Schiff. Los resultados del modelado pueden indicar photoisomerization diferente dentro de la mol&eacute;cula melanopsina en comparaci&oacute;n con los bovina rodopsina.

3D-estructura prevista de la melanopsina, el fotopigmento barra-no, no-cono del reloj circadiano mam&iacute;fero, de Djungarian h&aacute;msters (Phodopus sungorus).

&#x5C0F;&#x9F20;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;NCSCs&#xFF09; &#x662F;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7684;&#x6D41;&#x52A8;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x671F;&#x95F4;&#x7531;&#x4E8E; neurulation &#x5728;&#x5FC3;&#x5C16;&#x795E;&#x7ECF;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x80DA;&#x80CE;&#x5F62;&#x6210;&#x540E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8FC5;&#x901F;&#x5206;&#x6563;&#x5404;&#x5730;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;&#x6CBF;&#x7279;&#x5B9A;&#x9014;&#x5F84;&#x8FC1;&#x79FB;&#x5E76;&#x5206;&#x5316;&#x6210;&#x591A;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4F53;&#x5916;&#x8111;&#x795E;&#x7ECF;&#x4F1A;&#x4E22;&#x5931;&#x8FC5;&#x901F;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x5F88;&#x96BE;&#x5B66;&#x4E60;&#x5206;&#x5316;&#x6F5C;&#x80FD;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x51B3;&#x5B9A;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C0F;&#x9F20;&#x884C;&#xFF0C;&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x8F6C;&#x53D8; c-myc &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C; (JoMa1)&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x975E;&#x516C;&#x52A1;&#x5458;&#x5408;&#x7EA6;&#x96C7;&#x5458;&#x6807;&#x8BB0;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4F9B;&#x517B;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;JoMa1 &#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x975E;&#x516C;&#x52A1;&#x5458;&#x5408;&#x7EA6;&#x96C7;&#x5458;&#x6807;&#x5FD7;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6307;&#x793A;&#x8981;&#x5206;&#x5316;&#x4E3A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x3001; &#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x9ED1;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x548C;&#x8F6F;&#x9AA8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4E00;&#x884C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x65E0;&#x6027;&#x7E41;&#x6B96;&#x6765;&#x81EA; JoMa1 &#x6587;&#x5316;&#x3001; &#x79F0;&#x4E3A; JoMa1.3 &#x663E;&#x793A;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x66F4;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x5730;&#x7814;&#x7A76;&#x4E86;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x56E0;&#x6B64;&#x8868;&#x793A;&#x975E;&#x516C;&#x52A1;&#x5458;&#x5408;&#x7EA6;&#x96C7;&#x5458;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x53CA;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6709;&#x529B;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#xFF0C;&#x5F53;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x5F97;&#x5230;&#x3001; &#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x65E0;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E0D;&#x517C;&#x5BB9;&#x8702;&#x7A9D;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5355;&#x5143;&#x683C; c-MycER(T) &#x706D;&#x6D3B;&#x540E;&#x91CD;&#x65B0;&#x83B7;&#x5F97;&#x5176;&#x5206;&#x5316;&#x6F5C;&#x80FD;&#x3002;&#x5728;&#x6458;&#x8981;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5141;&#x8BB8;&#x751F;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5173;&#x4E8E;&#x975E;&#x516C;&#x52A1;&#x5458;&#x5408;&#x7EA6;&#x96C7;&#x5458;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5E94;&#x8BE5;&#x80FD;&#x591F;&#x4ECE;&#x7A7F;&#x8D8A;&#x7A9D;&#x85CF;&#x5F71;&#x54CD;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x4F7F;&#x63A7;&#x5236;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x63A7;&#x673A;&#x5236;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20; c-MycER(T) &#x5C0F;&#x9F20;&#x83B7;&#x5F97;&#x975E;&#x516C;&#x52A1;&#x5458;&#x5408;&#x7EA6;&#x96C7;&#x5458;&#x7684;&#x884C;&#x3002;

&#x5EFA;&#x7ACB;&#x548C;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x6761;&#x4EF6;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x3002;

Murine neural crest stem cells (NCSCs) are a multipotent transient population of stem cells. After being formed during early embryogenesis as a consequence of neurulation at the apical neural fold, the cells rapidly disperse throughout the embryo, migrating along specific pathways and differentiating into a wide variety of cell types. In vitro the multipotency is lost rapidly, making it difficult to study differentiation potential as well as cell fate decisions. Using a transgenic mouse line, allowing for spatio-temporal control of the transforming c-myc oncogene, we derived a cell line (JoMa1), which expressed NCSC markers in a transgene-activity dependent manner. JoMa1 cells express early NCSC markers and can be instructed to differentiate into neurons, glia, smooth muscle cells, melanocytes, and also chondrocytes. A cell-line, clonally derived from JoMa1 culture, termed JoMa1.3 showed identical behavior and was studied in more detail. This system therefore represents a powerful tool to study NCSC biology and signaling pathways. We observed that when proliferative and differentiation stimuli were given, enhanced cell death could be detected, suggesting that the two signals are incompatible in the cellular context. However, the cells regain their differentiation potential after inactivation of c-MycER(T). In summary, we have established a system, which allows for the biochemical analysis of the molecular pathways governing NCSC biology. In addition, we should be able to obtain NCSC lines from crossing the c-MycER(T) mice with mice harboring mutations affecting neural crest development enabling further insight into genetic pathways controlling neural crest differentiation.

Establishment and controlled differentiation of neural crest stem cell lines using conditional transgenesis.

Les cellules souches neurales de cr&ecirc;te murine (SNCLC) sont une population nomade multipotente de cellules souches. Apr&egrave;s avoir &eacute;t&eacute; form&eacute; au cours de l&#39;embryogen&egrave;se pr&eacute;coce par suite de la neurulation au niveau du pli apicale de neurones, les cellules se dispersent rapidement tout au long de l&#39;embryon, migrant le long de voies sp&eacute;cifiques et de diff&eacute;rencier dans une grande vari&eacute;t&eacute; de types de cellules. In vitro la multipotentialit&eacute; est perdue rapidement, rendant difficile d&#39;&eacute;tudier le potentielle de diff&eacute;renciation ainsi que les d&eacute;cisions de destin cellulaire. &Agrave; l&#39;aide d&#39;une lign&eacute;e de souris transg&eacute;niques, permettant une commande spatio-temporelle de la transformation oncog&egrave;ne c-myc, que nous provenant d&#39;une lign&eacute;e cellulaire (JoMa1), qui a exprim&eacute; les marqueurs NCSC d&#39;une mani&egrave;re d&eacute;pendante du transg&egrave;ne-activit&eacute;. JoMa1 cellules expriment des marqueurs pr&eacute;coces de NCSC et peut &ecirc;tre charg&eacute; de se diff&eacute;rencier en neurones, cellules gliales, cellules musculaires lisses, m&eacute;lanocytes et aussi chondrocytes. Par clonage, une lign&eacute;e cellulaire, d&eacute;riv&eacute;e de la culture JoMa1, appel&eacute; JoMa1.3 montr&eacute; un comportement identique et a &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute;e plus en d&eacute;tail. Ce syst&egrave;me repr&eacute;sente donc un outil puissant pour &eacute;tudier la biologie NCSC et voies de signalisation. Nous avons constat&eacute; que lorsque prolif&eacute;rative et re&ccedil;urent des stimuli de diff&eacute;renciation, mort cellulaire accrue pourrait &ecirc;tre d&eacute;tect&eacute;e, sugg&eacute;rant que les deux signaux sont incompatibles dans le contexte cellulaire. Cependant, les cellules de retrouvent leur potentielle de diff&eacute;renciation apr&egrave;s inactivation des c-MycER(T). En r&eacute;sum&eacute;, nous avons &eacute;tabli un syst&egrave;me qui permet l&#39;analyse biochimique des voies mol&eacute;culaires r&eacute;gissant la biologie NCSC. En outre, nous devrions pouvoir obtenir des lignes NCSC de traverser les souris c-MycER(T) avec souris associ&eacute;es des mutations affectant le d&eacute;veloppement de cr&ecirc;te neurale permettant encore aper&ccedil;u de voies g&eacute;n&eacute;tiques contr&ocirc;lant la diff&eacute;renciation de la cr&ecirc;te neurale.

Mise en place et contr&ocirc;l&eacute;e la diff&eacute;renciation des lign&eacute;es de cellules souches neurales de cr&ecirc;te &agrave; l&#39;aide de transg&eacute;n&egrave;se conditionnelle.

Murine Neuralleiste Stammzellen (NCSCs) sind fl&uuml;chtige Einwohner multipotenten Stammzellen. Nach w&auml;hrend der fr&uuml;hen Embryogenese infolge Neuralplatte an der apikalen neuralen Falten gebildet, zerstreuen die Zellen schnell w&auml;hrend der Embryo, auf bestimmten wegen migrieren und in einer Vielzahl von Zelltypen differenzieren. In-vitro ist die Multipotenz verloren rasch, es erschwert, um m&ouml;gliche Differenzierung sowie Zelle Schicksal Entscheidungen zu studieren. Mit Hilfe einer transgenen Maus-Linie, die r&auml;umlich-zeitliche Steuerung der transformieren-c-Myc-Onkogen, zulassend, wir eine Zelllinie (JoMa1), abgeleitet ausgedr&uuml;ckt, das NCSC Marker in gewissem Sinne Transgene-Aktivit&auml;t abh&auml;ngig. JoMa1 Zellen schnelles fr&uuml;hen NCSC-Marker und angewiesen werden, dass in Neuronen, Glia, glatten Muskelzellen, Melanozyten und auch Chondrozyten differenzieren. Eine Zelllinie klonal abgeleitet JoMa1 Kultur, genannt JoMa1.3 zeigte identisches Verhalten und wurde genauer untersucht. Dieses System stellt somit ein leistungsf&auml;higes Tool zum NCSC Biologie und Signalisierung Wege zu studieren. Wir beobachten, dass, wenn proliferative und Differenzierung Reize erhielten, verbesserte Zelltod konnte erkannt werden, was darauf hindeutet, dass die beiden Signale im Zusammenhang mit zellul&auml;ren inkompatibel sind. Die Zellen zur&uuml;ckzugewinnen jedoch ihre m&ouml;gliche Differenzierung nach Inaktivierung von c-MycER(T). Zusammenfassend l&auml;sst sich sagen haben wir ein System etabliert, das f&uuml;r die biochemische Analyse der EZB NCSC Biologie molekularen Bahnen erlaubt. Dar&uuml;ber hinaus sollten wir NCSC Linien &uuml;berqueren die c-MycER(T) M&auml;use mit M&auml;usen beherbergen Mutationen Neuralleiste Entwicklung erm&ouml;glicht weitere Einblicke in genetischen Wege Steuern der Neuralleiste Differenzierung erhalten k&ouml;nnen.

Einrichtung und kontrollierte Differenzierung der Neuralleiste Stammzelllinien mit bedingten Transgenese.

Cellule staminali murine cresta neurale (NCSCs) sono una popolazione multipotenti transitoria delle cellule staminali. Dopo essere formata durante l&#39;embriogenesi precoce come conseguenza di neurulazione presso la piega neurale apicale, le cellule si disperdono rapidamente in tutto l&#39;embrione, la migrazione lungo percorsi specifici e differenziare in un&#39;ampia variet&agrave; di tipi di cellule. In vitro la multipotency &egrave; perso rapidamente, rendendo difficile studiare il potenziale di differenziazione, nonch&eacute; le decisioni di destino delle cellule. Utilizzando una linea di mouse transgenici, permettendo controllo spazio-temporale dell&#39;oncogene c-myc trasformante, che noi derivata una linea cellulare (JoMa1), che esprime marcatori NCSC in maniera dipendente transgene-attivit&agrave;. JoMa1 cellule esprimono marker NCSC precoce e pu&ograve; essere istruito a differenziarsi in neuroni, glia, cellule muscolari lisce, melanociti e anche nei condrociti. Una linea cellulare, clonandosi derivato dalla cultura JoMa1, chiamato JoMa1.3 ha mostrato il comportamento identico ed &egrave; stato studiato in dettaglio. Questo sistema rappresenta quindi un potente strumento per studiare biologia NCSC e vie di segnalazione. Abbiamo osservato che quando proliferativa e stimoli di differenziazione &egrave; sono data, morte cellulare avanzata potrebbe essere rilevato, suggerendo che i due segnali sono incompatibili nell&#39;ambito cellulare. Tuttavia, le cellule riprendere il loro potenziale di differenziazione dopo inattivazione di c-MycER(T). In sintesi, abbiamo creato un sistema che permette l&#39;analisi biochimica delle vie molecolari che regolano la biologia NCSC. Inoltre, dovremmo essere in grado di ottenere linee NCSC dall&#39;incrocio topi c-MycER(T) con topi harboring le mutazioni che interessano lo sviluppo della cresta neurale consentendo ulteriormente approfondita della genetiche percorsi controllando cresta neurale differenziazione.

Istituzione e controllata differenziazione delle linee di cellule staminali della cresta neurale utilizzando transgenesi condizionale.

&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;NCSCs&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x904E;&#x6E21;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x9802;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E9;&#x30EB;&#x6298;&#x308A;&#x5F62;&#x3065;&#x304F;&#x308A;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x521D;&#x671F;&#x80DA;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x79FB;&#x884C;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3044;&#x308D;&#x3044;&#x308D;&#x306A;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5206;&#x5316;&#x304C;&#x80DA;&#x5168;&#x4F53;&#x5206;&#x6563;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vitro &#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x7387;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x547D;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x56F0;&#x96E3;&#x5931;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x7D30;&#x80DE;&#x682A; (JoMa1)&#x3001;&#x6D3E;&#x751F;&#x3092;&#x5909;&#x9769;&#x306E; c-myc &#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6642;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; NCSC &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC; transgene &#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x3002;JoMa1 &#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x73FE;&#x65E9;&#x671F;&#x306E; NCSC &#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30A2;&#x7D30;&#x80DE;, &#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;, &#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3082;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;clonally JoMa1 &#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E3;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3001;&#x540C;&#x4E00;&#x884C;&#x52D5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F; JoMa1.3 &#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066; NCSC &#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3068;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x5897;&#x6B96;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x5206;&#x5316;&#x523A;&#x6FC0;&#x304C;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306B;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A; c-MycER(T) &#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x5F8C;&#x3092;&#x53D6;&#x308A;&#x623B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8981;&#x7D04;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x79C1;&#x9054;&#x306F; NCSC &#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x89E3;&#x6790;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x9802;&#x4E0A;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x9802;&#x4E0A;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5909;&#x7570;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x6301;&#x3064; c-MycER(T) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x4EA4;&#x5DEE;&#x70B9;&#x304B;&#x3089; NCSC &#x306E;&#x884C;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8A2D;&#x7ACB;&#x3068;&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5C0E;&#x5165;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Murine &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (NCSCs)&#xB294; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; multipotent &#xACFC;&#xB3C4; &#xC778;&#xAD6C;. &#xD600;&#xB05D; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC30;&#xC5D0;&#xC11C; neurulation&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; &#xCD08;&#xAE30; embryogenesis &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; &#xD615;&#xC131; &#xB418; &#xACE0;, &#xD6C4; &#xC140;&#xC744; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xD2B9;&#xC815; &#xACBD;&#xB85C; &#xB530;&#xB77C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC885;&#xB958;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xBD84;&#xD654; &#xBC30;&#xC544;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBD84;&#xC0B0;. &#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; multipotency &#xC190;&#xC2E4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C;, &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xD654; &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4;. NCSC &#xB9C8;&#xCEE4; transgene &#xD65C;&#xB3D9; &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xBCC0;&#xD615; c myc oncogene spatio &#xC2DC;&#xAC04; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC140; &#xB77C;&#xC778; (JoMa1), &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294;. JoMa1 &#xC140; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xCD08;&#xAE30; NCSC &#xB9C8;&#xCEE4; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xACBD;, &#xBA85;&#xACFC;, &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC;, melanocytes, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB610;&#xD55C; chondrocytes&#xB85C; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC140; &#xB77C;&#xC778; clonally JoMa1 &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C;, JoMa1.3 &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC; &#xB418; &#xB098; &#xACE0; &#xB354; &#xC790;&#xC138;&#xD558;&#xAC8C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; NCSC &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558; &#xACE0; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xC790;&#xADF9;&#xC744; &#xBD80;&#xC5EC; &#xD588;&#xB2E4;, &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xC218; &#xAC10;&#xC9C0;, 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9E5;&#xB77D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD638;&#xD658; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC81C;&#xC548;. &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xC140; C-mycer(t)&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD6C4; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xB97C; &#xD68C;&#xBCF5;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD1B5;&#xCE58; NCSC &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xBD84;&#xC790; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC124;&#xCE58; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC950; &#xB354; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBD84;&#xD654; &#xC870;&#xC808; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xACBD;&#xB85C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC740;&#xB2C9; &#xB41C; c-MycER(T) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAC74;&#xB108;&#xC5D0;&#xC11C; NCSC &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC5B4;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC124;&#xB9BD; &#xBC0F; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; transgenesis&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB41C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;.

C&eacute;lulas murinas cresta neural (NCSCs) son una poblaci&oacute;n transitoria multipotent de c&eacute;lulas madre. Despu&eacute;s de formarse durante la embriog&eacute;nesis temprana como consecuencia de la neurulaci&oacute;n en el pliegue neural apical, las c&eacute;lulas se dispersan r&aacute;pidamente a lo largo del embri&oacute;n, migrar a lo largo de v&iacute;as espec&iacute;ficas y diferenciar a una gran variedad de tipos de c&eacute;lulas. In vitro la multipotencia se pierde r&aacute;pidamente, lo que hace dif&iacute;cil estudiar el potencial de diferenciaci&oacute;n as&iacute; como decisiones de destino celular. Utilizando un cable de rat&oacute;n transg&eacute;nico, lo que permite control espacio-temporal del oncog&eacute;n c-myc transformadora, que derivamos una l&iacute;nea celular (JoMa1), que expresan marcadores NCSC en forma dependiente del transgen-actividad. JoMa1 c&eacute;lulas expresan marcadores tempranos del NCSC y puede indicarse para diferenciarse en neuronas, gl&iacute;a, las c&eacute;lulas musculares lisas, melanocitos y tambi&eacute;n los condrocitos. Una l&iacute;nea celular, clonalmente derivado de la cultura JoMa1, denominado JoMa1.3 mostraron comportamiento id&eacute;ntico y se estudi&oacute; m&aacute;s detalladamente. Por lo tanto, este sistema representa una poderosa herramienta para estudiar la biolog&iacute;a NCSC y v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n. Observamos cuando proliferativa y recibieron est&iacute;mulos de diferenciaci&oacute;n, se pudo detectar muerte celular mejorada, lo que sugiere que las dos se&ntilde;ales son incompatibles en el contexto celular. Sin embargo, las c&eacute;lulas recuperen su potencial de diferenciaci&oacute;n despu&eacute;s de la inactivaci&oacute;n de c-MycER(T). En Resumen, hemos establecido un sistema que permite el an&aacute;lisis bioqu&iacute;mico de las v&iacute;as moleculares que regulan la biolog&iacute;a NCSC. Adem&aacute;s, nosotros deber&iacute;amos ser capaces de obtener l&iacute;neas NCSC crucen los ratones c-MycER(T) con ratones que las mutaciones que afectan el desarrollo de la cresta neural permitiendo mayor penetraci&oacute;n en v&iacute;as gen&eacute;ticas control de diferenciaci&oacute;n de la cresta neural.

Establecimiento y diferenciaci&oacute;n controlada de l&iacute;neas de c&eacute;lulas madre de la cresta neural mediante transg&eacute;nesis condicional.

RNA &#x8868;&#x8FBE;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A; (&#x4E0A;&#x5E1D;) &#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x9F20;&#x6807; (mES) ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x89D2;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4E1D;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; Rna &#x8868;&#x8FBE;&#x5404;&#x4E0D;&#x76F8;&#x540C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5728;&#x79FB;&#x52A8;&#x7535;&#x8BDD;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6C34;&#x5E73;&#x8BC1;&#x5B9E;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x53CD;&#x6620;&#x6765;&#x81EA;&#x9F20;&#x6807;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x56CA;&#x80DA;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#x7684;&#x6839;&#x672C;&#x533A;&#x522B;&#x3002;&#x5C0F;&#x9F20; ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7B80;&#x5355;&#x4E0A;&#x76AE;&#x89D2;&#x86CB;&#x767D; K8&#x3001; K18 K19 &#x5FEB;&#x9012;&#x5F88;&#x4F4E;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#x4F4F;&#x6237;&#x5F00;&#x652F;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x8C03;&#x67E5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4E1D;&#x86CB;&#x767D; RNAs &#x7684;&#x9002;&#x5EA6;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x5982;&#x505A;&#x9F20;&#x6807;&#x9F20;&#x6807; epiblast &#x6E90;&#x6027;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;K8 &#x548C; K18 RNAs &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x662F;&#x4E0E; c &#x541B; RNA &#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x52A0;&#x5728;&#x8001;&#x9F20;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B; ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x76F8;&#x5173;&#x7684; K8 &#x548C; K18 &#x8868;&#x8FBE;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E0E;&#x589E;&#x52A0;&#x7684; Snai2 &#x8868;&#x8FBE;&#x76F8;&#x5173; &#xFF08;&#x86DE;&#x8753;&#xFF09; &#x8F6C;&#x5F55;&#x6291;&#x5236;&#x548C;&#x4E0D;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x541B;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x589E;&#x52A0; K7 &#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x589E;&#x52A0; CDX2 &#x76F8;&#x5173;&#x548C;&#x51CF;&#x5C11; Oct4 RNA &#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x6ECB;&#x517B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x4F4F;&#x6237;&#x5F00;&#x652F;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x8C03;&#x67E5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x6709;&#x5173;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x652F;&#x6301;&#x8FD9;&#x6837;&#x7684;&#x89C2;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4F4F;&#x6237;&#x5F00;&#x652F;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x8C03;&#x67E5;&#x5355;&#x5143;&#x662F;&#x66F4;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x9F20;&#x6807; epiblast &#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD4;&#x9F20;&#x6807; ES &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7684;&#x4F4F;&#x6237;&#x5F00;&#x652F;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x8C03;&#x67E5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6027;&#x8D28;&#x4E0E;&#x662F;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x3002;&#x4F4F;&#x6237;&#x5F00;&#x652F;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x8C03;&#x67E5;&#x7EC6;&#x80DE;&#x89D2;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4E1D;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EF;&#x8C03;&#x8282;&#x5BF9;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x53D7;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x548C;&#x5E94;&#x529B;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x3002;

&#x5BF9;&#x6BD4;&#x5728;&#x8001;&#x9F20;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x89D2;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

RNA expression data reveals that human embryonic stem (hES) cells differ from mouse ES (mES) cells in the expression of RNAs for keratin intermediate filament proteins. These differences were confirmed at the cellular and protein level and may reflect a fundamental difference in the epithelial nature of embryonic stem cells derived from mouse and human blastocysts. Mouse ES cells express very low levels of the simple epithelial keratins K8, K18 and K19. By contrast hES cells express moderate levels of the RNAs for these intermediate filament proteins as do mouse stem cells derived from the mouse epiblast. Expression of K8 and K18 RNAs are correlated with increased c-Jun RNA expression in both mouse and human ES cell cultures. However, decreasing K8 and K18 expression associated with differentiation to neuronal progenitor cells is correlated with increasing expression of the Snai2 (Slug) transcriptional repression and not decreased Jun expression. Increasing K7 expression is correlated with increased CDX2 and decreased Oct4 RNA expression associated with the formation of trophoblast derivatives by hES cells. Our study supports the view that hES cells are more similar to mouse epiblast cells than mouse ES cells and is consistent with the epithelial nature of hES cells. Keratin intermediate filament expression in hES cells may modulate sensitivity to death receptor mediated apoptosis and stress.

Contrasting expression of keratins in mouse and human embryonic stem cells.

Donn&eacute;es d&#39;expression ARN r&eacute;v&egrave;lent que les cellules souches embryonnaires humaines (hES) diff&egrave;rent des cellules de souris ES (mES) dans l&#39;expression de l&#39;ARN pour les prot&eacute;ines de filaments interm&eacute;diaires de k&eacute;ratine. Ces diff&eacute;rences ont &eacute;t&eacute; confirm&eacute;s au niveau cellulaire et de la prot&eacute;ine et peuvent refl&eacute;ter une diff&eacute;rence fondamentale entre la nature &eacute;pith&eacute;liale de cellules souches embryonnaires, provenant de souris et des blastocystes humains. Souris ES cellules expriment tr&egrave;s faibles niveaux des simples k&eacute;ratines &eacute;pith&eacute;liales K8, K18 et K19. En revanche, CSEh exprime des niveaux mod&eacute;r&eacute;s de l&#39;ARN pour ces prot&eacute;ines filament interm&eacute;diaire comme souris des cellules souches d&eacute;riv&eacute;es de l&#39;&eacute;piblaste de la souris. Expression de K8 et K18 RNAs sont corr&eacute;l&eacute;s avec l&#39;expression accrue de RNA c-Jun dans les souris et les cultures de cellules ES humaines. Cependant, diminuant K8 et K18 expression associ&eacute;e &agrave; la diff&eacute;renciation de cellules souches neuronales est corr&eacute;l&eacute;e avec l&#39;augmentation de l&#39;expression de la Snai2 r&eacute;pression transcriptionnelle (Slug) et pas de diminution de l&#39;expression Jun. Augmente l&#39;expression de la K7 est en corr&eacute;lation avec une augmentation CDX2 et a diminu&eacute; l&#39;expression Oct4 ARN associ&eacute;e &agrave; la formation de d&eacute;riv&eacute;s de trophoblaste de CSEh. Notre &eacute;tude confirme que les CSEh ressemblent davantage &agrave; des cellules de souris &eacute;piblaste que souris ES cellules et est compatible avec la nature &eacute;pith&eacute;liale de CSEh. Expression de filaments interm&eacute;diaires de k&eacute;ratine dans les cellules hES peut moduler la sensibilit&eacute; &agrave; l&#39;apoptose m&eacute;di&eacute;e par le r&eacute;cepteur de mort et le stress.

Expression contrast&eacute;e des k&eacute;ratines dans les souris et les cellules souches embryonnaires humaines.

&#x4E2A;&#x522B;&#x4EBA;&#x4E91;&#x4EA6;&#x4E91;&#x7684;&#x7EAF;&#x6837;&#x54C1;&#xFF1A; &#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x573A;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7ACB;&#x4F53;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;

Pure samples of individual conformers: the separation of stereoisomers of complex molecules using electric fields.

&Eacute;chantillons purs de conform&egrave;res individuels : la s&eacute;paration des st&eacute;r&eacute;oisom&egrave;res de mol&eacute;cules complexes &agrave; l&#39;aide de champs &eacute;lectriques.

Reine Proben der einzelnen Konformere: die Trennung der Stereoisomere komplexer Molek&uuml;le, die mit elektrischen Feldern.

Campioni puri di singoli conformeri: la separazione di stereoisomeri di molecole complesse utilizzando campi elettrici.

&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x306E;&#x7D14;&#x7C8B;&#x306A;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;: &#x96FB;&#x5834;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x7570;&#x6027;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3002;

&#xAC1C;&#xBCC4; conformers&#xC758; &#xC21C;&#xC218; &#xC0D8;&#xD50C;: stereoisomers &#xC804;&#xAE30; &#xD544;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;.

Muestras puras de conformadores individuales: la separaci&oacute;n de estereois&oacute;meros de mol&eacute;culas complejas usando campos el&eacute;ctricos.

&#x4EA7;&#x5987;&#x80DA;&#x80CE;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x62C9;&#x94FE;&#x6FC0;&#x9176; (MELK) &#x8868;&#x793A;&#x51E0;&#x4E2A;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x3001; &#x5728;&#x6210;&#x4EBA;&#x80DA;&#x82BD;&#x884C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x6210;&#x4EBA;&#x795E;&#x7ECF;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;MELK &#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x88AB;&#x9AD8;&#x67B6;&#x5728;&#x4FB5;&#x88AD;&#x6027;&#x672A;&#x5206;&#x5316;&#x80BF;&#x7624;&#xFF0C;&#x5173;&#x8054;&#x4E2D;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x75C5;&#x4EBA;&#x9884;&#x540E;&#x8F83;&#x5DEE;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8C03;&#x67E5; MELK &#x5728;&#x4E73;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; MELK &#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x8BB0;&#x8005;&#x9F20;&#x6807;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x51C6;&#x5206;&#x79BB;&#x57FA;&#x4E8E; GFP &#x8367;&#x5149; MELK &#x8868;&#x8FBE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x4E73;&#x817A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684; MELK &#x4E86;&#x4E30;&#x5BCC;&#x8868;&#x793A;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x4E73;&#x817A;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3002;MELK &#x4ECE;&#x516C;&#x4EA4; Wnt1 MELK &#x7EFF;&#x8272; bitransgenic &#x5C0F;&#x9F20;&#x4E73;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x4E2D;&#x7684;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x5BFC;&#x81F4;&#x91CD;&#x5927;&#x6D53;&#x7F29; tumorsphere &#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x5F00;&#x59CB;&#x690D;&#x5165;&#x81EA;&#x4F53;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E73;&#x817A;&#x8102;&#x80AA;&#x57AB;&#x540E;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A; MELK &#x7684; shRNA &#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F20;&#x9012;&#x548C;&#x9650;&#x5236;&#x7A00;&#x91CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E; MELK &#x51FD;&#x6570;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x4E73;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x786E;&#x5B9A; MELK &#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x80BF;&#x7624;&#x542F;&#x52A8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

&#x4EA7;&#x5987;&#x80DA;&#x80CE;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x62C9;&#x94FE;&#x6FC0;&#x9176;&#x589E;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x5728;&#x4E73;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x542F;&#x52A8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5185;&#x6240;&#x9700;&#x3002;

Maternal embryonic leucine zipper kinase (MELK) is expressed in several developing tissues, in the adult germ line, and in adult neural progenitors. MELK expression is elevated in aggressive undifferentiated tumors, correlating with poor patient outcome in human breast cancer. To investigate the role of MELK in mammary tumorigenesis in vivo, we used a MELK-green fluorescent protein (GFP) reporter mouse, which allows prospective isolation of MELK-expressing cells based on GFP fluorescence. We found that in the normal mammary gland, cells expressing high levels of MELK were enriched in proliferating cells that express markers of mammary progenitors. The isolation of cells with high levels of MELK in mammary tumors from MMTV-Wnt1/MELK-GFP bitransgenic mice resulted in a significant enrichment of tumorsphere formation in culture and tumor initiation after transplantation into mammary fat pads of syngeneic mice. Furthermore, using lentiviral delivery of MELK-specific shRNA and limiting dilution cell transplantations, we showed that MELK function is required for mammary tumorigenesis in vivo. Our findings identify MELK as a potential target in breast tumor-initiating cells.

Maternal embryonic leucine zipper kinase is upregulated and required in mammary tumor-initiating cells in vivo.

Kinase de tirette de leucine embryonnaires maternelle (MELK) est exprim&eacute; dans plusieurs tissus en voie de d&eacute;veloppement, dans la lign&eacute;e germinale adulte et dans des prog&eacute;niteurs neuraux adultes. Expression de MELK est &eacute;lev&eacute;e dans les tumeurs indiff&eacute;renci&eacute;es agressifs, corr&eacute;lation avec les r&eacute;sultats pour les patients pauvres dans le cancer du sein humain. Afin d&#39;&eacute;tudier le r&ocirc;le de MELK dans la tumorigen&egrave;se mammaire in vivo, nous avons utilis&eacute; une souris de journaliste MELK-vert fluorescent protein (GFP), qui permet l&#39;&eacute;ventuel isolement de cellules exprimant MELK, bas&eacute; sur la fluorescence GFP. Nous avons constat&eacute; que dans la glande mammaire normale, les cellules exprimant des niveaux &eacute;lev&eacute;s de MELK ont &eacute;t&eacute; enrichies dans les cellules en prolif&eacute;ration qui expriment des marqueurs de cellules souches mammaires. L&#39;isolement de cellules avec des niveaux &eacute;lev&eacute;s de MELK dans les tumeurs mammaires de souris bitransgenic MMTV-Wnt1/MELK-GFP a entra&icirc;n&eacute; un enrichissement significatif de la formation de tumorsphere dans l&#39;initiation de la culture et de la tumeur apr&egrave;s la transplantation dans les coussinets adipeux mammaires de souris syng&eacute;niques. En outre, &agrave; l&#39;aide de livraison des g&egrave;nes de shARN MELK sp&eacute;cifiques et en limitant la transplantation de cellules dilution, nous avons montr&eacute; que la fonction MELK est requise pour la tumorigen&egrave;se mammaire in vivo. Nos r&eacute;sultats identifient MELK comme une cible potentielle dans les cellules d&eacute;clenchant les tumeurs du sein.

Kinase de tirette de leucine embryonnaires maternelle est augment&eacute;e et exig&eacute; dans les cellules d&eacute;clenchant les tumeurs mammaires in vivo.

M&uuml;tterliche embryonalen Leucin-Rei&szlig;verschluss-Kinase (MELK) wird in mehreren Entwicklungsl&auml;ndern Geweben, in die Erwachsenen Keimbahn und in Erwachsenen neuronalen Vorl&auml;uferzellen ausgedr&uuml;ckt. MELK Ausdruck ist in aggressiven undifferenzierte Tumoren, Korrelation mit armen Patienten Ergebnis menschlichen Brustkrebs erh&ouml;ht. Um die Rolle von MELK in Mamma Tumorentstehung in vivo zu untersuchen, haben wir eine MELK-gr&uuml;n fluoreszierendes Protein (GFP) Reporter Maus, wodurch potenzielle Isolierung von MELK-Ausdruck Zellen GFP Fluoreszenz verwendet. Wir fanden, dass in der normalen Brustdr&uuml;se, Zellen, die zum Ausdruck bringen hoher Konzentrationen von MELK in proliferierenden Zellen angereichert wurden, die Marker der Mamma Vorl&auml;uferzellen Ausdr&uuml;cken. Die Isolation von Zellen mit hoher MELK in Milch-Tumoren von MMTV-Wnt1/MELK-GFP Bitransgenic M&auml;usen ergab eine wesentliche Bereicherung der Tumorsphere-Formation in Kultur und Tumor Einleitung nach der Transplantation in Mamma Fettpolster syngenen M&auml;use. Ferner zeigte mit MELK-spezifische ShRNA Lentivirale Lieferung und Verd&uuml;nnung Zelle Transplantationen zu begrenzen, wir MELK-Funktion f&uuml;r in-vivo Mamma Tumorigenese ben&ouml;tigt wird. Unsere Erkenntnisse identifizieren MELK als m&ouml;gliches Angriffsziel in Brust-Tumor-Einleitung-Zellen.

M&uuml;tterliche embryonalen Leucin-Rei&szlig;verschluss-Kinase ist herraufreguliert und in Milch-Tumor-Einleitung-Zellen, die in-vivo erforderlich.

Chinasi cerniera di leucina embrionale materna (MELK) &egrave; espressa in diversi tessuti in via di sviluppo, nella linea germinale adulti e in progenitori neurali adulte. Espressione di MELK &egrave; elevata in aggressivi tumori indifferenziati, correlando con scarso risultato paziente nel cancro al seno umano. Per indagare il ruolo di MELK nella tumorigenesi mammaria in vivo, abbiamo usato un mouse MELK-green fluorescent protein (GFP) reporter, che permette l&#39;isolamento futuri delle cellule che esprimono MELK basato sulla fluorescenza della GFP. Abbiamo trovato che nella ghiandola mammaria normale, le cellule che esprimono alti livelli di MELK sono state arricchite in cellule proliferanti che esprimono marcatori di progenitori mammarie. L&#39;isolamento delle cellule con alti livelli di MELK in tumori mammari da topi bitransgenic MMTV-Wnt1/MELK-GFP ha provocato un significativo arricchimento di tumorsphere formazione in iniziazione cultura e tumore dopo il trapianto in cuscinetti adiposi mammarie dei topi Carlo. Inoltre, mediante consegna lentivirale shRNA specifico MELK e limitare i trapianti di cellule di diluizione, abbiamo dimostrato che la funzione MELK &egrave; necessaria per la tumorigenesi mammaria in vivo. I nostri risultati identificano MELK come un potenziale target in cellule di avvio di tumore al seno.

Materna e embrionale della leucina zipper chinasi &egrave; sovraregolati e richiesto nelle cellule di avvio di tumore mammarie in vivo.

&#x6BCD;&#x4F53;&#x80DA;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; &#x30B8;&#x30C3;&#x30D1;&#x30FC; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;MELK&#xFF09; &#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x7D44;&#x7E54;&#x3001;&#x30A2;&#x30C0;&#x30EB;&#x30C8;&#x80DA;&#x82BD;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6210;&#x4EBA;&#x795E;&#x7D4C;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30EB;&#x30AF; &#xFF08;melk&#xFF09; &#x5F0F;&#x306F;&#x3001;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30AB;&#x30E0;&#x3072;&#x3068;&#x4E73;&#x764C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x76F8;&#x95A2;&#x95A2;&#x9023;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306A;&#x672A;&#x5206;&#x5316;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9AD8;&#x67B6;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4E73;&#x817A;&#x816B;&#x760D;&#x5F62;&#x6210; in vivo &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30E1;&#x30EB;&#x30AF; &#xFF08;melk&#xFF09; &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;GFP &#x86CD;&#x5149;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F; MELK &#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3001;MELK &#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (GFP) &#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;, &#x6B63;&#x5E38;&#x4E73;&#x817A;&#x3001;MELK &#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x767A;&#x73FE;&#x7D30;&#x80DE;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x4E73;&#x817A;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B9; &#x30FB;&#x5897;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30EB;&#x30AF; &#xFF08;melk&#xFF09; &#x306E;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB; MMTV Wnt1/MELK GFP bitransgenic &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x4E73;&#x817A;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x6587;&#x5316;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x958B;&#x59CB;&#x540C;&#x7CFB;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x4E73;&#x817A;&#x306E;&#x8102;&#x80AA;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C9;&#x3078;&#x306E;&#x79FB;&#x690D;&#x5F8C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; tumorsphere &#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;MELK &#x56FA;&#x6709; shRNA &#x30EC;&#x30F3;&#x30C1; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x914D;&#x4FE1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5E0C;&#x91C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x690D;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; MELK &#x95A2;&#x6570;&#x304C;&#x4E73;&#x817A;&#x816B;&#x760D;&#x5F62;&#x6210; in vivo &#x3067;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C; MELK &#x4E73;&#x623F;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6BCD;&#x4F53;&#x80DA;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; &#x30B8;&#x30C3;&#x30D1;&#x30FC; &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; hmgb1 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x4E73;&#x817A;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; in vivo &#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC0B0; &#xBAA8; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0; &#xC9C0;&#xD37C; &#xD0A4; (MELK)&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC870;&#xC9C1;, &#xC131;&#xC778; &#xC138;&#xADE0; &#xC120; &#xBC0F; &#xC131;&#xC778; &#xC2E0;&#xACBD; progenitors &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. MELK &#xC2DD;&#xC774; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xD658;&#xC790; &#xACB0;&#xACFC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC720;&#xBC29;&#xC554;&#xACFC; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; undifferentiated &#xC885;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB41C;. &#xC720; &#xBC29; tumorigenesis in vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA5C; &#xD06C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;, GFP &#xD615;&#xAD11;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; MELK &#xD45C;&#xD604; &#xC140;&#xC758; &#xC608;&#xBE44; &#xACA9;&#xB9AC; &#xC218; &#xC788;&#xB294; MELK &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP) &#xAE30;&#xC790; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC720; &#xBC29; &#xC0C1;&#xC120;&#xC5D0; &#xC720; &#xBC29; progenitors&#xC758; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xBC29;&#xC9C0;&#xD560; &#xC140;&#xC5D0; &#xC140; MELK &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xB18D;&#xCD95; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. MMTV Wnt1/MELK GFP bitransgenic &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720; &#xBC29; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; MELK &#xC140;&#xC758; &#xACA9;&#xB9AC; &#xBB38;&#xD654;&#xC640; &#xC885;&#xC591; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC720; &#xBC29; &#xC9C0;&#xBC29; &#xD328;&#xB4DC; syngeneic &#xC950;&#xC5D0; &#xC774;&#xC2DD; &#xD55C; &#xD6C4;&#xC5D0; tumorsphere &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB18D;&#xCD95; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, MELK &#xD2B9;&#xC815; shRNA lentiviral &#xBC30;&#xB2EC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD76C;&#xC11D; &#xC140; &#xAC04;&#xC774;&#xC2DD;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; MELK &#xD568;&#xC218;&#xB294; &#xC720; &#xBC29; tumorigenesis &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC720; &#xBC29; &#xC885;&#xC591;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xC140;&#xC5D0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC0C1; MELK &#xC2DD;&#xBCC4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0B0; &#xBAA8; &#xBC30;&#xC544; &#xC2E0; &#xC9C0;&#xD37C; &#xD0A4; upregulated &#xC774;&#xBA70;, &#xC720; &#xBC29; &#xC885;&#xC591;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791; &#xC140; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;.

Quinasa de cremallera de leucina embrionario materna (MELK) se expresa en varios tejidos en desarrollo, en la l&iacute;nea germinal de adultos y en adultos progenitores neuronales. Expresi&oacute;n de MELK se eleva en tumores indiferenciados agresivos, correlacionando con pobres resultados de los pacientes en el c&aacute;ncer de mama humano. Para investigar el papel de MELK en tumorigenesis mamaria in vivo, hemos utilizado un rat&oacute;n MELK-verde de reportero prote&iacute;na fluorescente (GFP), que permite el aislamiento prospectivo de c&eacute;lulas MELK-expresi&oacute;n basada en fluorescencia GFP. Encontramos que en la gl&aacute;ndula mamaria normal, las c&eacute;lulas que expresan altos niveles de MELK se enriquecieron en la proliferaci&oacute;n de las c&eacute;lulas que expresan marcadores de progenitores mamarias. El aislamiento de c&eacute;lulas con altos niveles de MELK en tumores mamarios de ratones de formaci&oacute;n MMTV-Wnt1/MELK-GFP dio lugar a un enriquecimiento importante de formaci&oacute;n de tumorsphere en la iniciaci&oacute;n de la cultura y del tumor despu&eacute;s del trasplante en cojines gordos mamarias de ratones syngeneic. Adem&aacute;s, lentivirales entrega de shRNA MELK-espec&iacute;fica y limitar los trasplantes de c&eacute;lulas de diluci&oacute;n, demostramos que la funci&oacute;n MELK es requerida para la tumorig&eacute;nesis mamaria in vivo. Nuestros hallazgos identifican MELK como un blanco potencial en c&eacute;lulas iniciadoras del tumor de mama.

Quinasa de cremallera de leucina embrionario materna es alza y requerido en c&eacute;lulas iniciadoras del tumor mamarias en vivo.

&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (NCSCs) &#x662F;&#x77AC;&#x6001;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EBA;&#x53E3;&#x8868;&#x793A;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7279;&#x5F81;&#x3002;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74; (NC) &#x5F15;&#x8D77;&#x4E86;&#x8BB8;&#x591A;&#x884D;&#x751F;&#x54C1;&#x5305;&#x62EC;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x80F6;&#x8D28;&#x7684;&#x5468;&#x56F4;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3001; &#x80A0;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x548C;&#x80F6;&#x8D28;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x9ED1;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x9885;&#x9762;&#x9AA8;&#x3001; &#x5934;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x5668;&#x5B98;&#xFF0C;&#x548C;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5FC3;&#x810F;&#x8840;&#x7BA1;&#x3001; &#x8F6F;&#x9AA8;&#x3001; &#x9AA8;&#x548C;&#x7ED3;&#x7F14;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x611F;&#x89C9;&#x548C;&#x81EA;&#x4E3B;&#x795E;&#x7ECF;&#x795E;&#x7ECF;&#x8282;&#x3002;

&#x521D;&#x4E60;&#x5F97;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x80FD;&#x529B;&#x671F;&#x95F4; hESCs neuralization&#x3002;

Neural crest stem cells (NCSCs) are a transient multipotent embryonic cell population that represents a defining characteristic of vertebrates. The neural crest (NC) gives rise to many derivatives including the neurons and glia of the sensory and autonomic ganglia of the peripheral nervous system, enteric neurons and glia, melanocytes, and the cartilaginous, bony and connective tissue of the craniofacial skeleton, cephalic neuroendocrine organs, and some heart vessels.

Early acquisition of neural crest competence during hESCs neuralization.

Les cellules souches neurales de cr&ecirc;te (SNCLC) sont une population des cellules embryonnaires multipotentes transitoire qui repr&eacute;sente une caract&eacute;ristique d&eacute;terminante des vert&eacute;br&eacute;s. La cr&ecirc;te neurale (NC) donne lieu &agrave; nombreux d&eacute;riv&eacute;s, y compris les neurones et cellules gliales des ganglions sensitive et autonomique de syst&egrave;me nerveux p&eacute;riph&eacute;rique, neurones ent&eacute;riques et glia, m&eacute;lanocytes et le tissu cartilagineux, osseux et conjonctif du squelette craniofacial organes neuroendocrines c&eacute;phaliques et certains vaisseaux du c&oelig;ur.

Acquisition pr&eacute;coce de la comp&eacute;tence de la cr&ecirc;te neurale durant neuralization CSEh.

Neuralleiste Stammzellen (NCSCs) sind einer vor&uuml;bergehenden multipotenten embryonale Zelle Bev&ouml;lkerung, die ein charakteristisches Merkmal der Wirbeltiere darstellt. Der Neuralleiste (NC) l&auml;sst viele Derivate einschlie&szlig;lich der Neuronen und Glia f&uuml;r die sensorischen und autonomen Ganglien des peripheren Nervensystems, enterischen Neuronen und Glia, Melanozyten und der knorpelige, kn&ouml;cherne und Binde Gewebe der kraniofazialen Skeletts, zephale neuroendokrine Orgeln und einige Herz-Schiffe.

Fr&uuml;hzeitiger Erwerb der Neuralleiste Kompetenz bei Zellkulturen Neuralization.

Cellule staminali della cresta neurale (NCSCs) sono una popolazione di cellule embrionali multipotenti transitoria che rappresenta una caratteristica distintiva dei vertebrati. La cresta neurale (NC) d&agrave; origine a numerosi derivati tra cui i neuroni e glia dei gangli del sistema nervoso periferico, i neuroni enterici e glia, melanociti e il tessuto cartilagineo, osseo e connettivo dello scheletro craniofacciale, cefalico neuroendocrini organi e alcuni vasi del cuore della sensitivi e autonomici.

Acquisizione precoce di competenza della cresta neurale durante hESCs neuralization.

&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE; (NCSCs) &#x306F;&#x3001;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x904E;&#x6E21;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x80DA;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824; (NC) &#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x30B0;&#x30EA;&#x30A2;&#x7D30;&#x80DE;&#x611F;&#x899A;&#x3068;&#x81EA;&#x5F8B;&#x795E;&#x7D4C;&#x306E;&#x672B;&#x68A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x30B0;&#x30EA;&#x30A2;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x8178;&#x6EB6;&#x6027;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3; &#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x984E;&#x9854;&#x9762;&#x9AA8;&#x683C;&#x3001;&#x982D;&#x90E8;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x81D3;&#x5668;&#x3068;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x5FC3;&#x81D3;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x8EDF;&#x9AA8;&#x3001;&#x9AA8;&#x3084;&#x7D50;&#x5408;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3002;

&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x65E9;&#x671F;&#x306E;&#x8CB7;&#x53CE; hESCs &#x795E;&#x7D4C;&#x6642;&#x3002;

&#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (NCSCs)&#xC740; &#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC784;&#xC2DC; multipotent &#xBC30;&#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;. &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; (NC) &#xC2E0;&#xACBD; &#xB4F1; &#xB9D0; &#xCD08; &#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4;, &#xC7A5;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xBA85;&#xACFC;, melanocytes&#xC640; craniofacial &#xACE8;&#xACA9;, &#xB450; &#xBD80; neuroendocrine &#xAE30;&#xAD00;&#xACFC; &#xC77C;&#xBD80; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xD608;&#xAD00;&#xC758; &#xC5F0;&#xACE8;, &#xBF08;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC5B4; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xAC10;&#xAC01; &#xBC0F; &#xC790;&#xC728; &#xC2E0;&#xACBD;&#xC758; &#xBA85;&#xACFC; &#xB9CE;&#xC740; &#xD30C;&#xC0DD; &#xC0C1;&#xD488;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xC2B9;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

HESCs neuralization &#xB3D9;&#xC548; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC5ED;&#xB7C9;&#xC758; &#xC870;&#xAE30; &#xCDE8;&#xB4DD;.

C&eacute;lulas de la cresta neural (NCSCs) son una poblaci&oacute;n de c&eacute;lulas embrionarias pluripotentes transitoria que representa una caracter&iacute;stica propia de los vertebrados. La cresta neural (NC) da lugar a muchos derivados incluyendo las neuronas y gl&iacute;a de los ganglios sensoriales y aut&oacute;nomos del sistema nervioso perif&eacute;rico, ent&eacute;ricas neuronas y gl&iacute;a, melanocitos y el tejido cartilaginoso, &oacute;seo y tejido conectivo del esqueleto craneofacial, &oacute;rganos neuroendocrinos cef&aacute;licas y unos vasos de coraz&oacute;n.

Adquisici&oacute;n temprana de competencia de la cresta neural durante hESCs neuralization.

&#x6210;&#x4EBA;&#x4F53;&#x5185;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5982;&#x8840;&#x7BA1;&#x751F;&#x6210;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x76D1;&#x89C6;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x75C5;&#x7406;&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x80BF;&#x7624;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; Src &#x57FA;&#x677F; Tks5 &#x662F;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x81F4;&#x7624;&#x6027;&#x764C;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86; Tks5 &#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x662F;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x671F;&#x95F4;&#x53D1;&#x6325;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528; morpholinos &#x6765;&#x51CF;&#x5C11; Tks5 &#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x53D1;&#x80B2;&#x7F3A;&#x9677;&#xFF0C;&#x6700;&#x7A81;&#x51FA;&#x7684;&#x5728;&#x6E90;&#x6027;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x9885;&#x9762;&#x3001; &#x8272;&#x7D20;&#x6C89;&#x7740;&#x7B49;&#x3002;Tks5 morphant &#x578B;&#x6551;&#x51FA;&#x6240;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684; Tks5&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x6709;&#x4E86; Src &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; Tks5 &#x7684;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8BC4;&#x4F30; Tks5 &#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x53D1;&#x73B0; Tks5 &#x635F;&#x5931;&#x635F;&#x5BB3;&#x5176;&#x8179;&#x4FA7;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;Src &#x5BB6;&#x65CF;&#x6FC0;&#x9176;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E5F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5F02;&#x5E38;&#x8179;&#x4FA7;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x884D;&#x751F;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x8BA4;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x81EA;&#x4E3B;&#x7684; Tks5 &#x5C0F;&#x9F20;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC; shRNA &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;Tks5 &#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x4F53;&#x5916;&#xFF0C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C; Src &#x548C; Tks5 &#x90FD;&#x662F;&#x9700;&#x8981;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5BCC;&#x542B;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E; podosomes &#x76F8;&#x4F3C;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E09;&#x7EF4;&#x57F9;&#x517B;&#x6761;&#x4EF6;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x5F62;&#x6210; Src-Tks5-&#x4F9D;&#x8D56;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x8D77;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;Src Tks5 &#x901A;&#x8DEF;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x4E2D;&#x91CD;&#x8981;&#x800C;&#x53C8;&#x65B0;&#x9896;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x9014;&#x5F84;&#x8C03;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x901A;&#x8FC7;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5BCC; pro &#x6D04;&#x6E38;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x610F;&#x5473;&#x7740;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x671F;&#x95F4;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x751F;&#x4E0E;&#x80BF;&#x7624;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;

Src Tks5 &#x901A;&#x8DEF;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5D74;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x80B2;&#x671F;&#x95F4;&#x7684;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;

In the adult organism, cell migration is required for physiological processes such as angiogenesis and immune surveillance, as well as pathological events such as tumor metastasis. The adaptor protein and Src substrate Tks5 is necessary for cancer cell migration through extracellular matrix in vitro and tumorigenicity in vivo. However, a role for Tks5 during embryonic development, where cell migration is essential, has not been examined. We used morpholinos to reduce Tks5 expression in zebrafish embryos, and observed developmental defects, most prominently in neural crest-derived tissues such as craniofacial structures and pigmentation. The Tks5 morphant phenotype was rescued by expression of mammalian Tks5, but not by a variant of Tks5 in which the Src phosphorylation sites have been mutated. We further evaluated the role of Tks5 in neural crest cells and neural crest-derived tissues and found that loss of Tks5 impaired their ventral migration. Inhibition of Src family kinases also led to abnormal ventral patterning of neural crest cells and their derivatives. We confirmed that these effects were likely to be cell autonomous by shRNA-mediated knockdown of Tks5 in a murine neural crest stem cell line. Tks5 was required for neural crest cell migration in vitro, and both Src and Tks5 were required for the formation of actin-rich structures with similarity to podosomes. Additionally, we observed that neural crest cells formed Src-Tks5-dependent cell protrusions in 3-D culture conditions and in vivo. These results reveal an important and novel role for the Src-Tks5 pathway in neural crest cell migration during embryonic development. Furthermore, our data suggests that this pathway regulates neural crest cell migration through the generation of actin-rich pro-migratory structures, implying that similar mechanisms are used to control cell migration during embryogenesis and cancer metastasis.

A Src-Tks5 pathway is required for neural crest cell migration during embryonic development.

Dans l&#39;organisme adulte, la migration cellulaire est n&eacute;cessaire pour les processus physiologiques tels que l&#39;angiogen&egrave;se et la surveillance du syst&egrave;me immunitaire, ainsi que des manifestations pathologiques comme M&eacute;tastase tumorale. La prot&eacute;ine adaptatrice et le substrat de la Src Tks5 est n&eacute;cessaire pour la migration des cellules du cancer par le biais de la matrice extracellulaire in vitro et in vivo de tumorig&eacute;nicit&eacute;. Toutefois, un r&ocirc;le pour Tks5 durant le d&eacute;veloppement embryonnaire, lorsque la migration cellulaire est indispensable, n&#39;a pas &eacute;t&eacute; examin&eacute;. Nous avons utilis&eacute; les morpholinos pour r&eacute;duire l&#39;expression de Tks5 dans des embryons de poisson-z&egrave;bre et observ&eacute; des anomalies du d&eacute;veloppement, surtout dans les tissus d&eacute;riv&eacute;s de cr&ecirc;te neurale comme structures cranio-faciales et pigmentation. Le ph&eacute;notype de morphant Tks5 a &eacute;t&eacute; sauv&eacute; par l&#39;expression de Tks5 chez les mammif&egrave;res, mais pas par une variante de Tks5, dans laquelle les sites de phosphorylation de la Src ont &eacute;t&eacute; mut&eacute;s. Nous encore &eacute;valu&eacute; le r&ocirc;le de Tks5 dans les cellules neurales de cr&ecirc;te et les tissus d&eacute;riv&eacute;s de cr&ecirc;te neurale et trouv&eacute; que la perte de Tks5 alt&eacute;r&eacute; leur migration ventrale. Inhibition des kinases de la famille Src a &eacute;galement conduit &agrave; une structuration ventrale anormale des cellules neurales de cr&ecirc;te et de leurs d&eacute;riv&eacute;s. Nous avons confirm&eacute; que ces effets &eacute;taient susceptibles d&#39;&ecirc;tre cellule autonome par pr&eacute;cipitation induite par le shARN de Tks5 dans une lign&eacute;e de cellules souches neurales de cr&ecirc;te murine. Tks5 &eacute;tait n&eacute;cessaire pour la migration de cellules neurales de cr&ecirc;te, in vitro, et Src et Tks5 &eacute;taient tous deux requis pour la formation des structures riches en actine avec une similitude &agrave; podosomes. En outre, nous avons observ&eacute; que les cellules neurales de cr&ecirc;te forment saillies cellule d&eacute;pendante de Src-Tks5 dans des conditions de culture 3D et in vivo. Ces r&eacute;sultats r&eacute;v&egrave;lent un r&ocirc;le important et novateur pour la voie de la Src-Tks5 dans la migration des cellules neurales de cr&ecirc;te pendant le d&eacute;veloppement embryonnaire. En outre, nos donn&eacute;es sugg&egrave;rent que cette voie r&eacute;gule de migration des cellules neurales de cr&ecirc;te gr&acirc;ce &agrave; la g&eacute;n&eacute;ration de structures pro-migrateurs riche en actine, ce qui implique que des m&eacute;canismes similaires sont utilis&eacute;s pour contr&ocirc;ler la migration cellulaire au cours de l&#39;embryogen&egrave;se et cancer m&eacute;tastatique.

Une voie de Src-Tks5 est requise pour la migration des cellules neurales de cr&ecirc;te pendant le d&eacute;veloppement embryonnaire.

Im erwachsenen Organismus ist Zellmigration f&uuml;r physiologische Prozesse wie Angiogenese und immun-&Uuml;berwachung sowie pathologische Ereignisse wie Tumormetastasierung erforderlich. Das Adapterprotein und Src-Substrat ist Tks5 f&uuml;r Krebs Zelle Migration durch extrazellul&auml;re Matrix in-vitro- und in-vivo Tumorigenicity notwendig. Jedoch wurde eine Rolle f&uuml;r Tks5 w&auml;hrend der Embryonalentwicklung, wo Zellmigration entscheidend ist, nicht untersucht. Wir verwendeten Morpholinos Tks5 Ausdruck in den Zebrafish Embryos zu reduzieren und Entwicklungsst&ouml;rungen M&auml;ngel, vor allem in der Neuralleiste abgeleiteten Gewebe wie kraniofaziale Strukturen und Pigmentierung beobachtet. Der Tks5-Morphant-Ph&auml;notyp wurde gerettet, durch Ausdruck der S&auml;ugetier-Tks5, aber nicht durch eine Variante des Tks5, in denen die Src-Phosphorylierung-Sites mutiert wurde haben. Wir weiter evaluiert die Rolle des Tks5 in Neuralleistenzellen und Neuralleiste abgeleiteten Gewebe und festgestellt, dass der Verlust der Tks5 ihre ventrale Migration beeintr&auml;chtigt. Hemmung der Src Familie Kinasen, f&uuml;hrte auch zu abnormen ventralen Musterung Neuralleistenzellen und ihre Derivate. Wir best&auml;tigten, dass diese Effekte wurden wahrscheinlich von ShRNA-vermittelte Niederschlag von Tks5 in einem murinen Neuralleiste Stammzellen Linie autonome Zelle sein. Tks5 war bei der Neuralleiste Zellmigration in-vitro- und Src und Tks5 waren f&uuml;r die Bildung von Aktin-reiche Strukturen mit &Auml;hnlichkeit mit Podosomes erforderlich. Zus&auml;tzlich beobachteten wir, dass Neuralleistenzellen Src-Tks5-abh&auml;ngigen Zelle Vorspr&uuml;nge in 3-d Kulturbedingungen und in-vivo gebildet. Diese Ergebnisse zeigen eine wichtige und neuartige Rolle f&uuml;r die Src-Tks5-Pathway in Neuralleiste Zellmigration w&auml;hrend der Embryonalentwicklung. Dar&uuml;ber hinaus schl&auml;gt unsere Daten, dass diese Option regelt Neuralleiste Zellmigration durch die Erzeugung von Pro-wandernde Aktin-reiche Strukturen, was impliziert, dass &auml;hnliche Mechanismen zur Steuerung der Zellmigration w&auml;hrend der Embryogenese und Krebs Metastasen sind.

Ein Src-Tks5-Weg ist f&uuml;r Neuralleiste Zellmigration w&auml;hrend der Embryonalentwicklung erforderlich.

Nell&#39;organismo adulto, migrazione cellulare &egrave; necessaria per i processi fisiologici come l&#39;angiogenesi e la sorveglianza immunitaria, cos&igrave; come eventi patologici quali metastasi tumorali. La proteina dell&#39;adattatore ed il substrato Src Tks5 &egrave; necessario per la migrazione delle cellule di cancro attraverso la matrice extracellulare in vitro e in vivo tumorigenicity. Tuttavia, un ruolo per Tks5 durante lo sviluppo embrionale, dove la migrazione delle cellule &egrave; essenziale, non &egrave; stato esaminato. Abbiamo usato morpholinos per ridurre Tks5 espressione negli embrioni di zebrafish e osservati difetti di sviluppo, pi&ugrave; visibile nei tessuti derivati da cresta neurale come strutture cranio-facciali e pigmentazione. Il fenotipo morphant Tks5 fu salvato dall&#39;espressione di Tks5 dei mammiferi, ma non da una variante di Tks5 in cui sono stati mutati i siti di fosforilazione Src. Abbiamo ulteriormente valutato il ruolo di Tks5 in cellule della cresta neurale e cresta neurale-derivato tessuti e ha trovato che la perdita di Tks5 alterato loro migrazione ventrale. Inibizione della famiglie chinasi Src ha portato anche alla patterning ventrale anomala delle cellule della cresta neurale e loro derivati. Abbiamo confermato che questi effetti erano suscettibili di essere autonoma da shRNA-mediata atterramento di Tks5 in una linea di cellule staminali murine cresta neurale delle cellule. Tks5 &egrave; stato richiesto per cresta neurale migrazione cellulare in vitro, e sia Src e Tks5 sono stati richiesti per la formazione delle strutture ricche di actina con somiglianza a podosomes. Inoltre, abbiamo osservato che cellule della cresta neurale formano protrusioni di Src-Tks5-dipendente delle cellule in condizioni di coltura tridimensionale e in vivo. Questi risultati rivelano un ruolo importante e romanzo per il percorso di Src-Tks5 nella migrazione cellulare cresta neurale durante lo sviluppo embrionale. Inoltre, i nostri dati suggeriscono che questa via metabolica regola la migrazione cellulare cresta neurale attraverso la generazione di strutture pro-migratori actina-ricco, implicando che meccanismi simili sono utilizzati per controllare la migrazione cellulare durante l&#39;embriogenesi e cancro metastasi.

Un percorso di Src-Tks5 &egrave; richiesto per la migrazione delle cellule cresta neurale durante lo sviluppo embrionale.

&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x30BB;&#x30EB;&#x79FB;&#x884C;&#x306F;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x8840;&#x7BA1;&#x65B0;&#x751F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x514D;&#x75AB;&#x76E3;&#x8996;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Src &#x57FA;&#x677F; Tks5 &#x306F;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x5316;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x5F79;&#x5272; Tks5 &#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x306E;&#x6B20;&#x304B;&#x305B;&#x306A;&#x3044;&#x80DA;&#x306E;&#x767A;&#x80B2;&#x306F;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Tks5 &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B; morpholinos &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001;craniofacial &#x69CB;&#x9020;&#x3084;&#x8272;&#x7D20;&#x6C88;&#x7740;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x76EE;&#x7ACB;&#x3064;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x767A;&#x9054;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Tks5 morphant &#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E; Tks5 &#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044; Src &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304C;&#x5909;&#x7570;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; Tks5 &#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x6551;&#x52A9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7531;&#x6765;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Tks5 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x3001;Tks5 &#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x8179;&#x5074;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x5F31;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Src &#x5BB6;&#x65CF;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3082;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306E;&#x8179;&#x5074;&#x306E;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x304C; shRNA &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Tks5 &#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x81EA;&#x5F8B;&#x30BB;&#x30EB;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Tks5 in vitro &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A; Src &#x3068; Tks5 &#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x985E;&#x4F3C;&#x5EA6;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C; 3&#x6B21;&#x5143;&#x57F9;&#x990A;&#x6761;&#x4EF6;&#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x306B; Src Tks5 &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x7A81;&#x8D77;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x65B0;&#x898F;&#x5F79;&#x5272;&#x80DA;&#x767A;&#x80B2;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Src Tks5 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x52D5;&#x3092;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x80DA;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x764C;&#x306E;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30EA;&#x30C3;&#x30C1; pro &#x6E21;&#x308A;&#x9CE5;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Src Tks5 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x5824;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x80DA;&#x767A;&#x80B2;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC131;&#xC778; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC885;&#xC591; &#xC804;&#xC774; &#xAC19;&#xC740; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB85C; &#xC11C; &#xC2E0;&#xC0DD; &#xBC0F; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAC10;&#xC2DC; &#xB4F1;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; Src &#xAE30;&#xD310; Tks5 &#xCCB4; &#xC678; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; tumorigenicity&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC5B4;&#xB514; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;, &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; tks5&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xAC80;&#xC0AC; &#xB418;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. Zebrafish &#xD0DC;&#xC544;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; Tks5 &#xC2DD;&#xC744; &#xC904;&#xC774;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; morpholinos &#xACE0; craniofacial &#xAD6C;&#xC870; &#xB4F1; &#xC0C9;&#xC18C; &#xC870;&#xC9C1; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD30C;&#xC0DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xAC8C; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACB0;&#xD568; &#xAD00;&#xCC30;. Tks5 morphant &#xD615; Tks5 Src &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACE0; &#xBCC0;&#xC885; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; tks5&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; Tks5 &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; tks5&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBCF5; &#xBD80; &#xC774;&#xB3D9; &#xC7A5;&#xC560;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC;. Src &#xAC00;&#xC871; kinases &#xC5B5;&#xC81C; &#xB610;&#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4;&#xC758; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xBCF5; &#xBD80; &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC140; murine &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; tks5&#xC758; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; shRNA &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xCE58;&#xAC00; &#xB420; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xD588;&#xB2E4; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. Tks5&#xB294; &#xCCB4; &#xC678;, &#xC2E0;&#xACBD;&#xB3C4;&#xAC00; &#xBA38;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xACE0; Src &#xBC0F; Tks5 podosomes &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xACFC; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xBB38;&#xD654; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; Src Tks5 &#xC885;&#xC18D; &#xC140; &#xB3CC;&#xCD9C; &#xD615;&#xC131; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0; Src Tks5 &#xD1B5;&#xB85C; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xC18C;&#xC124; &#xC5ED;&#xD560; &#xACF5;&#xAC1C;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C; &#xC870;&#xC808; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C; &#xCCA0;&#xC0C8; &#xAD6C;&#xC870;, &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC0AC;&#xC6A9; embryogenesis &#xBC0F; &#xC554; &#xC804;&#xC774; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC554;&#xC2DC;&#xC758; &#xC138;&#xB300;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;.

Src-Tks5 &#xD1B5;&#xB85C; &#xBC30;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD06C;&#xB808;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En el organismo adulto, migraci&oacute;n celular es necesaria para los procesos fisiol&oacute;gicos tales como angiog&eacute;nesis y vigilancia inmunol&oacute;gica, as&iacute; como eventos patol&oacute;gicos como met&aacute;stasis del tumor. La prote&iacute;na adaptadora y sustrato de fuente Tks5 es necesario para la migraci&oacute;n de c&eacute;lulas de c&aacute;ncer a trav&eacute;s de la matriz extracelular in vitro y en vivo de la colonizaci&oacute;n. Sin embargo, un papel para Tks5 durante el desarrollo embrionario, donde la migraci&oacute;n celular es esencial, no ha sido examinado. Se utilizan morfolinos para reducir la expresi&oacute;n Tks5 en embriones de pez cebra y observaron defectos de desarrollo, principalmente en los tejidos derivados de la cresta neural como estructuras craneofaciales y pigmentaci&oacute;n. El fenotipo de morphant de Tks5 fue rescatado por la expresi&oacute;n de mam&iacute;feros Tks5, pero no por una variante del Tks5 en que los sitios de fosforilaci&oacute;n de la fuente han sido mutados. Adem&aacute;s evaluamos el papel de Tks5 en c&eacute;lulas de la cresta neural y tejidos derivados de la cresta neural y encontramos que la p&eacute;rdida de Tks5 deteriorada su migraci&oacute;n ventral. Inhibici&oacute;n de Src quinasas familiares tambi&eacute;n condujo al patr&oacute;n ventral anormal de las c&eacute;lulas de la cresta neural y sus derivados. Confirmamos que estos efectos eran propensos a ser c&eacute;lulas aut&oacute;nomas por shRNA-mediada la ca&iacute;da de Tks5 en una l&iacute;nea de c&eacute;lulas madre de murino cresta neural. Tks5 fue necesario para la migraci&oacute;n de la c&eacute;lula de la cresta neural in vitro, y tanto Src y Tks5 fueron requeridos para la formaci&oacute;n de estructuras de actina-ricos con similitud al podosomes. Adem&aacute;s, observamos que las c&eacute;lulas de la cresta neural forman protuberancias de Src-Tks5-dependiente de la c&eacute;lula en condiciones de cultivo tridimensional e in vivo. Estos resultados revelan un papel importante y novedoso de la v&iacute;a Src-Tks5 en la migraci&oacute;n de c&eacute;lulas de la cresta neural durante el desarrollo embrionario. Adem&aacute;s, nuestros datos sugieren que esta v&iacute;a regula la migraci&oacute;n de c&eacute;lulas de la cresta neural mediante la generaci&oacute;n de estructuras pro-migratorias ricos en actina, lo que implica que mecanismos similares se utilizan para controlar la migraci&oacute;n celular durante la embriog&eacute;nesis y c&aacute;ncer met&aacute;stasis.

Jochen Maurer

Department of Developmental Pathology

Bonn Medical School, Institute of Pathology

Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells