decellularization-and-recellularization-of-whole-livers

Decellularization and Recellularization of Whole Livers

The liver is a complex organ which requires constant perfusion for delivery of nutrients and oxygen and removal of waste in order to survive1. Efforts to ...

Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, Shriners Hospitals for Children

&#x5728;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x7684;&#x62D3;&#x6251;&#x5F02;&#x6784;&#x9176; III&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x7531; TOP3 &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x635F;&#x5931;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5305;&#x62EC;&#x589E;&#x957F;&#x7F13;&#x6162;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x9057;&#x4F20;&#x6BD2;&#x6027;&#x4EE3;&#x7406;&#x5546;&#x3001; &#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x8D85;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3001; &#x589E;&#x52A0;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x6CD5;&#x548C;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x5931;&#x8D25;&#x7684;&#x8D85;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x578B;&#x3002;&#x7F13;&#x6162;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684; top3 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x88AB;&#x9547;&#x538B; SGS1&#xFF0C;&#x5B83;&#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x552F;&#x4E00;&#x7684; RecQ &#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;sgs1 &#x662F;&#x7EA2;&#x53D1; top3&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x884C;&#x52A8;&#x4E2D;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x9014;&#x5F84;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6807;&#x8BC6;&#x5176;&#x4ED6; Sgs1 Top3 &#x901A;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x8D77;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627F;&#x8BFA;&#x5728;&#x975E; sgs1 &#x6291;&#x5236; top3 &#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x7B5B;&#x67E5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x7F13;&#x6162;&#x589E;&#x957F;&#x548C; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x7684; top3 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x88AB;&#x9690;&#x542B;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; RAD51&#x3001; RAD54&#x3001; RAD55&#x3001; RAD57&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;top3 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E2D; RAD50&#x3001; MRE11&#x3001; XRS2&#x3001; RDH54&#x3001; RAD1 &#x663E;&#x793A;&#x6781;&#x7AEF;&#x534F;&#x540C;&#x751F;&#x957F;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x91CD;&#x7EC4; SUP4 o &#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5728;&#x663E;&#x793A; rad51&#x3001; rad54&#x3001; rad55 &#x6216; rad57 &#x7684;&#x80CC;&#x666F;&#x4E2D; top3Delta &#x4E0D;&#x4F1A;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x83CC;&#x682A;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; Rad51 &#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4; top3 &#x80CC;&#x666F;&#x4E2D;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x6709;&#x5229;&#x4E8E;&#x521B;&#x9020;&#x7684;&#x6709;&#x5BB3;&#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x6240; Sgs1&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; Rad51 &#x5E2E;&#x52A9;&#x62DB;&#x52DF;&#x5230;&#x7AD9;&#x70B9;&#x590D;&#x5236;&#x635F;&#x574F;&#x7684; Sgs1 Top3&#x3002;

&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x6551;&#x63F4; top3 &#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x7F13;&#x6162;&#x3002;

In budding yeast, loss of topoisomerase III, encoded by the TOP3 gene, leads to a genomic instability phenotype that includes slow growth, hyper-sensitivity to genotoxic agents, mitotic hyper-recombination, increased chromosome missegregation, and meiotic failure. Slow growth and other defects of top3 mutants are suppressed by mutation of SGS1, which encodes the only RecQ helicase in S. cerevisiae. sgs1 is epistatic to top3, suggesting that the two proteins act in the same pathway. To identify other factors that function in the Sgs1-Top3 pathway, we undertook a genetic screen for non-sgs1 suppressors of top3 defects. We found that slow growth and DNA damage sensitivity of top3 mutants are suppressed by mutations in RAD51, RAD54, RAD55, and RAD57. In contrast, top3 mutants show extreme synergistic growth defects with mutations in RAD50, MRE11, XRS2, RDH54, and RAD1. We also analyzed recombination at the SUP4-o region, showing that in a rad51, rad54, rad55, or rad57 background top3Delta does not increase recombination to the same degree as in a wild-type strain. These results suggest that the presence of the Rad51 homologous recombination complex in a top3 background facilitates creation of detrimental intermediates by Sgs1. We present a model wherein Rad51 helps recruit Sgs1-Top3 to sites of replicative damage.

Mutations in homologous recombination genes rescue top3 slow growth in Saccharomyces cerevisiae.

Dans la levure de bi&egrave;re, perte de la topoisom&eacute;rase III, cod&eacute;e par le g&egrave;ne TOP3, m&egrave;ne &agrave; un ph&eacute;notype d&#39;instabilit&eacute; g&eacute;nomique qui inclut une croissance lente, hypersensibilit&eacute; aux agents g&eacute;notoxiques, missegregation de chromosome mitotique de recombinaison hyper, une augmentation et une insuffisance m&eacute;iotique. Une croissance lente et autres d&eacute;fauts de top3 mutants sont supprim&eacute;es par mutation de SGS1, qui code l&#39;h&eacute;licase RecQ seule chez S. cerevisiae. sgs1 est &eacute;pistatique &agrave; top3, sugg&eacute;rant que les deux prot&eacute;ines agissent dans la m&ecirc;me voie. Pour identifier les autres facteurs qui fonctionnent dans la voie de Sgs1-Top3, nous avons entrepris un d&eacute;pistage g&eacute;n&eacute;tique pour non-sgs1 suppresseurs de d&eacute;fauts top3. Nous avons constat&eacute; qu&#39;une croissance lente et l&#39;ADN endommagent sensibilit&eacute; de top3 mutants sont supprim&eacute;s par des mutations RAD51, RAD54, RAD55 et RAD57. En revanche, top3 mutants pr&eacute;sentent des d&eacute;fauts de croissance synergique extr&ecirc;mes pr&eacute;sentant des mutations dans RAD50 MRE11, XRS2, RDH54 et RAD1. Nous avons aussi analys&eacute; la recombinaison dans la r&eacute;gion de SUP4-o, montrant que, dans un contexte de rad51, rad54, rad55 ou rad57 top3Delta n&#39;augmente pas de recombinaison au m&ecirc;me degr&eacute; que dans une souche de type sauvage. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la pr&eacute;sence de la recombinaison homologue Rad51 complexe dans un contexte top3 facilite la cr&eacute;ation d&#39;interm&eacute;diaires pr&eacute;judiciables par Sgs1. Nous pr&eacute;sentons un mod&egrave;le dans lequel Rad51 aide &agrave; recruter Sgs1-Top3 aux sites des dommages r&eacute;plicatif.

Des mutations dans les g&egrave;nes de la recombinaison homologue de sauvetage top3 croissance lente chez Saccharomyces cerevisiae.

Mutationen in Genen, die homologe Rekombination zu retten Top3 langsame Wachstum in Saccharomyces cerevisiae.

Nel lievito gemmante, perdita di topoisomerase III, codificata dal gene TOP3, conduce ad un fenotipo di instabilit&agrave; genomica che include una crescita lenta, iper-sensibilit&agrave; ad agenti genotossici, missegregation cromosoma mitotico iper-ricombinazione, aumentato e fallimento meiotic. Crescita lenta e altri difetti della top3 mutanti vengono soppressi da mutazione del SGS1, che codifica per il solo RecQ elicasi in S. cerevisiae. sgs1 &egrave; epistatici al top3, suggerendo che le due proteine agiscono nella stessa via. Per identificare altri fattori che funzionano in via del Sgs1-Top3, abbiamo intrapreso uno schermo genetico per sgs1 non soppressori di top3 difetti. Abbiamo trovato che una crescita lenta ed il DNA danneggiano sensibilit&agrave; della top3 mutanti vengono soppressi da mutazioni RAD51, RAD54, RAD55 e RAD57. Al contrario, top3 mutanti mostrano difetti estrema crescita sinergica con mutazioni in RAD50, MRE11, XRS2, RDH54 e RAD1. Abbiamo anche analizzato ricombinazione presso la regione di SUP4-o, mostrando che in uno sfondo rad51, rad54, rad55 o rad57 top3Delta non aumentare la ricombinazione nella stessa misura come in un ceppo wild-type. Questi risultati suggeriscono che la presenza della ricombinazione omologa Rad51 complessa in uno sfondo top3 facilita la creazione di dannose intermedi di Sgs1. Vi presentiamo un modello in cui Rad51 aiuta a reclutare Sgs1-Top3 per siti di danno replicativa.

Mutazioni nei geni ricombinazione omologa salvano top3 crescita lenta in Saccharomyces cerevisiae.

&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067; TOP3 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30C8;&#x30DD;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC; III, &#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306F;&#x4F4E;&#x6210;&#x9577;&#x3001;&#x8D85;&#x611F;&#x6027; genotoxic &#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D1;&#x30FC;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3001;&#x9AD8;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x306E;&#x8AA4;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x5931;&#x6557;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9045;&#x3044;&#x6210;&#x9577;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x306E; top3 &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x552F;&#x4E00;&#x306E; RecQ &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059; SGS1 &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;sgs1 &#x306F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x540C;&#x3058;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x884C;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506; top3 &#x306B;&#x512A;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Sgs1 Top3 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x3067;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;top3 &#x6B20;&#x9665;&#x306E;&#x975E; sgs1 &#x30B5;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x306F;&#x3001;&#x5F15;&#x304D;&#x53D7;&#x3051;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x9045;&#x3044;&#x6210;&#x9577;&#x304A;&#x3088;&#x3073; DNA &#x5909;&#x7570;&#x4F53; RAD57&#x3001;RAD55&#x3001;RAD54 RAD51 &#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059; top3 &#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;top3 &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F; RAD50, MRE11&#x3001;XRS2&#x3001;RDH54&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; RAD1 &#x5909;&#x7570;&#x3068;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x76F8;&#x4E57;&#x6210;&#x9577;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F; rad51&#x3001;rad54&#x3001;rad55&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F; rad57 &#x306E;&#x80CC;&#x666F;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x540C;&#x3058;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; top3Delta &#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x7D44;&#x307F;&#x66FF;&#x3048; SUP4 o &#x5730;&#x57DF;&#x3067;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Rad51 &#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; top3 &#x306E;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF; &#x30B0;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5B58;&#x5728; Sgs1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6709;&#x5BB3;&#x306A;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x306E;&#x4F5C;&#x6210;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x524D;&#x8A18; Sgs1 Top3 &#x8907;&#x88FD;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x52DF;&#x96C6; Rad51 &#x3092;&#x52A9;&#x3051;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F; top3 &#x306E;&#x4F4E;&#x6210;&#x9577;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x6551;&#x52A9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC2E0;&#xC9C4; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC190;&#xC2E4; topoisomerase III, TOP3 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xD638;&#xD654;&#xC758; &#xB290;&#xB9B0; &#xC131;&#xC7A5;, &#xD558;&#xC774;&#xD37C; &#xAC10;&#xB3C4; genotoxic &#xC694;&#xC6D0;&#xACFC; mitotic &#xD558;&#xC774;&#xD37C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;, &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; missegregation, meiotic &#xC624;&#xB958;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; genomic &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC131; phenotype &#xC774;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB290;&#xB9B0; &#xC131;&#xC7A5;&#xACFC; top3 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xACB0;&#xD568;&#xC740; SGS1 &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; RecQ helicase S. cerevisiae&#xC5D0; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. sgs1&#xC740; top3, &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC19;&#xC740; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0; &#xD589;&#xB3D9; &#xC81C;&#xC548; epistatic&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Sgs1 Top3 &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC57D;&#xC18D; top3 &#xACB0;&#xD568;&#xC758; &#xBE44; sgs1 &#xC9C4;&#xC555;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD654;&#xBA74;. &#xB290;&#xB9B0; &#xC131;&#xC7A5; &#xBC0F; DNA &#xC190;&#xC0C1; top3 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; RAD51, RAD54, RAD55, &#xBC0F; rad57&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, top3 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; RAD50, MRE11, XRS2, RDH54, &#xBC0F; rad1&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xADF9;&#xB2E8;&#xC801;&#xC778; &#xC2DC;&#xB108;&#xC9C0; &#xC131;&#xC7A5; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; rad51, rad54, rad55, &#xB610;&#xB294; rad57 &#xBC30;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; top3Delta &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC19;&#xC740; &#xC815;&#xB3C4;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD398;&#xC774;&#xC9C0; SUP4 o &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; top3 &#xBC31;&#xADF8;&#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; Rad51 &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC874;&#xC7AC; sgs1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD574;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; Rad51 Sgs1 Top3 &#xC77C;&#xCC28; &#xD53C;&#xD574; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xBAA8;&#xB378; &#xC81C;&#xC2DC;.

&#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAD6C;&#xC870; Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0; top3 &#xB290;&#xB9B0; &#xC131;&#xC7A5;.

En levadura de florecimiento, p&eacute;rdida de Topoisomerasa III, codificada por el gen TOP3, conduce a un fenotipo de inestabilidad gen&oacute;mica que incluye un crecimiento lento, hipersensibilidad a agentes genot&oacute;xicos y protooncogenes cromosoma mit&oacute;tico de hiper-recombinaci&oacute;n, mayor fracaso mei&oacute;tica. Crecimiento lento y otros defectos de top3 mutantes se suprimen por mutaci&oacute;n del SGS1, que codifica la &uacute;nica helicase RecQ en S. cerevisiae. SGS1 es epist&aacute;ticas a top3, sugiriendo que las dos prote&iacute;nas act&uacute;an de la misma v&iacute;a. Para identificar otros factores que funcionan en el camino de Sgs1-Top3, emprendimos una pantalla gen&eacute;tica para no-sgs1 supresores de defectos top3. Encontramos que un crecimiento lento y ADN da&ntilde;an la sensibilidad del top3 mutantes se suprimen por mutaciones en RAD51, RAD54, RAD55 y RAD57. En contraste, top3 mutantes muestran defectos de crecimiento extremo sin&eacute;rgica con mutaciones en RAD50, MRE11, XRS2, RDH54 y RAD1. Tambi&eacute;n analizamos la recombinaci&oacute;n en la regi&oacute;n de SUP4-o, mostrando que en un fondo de rad51, rad54, rad55 o rad57 top3Delta no aumentar la recombinaci&oacute;n en el mismo grado como en una cepa de tipo salvaje. Estos resultados sugieren que la presencia de la recombinaci&oacute;n hom&oacute;loga de Rad51 compleja en un fondo de top3 facilita la creaci&oacute;n de productos intermedios perjudiciales por Sgs1. Se presenta un modelo en donde Rad51 ayuda a reclutar Sgs1-Top3 a sitios de da&ntilde;o replicativa.

Las mutaciones en los genes de la recombinaci&oacute;n hom&oacute;loga rescatan top3 lento crecimiento en Saccharomyces cerevisiae.

RecQ DNA helicases &#x548C;&#x62D3;&#x6251; III topoisomerases &#x5DF2;&#x7ECF;&#x5F00;&#x59CB;&#x50A8;&#x85CF;&#x9057;&#x4F20;&#x3001; &#x7269;&#x7406;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4E0E; RecQ &#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#x521B;&#x5EFA;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x662F;&#x89E3;&#x6790;&#x7684;&#x62D3;&#x6251;&#x4E09;&#x6A21;&#x578B;&#x76F8;&#x4E00;&#x81F4;&#x3002;&#x4E0E;&#x62D3;&#x6251;&#x4E09;&#x635F;&#x5931;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x8868;&#x660E;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684; RecQ &#x521B;&#x5EFA;&#x7684;&#x886C;&#x5E95;&#x662F;&#x4E0D;&#x5229;&#x3002;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x62D3;&#x6251;&#x4E09; TOP3 &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x88AB;&#x5220;&#x9664; RecQ &#x540C;&#x6E90; Sgs1 &#x6240;&#x9690;&#x542B;&#x7684;&#x591A;&#x6548;&#x6027;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684; top3 &#x57FA;&#x56E0;&#x5242;&#x91CF;&#x6291;&#x5236;&#x5668;&#x4E2D;&#x641C;&#x7D22;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A; Pif1&#xFF0C;&#x884C;&#x4E3A;&#x4E0E;&#x6781;&#x6027;&#x76F8;&#x53CD;&#x7684; Sgs1&#x3002; Pif1 &#x8FC7;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x6291;&#x5236;&#x591A;&#x4E2A; top3 &#x7F3A;&#x9677;&#xFF0C;&#x4F46;&#x52A0;&#x5267;&#x4E86; sgs1 &#x548C; sgs1 top3 &#x7684; DNA &#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;Pif1 &#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E2D;&#x6CA1;&#x6709;&#x7684; Top3 Sgs1 &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x6E05;&#x695A;&#x5730;&#x8868;&#x660E; Pif1 &#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x6D3B;&#x52A8;&#x9700;&#x8981;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x62B5;&#x6D88;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x4ECE; Top3 &#x89E3;&#x8026;&#x7684; Sgs1 &#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4; Pif1 &#x9057;&#x4F20;&#x4EA4;&#x4E92; Sgs1 Top3 &#x901A;&#x8DEF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x53D1;&#x73B0; Pif1 &#x62DB;&#x8058;&#x5230; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x75AB;&#x6E90;&#x5730;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x75AB;&#x6E90;&#x5730;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0; top3 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301; Pif1 &#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x9884;&#x9632;&#x6216;&#x79EF;&#x805A;&#x5728; top3 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684; Sgs1 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x4FEE;&#x590D;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x3002;

Top3 &#x6CA1;&#x6709;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684; Sgs1 &#x548C; Pif1 DNA helicases &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

RecQ DNA helicases and Topo III topoisomerases have conserved genetic, physical, and functional interactions that are consistent with a model in which RecQ creates a recombination-dependent substrate that is resolved by Topo III. The phenotype associated with Topo III loss suggests that accumulation of a RecQ-created substrate is detrimental. In yeast, mutation of the TOP3 gene encoding Topo III causes pleiotropic defects that are suppressed by deletion of the RecQ homolog Sgs1. We searched for gene dosage suppressors of top3 and identified Pif1, a DNA helicase that acts with polarity opposite to that of Sgs1. Pif1 overexpression suppresses multiple top3 defects, but exacerbates sgs1 and sgs1 top3 defects. Furthermore, Pif1 helicase activity is essential in the absence of Top3 in an Sgs1-dependent manner. These data clearly demonstrate that Pif1 helicase activity is required to counteract Sgs1 helicase activity that has become uncoupled from Top3. Pif1 genetic interactions with the Sgs1-Top3 pathway are dependent upon homologous recombination. We also find that Pif1 is recruited to DNA repair foci and that the frequency of these foci is significantly increased in top3 mutants. Our results support a model in which Pif1 has a direct role in the prevention or repair of Sgs1-induced DNA damage that accumulates in top3 mutants.

The absence of Top3 reveals an interaction between the Sgs1 and Pif1 DNA helicases in Saccharomyces cerevisiae.

ADN RecQ helicases et Topo III topoisom&eacute;rases ont conserv&eacute; des interactions fonctionnelles, physiques et g&eacute;n&eacute;tiques qui sont compatibles avec un mod&egrave;le dans lequel RecQ cr&eacute;e un substrat de recombinaison-d&eacute;pendant qui est r&eacute;gl&eacute; par la Topo III. Le ph&eacute;notype associ&eacute; &agrave; la perte de Topo III sugg&egrave;re que l&#39;accumulation d&#39;un substrat RecQ cr&eacute;&eacute; est pr&eacute;judiciable. Chez les levures, mutation du g&egrave;ne codant pour Topo III TOP3 provoque pl&eacute;iotropes d&eacute;fauts qui sont supprim&eacute;s par la suppression de l&#39;homologue RecQ Sgs1. Nous avons cherch&eacute; des suppresseurs de dosage du g&egrave;ne du top3 et identifi&eacute; Pif1, d&eacute;fauts d&#39;une h&eacute;licase de l&#39;ADN que les actes de polarit&eacute; oppos&eacute;e &agrave; celle de la surexpression de Sgs1. Pif1 supprime plusieurs d&eacute;fauts top3 mais exacerbe le sgs1 et sgs1 top3. En outre, activit&eacute; h&eacute;licase Pif1 est indispensable en l&#39;absence de Top3 d&#39;une fa&ccedil;on d&eacute;pendante de Sgs1. Ces donn&eacute;es montrent clairement que l&#39;activit&eacute; h&eacute;licase Pif1 est n&eacute;cessaire pour neutraliser l&#39;activit&eacute; h&eacute;licase Sgs1 qui est devenu d&eacute;bo&icirc;ter Top3. Pif1 interactions g&eacute;n&eacute;tiques avec la voie de Sgs1-Top3 d&eacute;pendent de la recombinaison homologue. Nous trouvons aussi que Pif1 est recrut&eacute; aux foyers de r&eacute;paration de l&#39;ADN, et que la fr&eacute;quence de ces foyers s&#39;accro&icirc;t dans le top3 des mutants. Nos r&eacute;sultats supportent un mod&egrave;le dans lequel Pif1 a un r&ocirc;le direct dans la pr&eacute;vention ou la r&eacute;paration des l&eacute;sions de l&#39;ADN induite par le Sgs1 qui s&#39;accumule dans le top3 des mutants.

L&#39;absence de Top3 r&eacute;v&egrave;le une interaction entre le Sgs1 et Pif1 ADN h&eacute;licases dans Saccharomyces cerevisiae.

DNA RecQ Helikasen und Topo III Topoisomerasen haben genetische, k&ouml;rperliche und funktionelle Wechselwirkungen erhalten, die mit einem Modell entsprechen bei denen RecQ Rekombination-abh&auml;ngige Substrat erstellt, die von Topo III aufgel&ouml;st ist. Der Ph&auml;notyp Topo III Verlustes legt nahe, dass die Anh&auml;ufung eines Substrats RecQ-erstellt abtr&auml;glich ist. In Hefe f&uuml;hrt die Mutation des Gens TOP3 Codierung Topo III pleiotropen M&auml;ngel, die durch Streichung von der RecQ-Homolog Sgs1 unterdr&uuml;ckt werden. Wir suchten nach gen Dosierung D&auml;mpfer der top3 und Pif1 identifiziert, eine DNA-Helicase, dass Handlungen mit Polarit&auml;t gegen&uuml;ber der Sgs1. Pif1 eine &Uuml;berexpression unterdr&uuml;ckt mehrere-top3-Defekte, sondern versch&auml;rft sgs1 und sgs1 top3-Defekte. Dar&uuml;ber hinaus ist Pif1 Helicase T&auml;tigkeit wesentlichen Mangels Top3 Sgs1-abh&auml;ngigen Weise. Diese Daten zeigen eindeutig, dass Pif1 Helicase T&auml;tigkeit wird ben&ouml;tigt, um Sgs1 Helicase T&auml;tigkeit entgegenzuwirken, die abgekoppelt von Top3 geworden ist. Pif1 genetische Interaktionen mit der Sgs1-Top3-Stoffwechselweg sind homologe Rekombination abh&auml;ngig. Wir finden auch, dass Pif1 zur DNA-Reparatur-Foki eingestellt ist und die H&auml;ufigkeit der diese Herde in top3 Mutanten betr&auml;chtlich gestiegen ist. Unsere Ergebnisse unterst&uuml;tzen ein Modell, in dem Pif1 hat eine direkte Rolle in der Pr&auml;vention oder Reparatur des Sgs1-induzierten DNA-Sch&auml;den, die im top3 Mutanten ansammelt.

Das Fehlen von Top3 zeigt eine Interaktion zwischen dem Sgs1 und Pif1 DNA-Helikasen in Saccharomyces Cerevisiae.

DNA RecQ elicasi e Topo III topoisomerasi hanno conservato le interazioni genetiche, fisiche e funzionali che sono coerenti con un modello in cui RecQ crea un substrato di ricombinazione-dipendente che &egrave; stato risolto da Topo III. Il fenotipo associato a perdita di Topo III suggerisce che l&#39;accumulo di un substrato creato RecQ &egrave; dannosa. In lievito, mutazione del gene TOP3 codifica Topo III provoca difetti pleiotropici che sono soppresse dall&#39;eliminazione dell&#39;omologo RecQ Sgs1. Abbiamo cercato di soppressori di dosaggio del gene della top3 e identificato Pif1, un helicase del DNA che atti con polarit&agrave; opposta a quella della sovraespressione di Sgs1. Pif1 sopprime multiple top3 difetti, ma aggrava sgs1 e top3 sgs1 difetti. Inoltre, attivit&agrave; di helicase Pif1 &egrave; essenziale per l&#39;assenza di Top3 in maniera Sgs1-dipendente. Questi dati dimostrano chiaramente che attivit&agrave; di helicase Pif1 &egrave; necessaria per contrastare le attivit&agrave; di helicase Sgs1 che &egrave; diventata disgiunto da Top3. Pif1 interazioni genetiche con il pathway Sgs1-Top3 dipendono dalla ricombinazione omologa. Troviamo anche che Pif1 &egrave; reclutato ai fuochi della riparazione del DNA e che la frequenza di questi fuochi &egrave; aumentata significativamente in top3 mutanti. I nostri risultati supportano un modello in cui Pif1 ha un ruolo diretto nella prevenzione o nella riparazione di danni al DNA indotti Sgs1 che si accumulano in top3 mutanti.

L&#39;assenza di Top3 rivela un&#39;interazione tra il Sgs1 e Pif1 DNA elicasi in Saccharomyces cerevisiae.

RecQ Topo III &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x4F9D;&#x5B58;&#x57FA;&#x677F;&#x4F5C;&#x6210;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x3001;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F; RecQ DNA &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068; Topo III topoisomerases &#x306B;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Topo III &#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x8868;&#x73FE;&#x578B; RecQ &#x4F5C;&#x6210;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x304C;&#x6709;&#x5BB3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30C8;&#x30DD; III TOP3 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F; RecQ &#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0; Sgs1 &#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x591A;&#x9762;&#x306E;&#x6B20;&#x640D;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; top3 &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6295;&#x4E0E;&#x91CF;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x691C;&#x7D22;&#x3001;Pif1 &#x8B58;&#x5225;&#x3001;Sgs1 Pif1 &#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x3068;&#x9006;&#x306E;&#x6975;&#x6027;&#x306E;&#x884C;&#x70BA;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x306E; top3 &#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;sgs1 &#x3068; sgs1 top3 &#x3092;&#x60AA;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B; DNA &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x6B20;&#x9665;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;Pif1 &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F; Top3 &#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306F; Sgs1 &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B; Pif1 &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x304C; Top3 &#x304B;&#x3089;&#x5171;&#x5F79;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B; Sgs1 &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6253;&#x3061;&#x6D88;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Sgs1 Top3 &#x7D4C;&#x8DEF;&#x3068; Pif1 &#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F; Pif1 DNA &#x4FEE;&#x5FA9;&#x5DE3;&#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x75C5;&#x5DE3;&#x306E;&#x983B;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;top3 &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x4E0A;&#x6607;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C; Pif1 &#x4E88;&#x9632;&#x307E;&#x305F;&#x306F; top3 &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3059;&#x308B; Sgs1 &#x306B;&#x3088;&#x308B; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

3 &#x7D44;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x3067;&#x306F;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; Sgs1 &#x3068; Pif1 DNA &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

RecQ DNA helicases &#xBC0F; Topo III topoisomerases &#xBAA8;&#xB378; RecQ Topo III&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xB294; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC885;&#xC18D; &#xAE30;&#xC9C8;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, &#xC2E4;&#xC81C; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC874; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Topo III &#xC190;&#xC2E4;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD615; RecQ &#xB9CC;&#xB4E0; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xCD95;&#xC801; &#xC800;&#xD574; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;. &#xD6A8; &#xBAA8;, Topo III &#xC778;&#xCF54;&#xB529; TOP3 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; RecQ &#xCCB4; sgs1&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5B5;&#xC555; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4; &#xBA74; &#xBC1C;&#xD604; &#xC131; &#xACB0;&#xD568; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC80;&#xC0C9; top3&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xC9C4;&#xC555; &#xD55C; Pif1 &#xC2DD;&#xBCC4;, DNA helicase Sgs1. Pif1 overexpression&#xC758; &#xBC18;&#xB300; &#xADF9;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xD589;&#xC704; &#xC5EC;&#xB7EC; top3 &#xC624;&#xB958;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; sgs1&#xC640; sgs1 top3 &#xC545;&#xD654; &#xACB0;&#xD568;. &#xB610;&#xD55C;, Pif1 helicase &#xD65C;&#xB3D9; Sgs1 &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; top3&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; Pif1 helicase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; top3&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB098; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; Sgs1 helicase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC911;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Sgs1 Top3 &#xD1B5;&#xB85C;&#xC640; Pif1 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; Pif1 DNA &#xC218;&#xB9AC; foci&#xB97C; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; foci&#xC758; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; top3 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; Pif1 &#xC608;&#xBC29; &#xB610;&#xB294; top3 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCD95;&#xC801; &#xD558;&#xB294; sgs1&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xC218;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Top3 &#xBD80;&#xC7AC; Saccharomyces cerevisiae&#xC758; Sgs1 &#xBC0F; Pif1 DNA helicases &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

RecQ ADN helicasas y Topo III Topoisomerasas conservan interacciones gen&eacute;ticas, f&iacute;sicas y funcionales que son consistentes con un modelo en el cual RecQ crea un sustrato dependiente de recombinaci&oacute;n que se resuelva por Topo III. El fenotipo asociado con p&eacute;rdida de Topo III sugiere que la acumulaci&oacute;n de un sustrato RecQ-creado es perjudicial. En la levadura, mutaci&oacute;n del gen TOP3 codificaci&oacute;n Topo III causa defectos pleiotr&oacute;picos que son suprimidos por la eliminaci&oacute;n de la RecQ hom&oacute;logo Sgs1. Se ha buscado supresores de dosificaci&oacute;n del gene de top3 y se identificaron Pif1, una helicasa ADN que actos con polaridad opuesta a la de la sobreexpresi&oacute;n de Sgs1. Pif1 suprime defectos m&uacute;ltiples del top3, pero exacerba sgs1 y sgs1 top3 defectos. Adem&aacute;s, Pif1 helicase actividad es esencial en la ausencia de Top3 en una forma dependiente de Sgs1. Estos datos demuestran claramente que la actividad helicasa de Pif1 es necesario para contrarrestar la actividad helicasa de Sgs1 que se ha vuelto desacoplado de Top3. Pif1 interacciones gen&eacute;ticas con la v&iacute;a Sgs1-Top3 dependen de recombinaci&oacute;n hom&oacute;loga. Tambi&eacute;n encontramos que el Pif1 es reclutado a focos de reparaci&oacute;n de ADN y que la frecuencia de estos focos se aumenta perceptiblemente en mutantes top3. Nuestros resultados apoyan un modelo en el que Pif1 tiene un papel directo en la prevenci&oacute;n o reparaci&oacute;n de da&ntilde;os en el ADN Sgs1-inducida que se acumulan en el top3 mutantes.

La ausencia de Top3 revela una interacci&oacute;n entre la Sgs1 y Pif1 ADN helicasas en Saccharomyces cerevisiae.

&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x68C0;&#x67E5;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7; &#xFF08;cAMP&#xFF09; &#x5BF9;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x76AE;&#x80A4;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x5FAE;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x8001;&#x631D;) &#x7BA1;&#x4F53;&#x5916;&#x5C4F;&#x969C;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x57FA;&#x7EBF;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x5C4F;&#x969C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; LEC &#x7BA1;&#x662F;&#x5F31;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; 10 kDa &#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x7684; 1.4(-0.6)(+0.9)x10(-6) cm/s &#x548C; 1.7(-0.5)(+0.8)x10(-6) cm/s &#xFF08;&#x51E0;&#x4F55; mean+/-95%CI)&#xFF0C;&#x6269;&#x6563;&#x578B;&#x6E17;&#x900F;&#x7CFB;&#x6570;&#x5206;&#x522B;&#x548C;&#x6BCF;&#x6BEB;&#x7C73;.&#x4F4E;&#x6D53;&#x5EA6; (3 microM) &#x7684;&#x8425;&#x5730;&#x5355;&#x5143;&#x683C; permeant &#x6A21;&#x62DF; 1.2+/-0.5 (+ /-95 %ci &#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x503C;&#xFF09; &#x5C40;&#x7076;&#x6027;&#x6CC4;&#x6F0F;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x6539;&#x53D8;&#x5C4F;&#x969C;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6; &#xFF08;80 &#x548C; 400 microM&#xFF09; &#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; &#x78F7;&#x9178;&#x4E8C;&#x916F;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242; Ro-20-1724&#x5E74; &#xFF08;20 microM&#xFF09; &#x964D;&#x4F4E;&#x6E17;&#x900F;&#x901F;&#x7387;&#x548C;&#x5BF9;&#x7126;&#x6F0F;&#x6C34;&#x3001; &#x6570;&#x76EE;&#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x5C4F;&#x969C;&#x3002;&#x51CF;&#x5C11;&#x6E17;&#x900F;&#x901F;&#x7387;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x589E;&#x52A0;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8FB9;&#x6846;&#x5728;&#x8FDE;&#x7EED;&#x9ECF;&#x86CB;&#x767D;&#x67D3;&#x8272;&#x3002;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E; 1 &#x6BEB;&#x7C73; 2&#39;&#xFF0C;5&#39;-dideoxyadenosine&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x6291;&#x5236;&#x817A;&#x82F7;&#x9178;&#x73AF;&#x5316;&#x9176;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x589E;&#x52A0;&#x6E17;&#x900F;&#x901F;&#x7387;&#x3002;&#x8001;&#x631D;&#x8868;&#x793A;&#x65E0;&#x8BBA;&#x5C4F;&#x969C;&#x529F;&#x80FD;&#x662F;&#x5F31;&#x6216;&#x5F3A;&#x7684;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E3B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x8D28;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;-1&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7684; LEC &#x7BA1;&#x4F53;&#x5916;&#x6E17;&#x900F;&#x6027;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#xFF0C;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x8BF4;&#x660E;&#x8840;&#x6DB2;&#x5FAE;&#x8840;&#x7BA1;&#x7684;&#x8425;&#x5730;&#x3002;

&#x5BF9;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x5FAE;&#x8840;&#x7BA1;&#x7BA1;&#x7684;&#x5C4F;&#x969C;&#x529F;&#x80FD;&#x73AF;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

This work examines the effect of cyclic AMP (cAMP) on the in vitro barrier function of tubes of human dermal lymphatic microvascular endothelial cells (LECs). Under baseline conditions, the barrier function of LEC tubes was weak, with diffusional permeability coefficients to bovine serum albumin and 10 kDa dextran of 1.4(-0.6)(+0.9)x10(-6) cm/s and 1.7(-0.5)(+0.8)x10(-6) cm/s (geometric mean+/-95% CI), respectively, and 1.2+/-0.5 (mean+/-95% CI) focal leaks per mm. Exposure to low concentrations (3 microM) of a cell-permeant analog of cAMP did not alter the barrier function. Exposure to higher concentrations (80 and 400 microM) and/or the phosphodiesterase inhibitor Ro-20-1724 (20 microM) lowered permeabilities and the number of focal leaks, and increased the selectivity of the barrier. Decreased permeabilities were accompanied by an increase in continuous VE-cadherin staining at cell-cell borders. Exposure to 1 mM 2',5'-dideoxyadenosine, an inhibitor of adenylate cyclase, did not increase permeabilities. LECs expressed the lymphatic-specific master transcription factor Prox-1, regardless of whether barrier function was weak or strong. Our results indicate that the permeability of LEC tubes in vitro responds to cAMP in a manner similar to that well-described for the permeability of blood microvessels.

Effect of cyclic AMP on barrier function of human lymphatic microvascular tubes.

Cet ouvrage examine l&#39;effet de l&#39;AMP cyclique (AMPc) sur la fonction de barri&egrave;re in vitro des tubes des humains par voie cutan&eacute;e lymphatiques cellules endoth&eacute;liales microvasculaires (ESL). En conditions basales, la fonction de barri&egrave;re de tubes LEC a &eacute;t&eacute; faible, avec des coefficients de perm&eacute;abilit&eacute; par diffusion &agrave; l&#39;albumine s&eacute;rique bovine et 10 kDa dextran de 1.4(-0.6)(+0.9)x10(-6) cm/s et 1.7(-0.5)(+0.8)x10(-6) cm/s (mean+/-95% g&eacute;om&eacute;triques CI), respectivement, et 1.2+/-0.5 (moyenne +/-95 % CI) focale fuites par mm. exposition &agrave; de faibles concentrations (3 microM) d&#39;une cellule-perm&eacute;ant analogue du cAMP n&#39;alt&egrave;re pas la fonction de barri&egrave;re. L&#39;exposition &agrave; des concentrations plus &eacute;lev&eacute;es (80 &agrave; 400 microM) et/ou de l&#39;inhibiteur de la phosphodiest&eacute;rase Ro-20-1724 (20 microM) abaiss&eacute; la perm&eacute;abilit&eacute; et le nombre de fuites de focales et augmente la s&eacute;lectivit&eacute; de la barri&egrave;re. Une diminution des perm&eacute;abilit&eacute;s &eacute;taient accompagn&eacute;es d&#39;une augmentation continue la VE-cadh&eacute;rine coloration aux fronti&egrave;res des cellules. Exposition &agrave; 1 mM 2&#39;, 5&#39;-dideoxyad&eacute;nosine, un inhibiteur de l&#39;ad&eacute;nylate cyclase, n&#39;a pas augment&eacute; la perm&eacute;abilit&eacute;. ESL a exprim&eacute; le facteur de transcription ma&icirc;tre lymphatique sp&eacute;cifiques Prox-1, peu importe si la fonction de barri&egrave;re &eacute;tait faible ou forte. Nos r&eacute;sultats indiquent que la perm&eacute;abilit&eacute; des tubes ESL in vitro r&eacute;pond au cAMP d&#39;une mani&egrave;re similaire &agrave; ce bien d&eacute;crit la perm&eacute;abilit&eacute; des microvaisseaux sanguins.

Effet de l&#39;AMP cyclique sur la fonction de barri&egrave;re de tubes de microvasculaires lymphatiques humains.

Diese Arbeit untersucht die Auswirkungen von zyklischem AMP (cAMP) auf die in-vitro-Barrierefunktion Rohre aus menschlichen dermalen lymphatische mikrovaskul&auml;re Endothelzellen (LECs). Unter geplanten Bedingungen die Barrierefunktion der LEC-R&ouml;hren war schwach, da der Diffusionsprozess Permeabilit&auml;t Koeffizienten Rinderserumalbumin und 10 kDa-Dextran 1.4(-0.6)(+0.9)x10(-6) cm/s und 1.7(-0.5)(+0.8)x10(-6) cm/s (geometrische mean+/-95% CI), bzw.; 1.2+/-0.5 (Mittelwert +/-95 % CI) fokale Lecks pro mm. Exposition gegen&uuml;ber niedrigen Konzentrationen (3 MicroM) von einer Zelle-permeant Analog des Lagers nicht die Barrierefunktion ver&auml;ndern Zu h&ouml;heren Konzentrationen (80 und 400 MicroM) und/oder der Phosphodiesterase-Hemmer Ro-20-1724 (20 MicroM) gesenkt, Flutbarkeitswerte und die Anzahl der fokalen Lecks und erh&ouml;ht die Selektivit&auml;t der Barriere. Verminderte Flutbarkeitswerte wurden begleitet von einer Zunahme der kontinuierlichen VE-Cadherin F&auml;rbung an den Zell-Zell-Grenzen. Exposition gegen&uuml;ber 1 mM 2&#39;, 5&#39;-Dideoxyadenosine, ein Inhibitor der Adenylate Cyclase, nicht zu erh&ouml;hen Flutbarkeitswerte. LECs ausgedr&uuml;ckt lymphatischen-spezifische Meister Transkriptionsfaktors Prox-1, unabh&auml;ngig davon, ob die Barrierefunktion schwach oder stark war. Unsere Ergebnisse zeigen, dass die Durchl&auml;ssigkeit der LEC Rohre in-vitro-Lager in &auml;hnlich wie bei diesem beschriebenem f&uuml;r die Durchl&auml;ssigkeit der Blut-Microvessels reagiert.

Auswirkungen von zyklischem AMP auf Barrierefunktion menschliche lymphatische mikrovaskul&auml;re Rohre.

Questo lavoro esamina l&#39;effetto di AMP ciclico (cAMP) sulla funzione di barriera in vitro dei tubi di dermale linfatiche microvascolare endothelial cellule umane (LECs). In condizioni di base, la funzione di barriera dei tubi LEC era debole, con coefficienti di diffusione permeabilit&agrave; all&#39;albumina di siero bovino e 10 kDa Destrano 1.4(-0.6)(+0.9)x10(-6) cm/s e 1.7(-0.5)(+0.8)x10(-6) cm/s (geometrico mean+/-95% CI), rispettivamente, e 1.2+/-0.5 (media + /-95% CI) perdite focali per mm. esposizione a basse concentrazioni (3 microM) di un cella-permeant analogico dell&#39;accampamento non alterava la funzione di barriera. L&#39;esposizione a concentrazioni pi&ugrave; elevate (80 e 400 microM) e/o l&#39;inibitore della fosfodiesterasi Ro-20-1724 (20 microM) abbassato la permeabilit&agrave; e il numero di perdite di focale e aumentare la selettivit&agrave; della barriera. Diminuita permeabilit&agrave; erano accompagnate da un aumento della colorazione VE-caderina continua a bordi della cella-cella. L&#39;esposizione a 1 mM 2&#39;, 5&#39;-dideoxyadenosine, un inibitore dell&#39;adenilato ciclasi, non ha fatto aumentare la permeabilit&agrave;. LECs esprime il fattore di trascrizione master specifici linfatico Prox-1, indipendentemente dal fatto se la funzione di barriera era debole o forte. I nostri risultati indicano che la permeabilit&agrave; del LEC tubi in vitro risponde al campo in un modo simile a quello ben definite per la permeabilit&agrave; del sangue Talengectasia.

Effetto di AMP ciclico sulla funzione barriera dei tubi microvascolare linfatici umani.

&#x3053;&#x306E;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x306F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#xFF08;cAMP&#xFF09; &#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x3072;&#x3068;&#x76AE;&#x819A;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE; (LECs) &#x306E; in vitro &#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067; LEC &#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x5F31;&#x3044;&#x3092;&#x62E1;&#x6563;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x4FC2;&#x6570;&#x306E;&#x30A6;&#x30B7;&#x8840;&#x6E05;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x3068; 10 kDa &#x306E;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3; 1.4(-0.6)(+0.9)x10(-6) cm/s &#x3068; 1.7(-0.5)(+0.8)x10(-6) cm/s (&#x5E7E;&#x4F55;&#x5B66;&#x7684;&#x306A; mean+/-95% CI&#xFF09; &#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3057;&#x3001;1.2+/-0.5 &#xFF08;95 %ci &#x306E; +/-&#x5E73;&#x5747;&#xFF09; &#x7126;&#x70B9;&#x30EA;&#x30FC;&#x30AF;&#x3042;&#x305F;&#x308A;&#x30DF;&#x30EA;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#x3002; &#x30BB;&#x30EB;&#x4E0B;&#x6D41;&#x5074;&#x3078;&#x306E;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x4F4E;&#x6FC3;&#x5EA6; &#xFF08;3 microM&#xFF09; &#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732;&#x306F;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5909;&#x308F;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9AD8;&#x6FC3;&#x5EA6; (80 &#x304B;&#x3089; 400 microM) &#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30B8;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x7269;&#x8CEA; Ro-20-1724&#x5E74;&#x3078;&#x306E;&#x66B4;&#x9732; &#xFF08;20 microM) &#x6D78;&#x900F;&#x7387;&#x3068;&#x7126;&#x70B9;&#x306E;&#x30EA;&#x30FC;&#x30AF;&#x6570;&#x3092;&#x4E0B;&#x3052;&#x3001;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306E;&#x6D78;&#x900F;&#x7387;&#x306F;&#x9023;&#x7D9A; VE &#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x56FD;&#x5883;&#x3067;&#x67D3;&#x8272;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x4F34;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x9732;&#x51FA;&#x3092; 1 mM 2&#39;, 5&#39;-dideoxyadenosine&#x3001;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x30B7;&#x30AF;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x3001;&#x6D78;&#x900F;&#x7387;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;LECs &#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x5F31;&#x3044;&#x304B;&#x5F37;&#x3044;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306B;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306A;&#x304F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; Prox 1 &#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;LEC &#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6; in vitro &#x3067;&#x306E;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x8840;&#x306E;&#x901A;&#x6C17;&#x6027;&#x3092;&#x3088;&#x304F;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30D0;&#x30EA;&#x30A2;&#x6A5F;&#x80FD;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7CFB;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF; AMP &#x306E;&#x5F71;&#x97FF;

&#xC774; &#xC791;&#xD488; &#xC778;&#xAC04; &#xD53C;&#xBD80; &#xB9BC;&#xD504; microvascular &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; (LECs) &#xD29C;&#xBE0C;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xC7A5;&#xBCBD; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504; (&#xCEA0;&#xD504;)&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC80;&#xC0AC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD08;&#xAE30; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; LEC &#xD29C;&#xBE0C;&#xC758; &#xC7A5;&#xBCBD; &#xD568;&#xC218;&#xB294; &#xAC01;&#xAC01; &#xC18C; &#xD608; &#xCCAD; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; &#xBC0F; 1.4(-0.6)(+0.9)x10(-6) cm/s &#xBC0F; 1.7(-0.5)(+0.8)x10(-6) cm/s (&#xAE30;&#xD558;&#xD559;&#xC801; mean+/-95% CI), 10 kDa dextran diffusional &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xACC4;&#xC218;&#xC640; &#xC57D;&#xD55C; &#xD558; &#xACE0; &#xB2F9; m m. &#xCEA0;&#xD504;&#xC758; &#xC140; permeant &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4; (3 microM)&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; 1.2+/-0.5 (&#xD3C9;&#xADE0; 95 %ci +) &#xCD08;&#xC810; &#xB204;&#xC218; &#xC7A5;&#xBCBD; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB192;&#xC740; &#xB18D;&#xB3C4; (80 &#xBC0F; 400 microM) &#xB610;&#xB294; &#xD3EC;&#xC2A4; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C;-20-1724 (20 microM) permeabilities &#xBC0F; &#xCD08;&#xC810; &#xB204;&#xC218; &#xC218;&#xB97C; &#xD558;&#xD5A5; &#xC870;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xBC29; &#xBCBD;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC140; &#xD14C;&#xB450;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC774; &#xC9C0;&#xB294; &#xC5F0;&#xC18D; VE cadherin &#xC99D;&#xAC00; &#xAC10;&#xC18C; permeabilities &#xD568;&#xAED8; &#xD588;&#xB2E4;. 1 M m 2&#39;, 5&#39;-dideoxyadenosine, adenylate cyclase&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; permeabilities &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. LECs &#xC7A5;&#xBCBD; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC57D;&#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xAC15;&#xD55C; &#xC5EC;&#xBD80;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xB9BC;&#xD504; &#xD2B9;&#xC815; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; Prox 1 &#xD45C;&#xD604;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; LEC &#xD29C;&#xBE0C; &#xCCB4; &#xC678;&#xC758; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xD53C; microvessels&#xC758; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC798; &#xC124;&#xBA85; &#xADF8;&#xC640; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xCEA0;&#xD504;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04; &#xB9BC;&#xD504; microvascular &#xD29C;&#xBE0C;&#xC758; &#xC7A5;&#xBCBD; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;.

Este trabajo examina el efecto de AMP c&iacute;clico (cAMP) en la funci&oacute;n de barrera in vitro de tubos de cut&aacute;neas linf&aacute;ticas microvasculares c&eacute;lulas endoteliales humanas (LECs). Bajo las condiciones iniciales, la funci&oacute;n de barrera de LEC tubos era d&eacute;bil, con coeficientes de permeabilidad difusional alb&uacute;mina de suero bovino y 10 kDa dextrano de 1.4(-0.6)(+0.9)x10(-6) cm/s y 1.7(-0.5)(+0.8)x10(-6) cm/s (geom&eacute;trica mean+/-95% CI), respectivamente, y 1.2+/-0.5 (medio +/-Peto) focal fugas por mm. exposici&oacute;n a bajas concentraciones (3 microM) de una c&eacute;lula-Florescente an&aacute;logo del campo no alter&oacute; la funci&oacute;n de barrera. Exposici&oacute;n a concentraciones m&aacute;s altas (80 y 400 microM) y/o el inhibidor de la fosfodiesterasa Ro-20-1724 (20 microM) baj&oacute; permeabilidades y el n&uacute;mero de fugas focales y aument&oacute; la selectividad de la barrera. Permeabilidades disminuci&oacute;n fueron acompa&ntilde;ados por un aumento en la tinci&oacute;n de VE-cadherina continua en las fronteras de la c&eacute;lula. Exposici&oacute;n a 1 mM 2&#39;, 5&#39;-didesoxiadenosine, un inhibidor de la Adenilato ciclasa, no aument&oacute; permeabilidades. LECs expresan el factor de transcripci&oacute;n maestro linf&aacute;tico espec&iacute;fico Prox-1, sin importar si la funci&oacute;n de la barrera era d&eacute;bil o fuerte. Nuestros resultados indican que la permeabilidad de los tubos de la LEC in vitro responde al campamento de manera similar a lo que bien-descrita para la permeabilidad de los microvasos sangu&iacute;neos.

Efecto de AMP c&iacute;clico en funci&oacute;n de la barrera de los tubos microvasculares linf&aacute;ticos humanos.

&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x63CF;&#x8FF0;&#x503A;&#x5238;&#x5E26;&#x56FE;&#x6848;&#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x51DD;&#x80F6;&#x6210;&#x4F7F;&#x7528; perturbants &#x7684;&#x6574;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x6EB6;&#x8D28;&#x7C98;&#x63A5;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x6309;&#x7167;&#x5C31;&#x8BA2;&#x8D2D; &#xFF1B;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7ED3;&#x679C;&#x548C;&#x5149;&#x5B66;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8868;&#x660E;&#x7C98;&#x63A5;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#x51DD;&#x80F6;&#x7684;&#x6444;&#x52A8;&#x3002;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x51DD;&#x80F6;&#x673A;&#x68B0;&#x53EF;&#x9760;&#x800C;&#x4E14;&#x53EF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x652F;&#x67B6;&#x6750;&#x6599;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528; perturbants &#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x51DD;&#x80F6;&#x7684;&#x7C98;&#x63A5;&#x3002;

This work describes a method to bond patterned macromolecular gels into monolithic structures using perturbants. Bonding strengths for a variety of solutes follow a Hofmeister ordering; this result and optical measurements indicate that bonding occurs by reversible perturbation of contacting gels. The resulting microfluidic gels are mechanically robust and can serve as scaffolds for cell culture.

Bonding of macromolecular hydrogels using perturbants.

Ce travail d&eacute;crit une m&eacute;thode pour lier des gels macromol&eacute;culaires &agrave; motifs dans des structures monolithiques &agrave; l&#39;aide de perturbateurs. Les forces de liaison pour une vari&eacute;t&eacute; de solut&eacute;s suivent un classement Hofmeister ; ce r&eacute;sultat et des mesures optiques indiquent que la liaison se fait par perturbation r&eacute;versible de communiquer avec les gels. Les gels de microfluidique qui en r&eacute;sultent sont m&eacute;caniquement robustes et peuvent servir d&#39;&eacute;chafaudages pour la culture cellulaire.

Collage des hydrogels macromol&eacute;culaires &agrave; l&#39;aide de perturbateurs.

Diese Arbeit beschreibt ein Verfahren zur gemusterten Makromolekulare Gele in monolithischer Strukturen mit Perturbants zu verbinden. Bindung st&auml;rken f&uuml;r eine Vielzahl von Analyten folgen eine Sortierung der Hofmeister; Dieses Ergebnis und optische Messungen zeigen, dass die Bindung durch reversible St&ouml;rung der Kontaktaufnahme mit Gele auftritt. Die resultierende Microfluidic-Gele sind mechanisch robust und k&ouml;nnen als Ger&uuml;ste f&uuml;r Zellkultur dienen.

Verkleben von makromolekularen Hydrogele mit Perturbants.

Questo lavoro descrive un metodo per bond gel macromolecolare fantasia in strutture monolitiche utilizzando perturbants. Forza di legame per una variet&agrave; di soluti segue un ordinamento Hofmeister; Questo risultato e misurazioni ottiche indicano che legame si verifica da perturbazione reversibile di contatto con il gel. Il gel di microfluidica risultante sono meccanicamente robusto e pu&ograve; servire come ponteggi per la coltura cellulare.

Incollaggio di idrogel macromolecolare utilizzando perturbants.

&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x5316;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x30B2;&#x30EB; perturbants &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30E2;&#x30CE;&#x30EA;&#x30B7;&#x30C3;&#x30AF;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x63A5;&#x5408;&#x5F37;&#x5EA6;&#x304C;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x6EB6;&#x8CEA;&#x30DB;&#x30D5;&#x30DE;&#x30A4; &#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x9806;&#x5E8F;&#x306B;&#x5F93;&#x3046;;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x5149;&#x5B66;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x30DC;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30EA;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B7;&#x30D6;&#x30EB;&#x306E;&#x6442;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B2;&#x30EB;&#x3078;&#x306E;&#x554F;&#x3044;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30B2;&#x30EB;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306B;&#x5F37;&#x56FA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Perturbants &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x63A5;&#x5408;&#x3002;

&#xC774; &#xC791;&#xD488; perturbants&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xD328;&#xD134;&#xD654; &#xB41C; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xC824;&#xC744; &#xC811;&#xCC29; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Solutes&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xACB0;&#xD569; &#xAC15;&#xC810;&#xC744; &#xB530;&#xB77C; Hofmeister &#xC8FC;&#xBB38;; &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xAD11;&#xD559; &#xCE21;&#xC815; &#xBCF8;&#xB529; &#xC824; &#xC5F0;&#xB77D;&#xC758; &#xAC00;&#xC5ED; &#xC12D; &#xB3D9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xBBF8;&#xC138; &#xC824;&#xC740; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC74;&#xC124; &#xAE30;&#xACC4; &#xC784;&#xB300; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Perturbants&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; hydrogels&#xC758; &#xACB0;&#xD569;.

Este trabajo describe un m&eacute;todo para enlazar modelados macromoleculares geles en estructuras monol&iacute;ticas usando perturbants. Fuerzas de adhesi&oacute;n para una variedad de solutos seguir un orden Hofmeister; Este resultado y mediciones &oacute;pticas indican que la vinculaci&oacute;n se produce por perturbaci&oacute;n reversible de ponerse en contacto con geles. Los geles de microfluidos resultante son mec&aacute;nicamente robustos y pueden servir como andamios para el cultivo celular.

La vinculaci&oacute;n de hidrogeles macromoleculares mediante perturbants.

&#x6B64;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7814;&#x7A76;&#x5206;&#x6790;&#x5982;&#x4F55;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E3A;&#x591A;&#x5B54;&#x652F;&#x67B6;&#x7684;&#x6392;&#x6C34;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x80FD;&#x591F;&#x543B;&#x5408;&#x8840;&#x7BA1;&#x548C;&#x6CA1;&#x6709;&#x5D29;&#x6E83;&#x7684;&#x8239;&#x53EA;&#x6D41;&#x660E;&#x704C;&#x6D41;&#x652F;&#x67B6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x538B;&#x529B; &mdash; &mdash; &#x80A0;&#x58C1;&#x548C;&#x95F4;&#x8D28;&#x7684;&#x538B;&#x529B; &mdash; &mdash; &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5FC5;&#x987B;&#x8D85;&#x8FC7;&#x9608;&#x503C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x907F;&#x514D;&#x5D29;&#x6E83;&#x3002;&#x6A21;&#x578B;&#x51E0;&#x4F55;&#x5F62;&#x72B6;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x516D;&#x89D2;&#x5F62;&#x6570;&#x7EC4;&#x7684;&#x5404;&#x5411;&#x540C;&#x6027;&#x7684;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x3001; &#x6E20;&#x9053;&#x7684;&#x4E00;&#x5C0F;&#x90E8;&#x5206;&#x6240;&#x9009;&#x6392;&#x6C34;&#x660E;&#x6E20;&#x3002;&#x7EB3;&#x7EF4;&#x5C14;-&#x65AF;&#x6258;&#x514B;&#x65AF;&#x65B9;&#x7A0B;&#x3001; &#x690B;&#x9E1F;&#x7684;&#x8FC7;&#x6EE4;&#x6CD5;&#x548C;&#x8FBE;&#x897F;&#x7684;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x53D7;&#x6D41;&#x4F53;&#x6D41;&#x52A8;&#x901A;&#x8FC7;&#x8239;&#x53EA;&#x548C;&#x6392;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x8DE8;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#xFF0C;&#x5E76;&#x901A;&#x8FC7;&#x811A;&#x624B;&#x67B6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x6392;&#x6C34;&#x901A;&#x9053;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4FDD;&#x6301;&#x95E8;&#x69DB;&#x8DE8;&#x5BA4;&#x58C1;&#x538B;&#x529B;&#x53EA;&#x5728;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x8239;&#x53EA;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x534A;&#x5F84;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x4F9D;&#x8D56;&#x8840;&#x7BA1;&#x51E0;&#x4F55;&#x548C;&#x6DB2;&#x538B;&#x652F;&#x67B6;&#x4E0E;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x7684;&#x5C5E;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6F14;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x8840;&#x7BA1;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5DE5;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x652F;&#x67B6;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E0E;&#x704C;&#x6CE8;&#x548C;&#x94ED;&#x8BB0;&#x7684;&#x6392;&#x6C34;&#x3002;

&#x5E26;&#x8840;&#x7BA1;&#x652F;&#x67B6;&#x7684;&#x6392;&#x6C34;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x8BA1;&#x7B97;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3002;

This computational study analyzes how to design a drainage system for porous scaffolds so that the scaffolds can be vascularized and perfused without collapse of the vessel lumens. We postulate that vascular transmural pressure--the difference between lumenal and interstitial pressures--must exceed a threshold value to avoid collapse. Model geometries consisted of hexagonal arrays of open channels in an isotropic scaffold, in which a small subset of channels was selected for drainage. Fluid flow through the vessels and drainage channel, across the vascular wall, and through the scaffold were governed by Navier-Stokes equations, Starling's Law of Filtration, and Darcy's Law, respectively. We found that each drainage channel could maintain a threshold transmural pressure only in nearby vessels, with a radius-of-action dependent on vascular geometry and the hydraulic properties of the vascular wall and scaffold. We illustrate how these results can be applied to microvascular tissue engineering, and suggest that scaffolds be designed with both perfusion and drainage in mind.

Computational design of drainage systems for vascularized scaffolds.

Cette &eacute;tude analyse comment concevoir un syst&egrave;me de drainage pour &eacute;chafaudages poreuses afin que les &eacute;chafaudages peuvent &ecirc;tre vascularis&eacute;s et perfus&eacute;s sans effondrement des lumi&egrave;res du navire. Nous postulons que la pression transmurale vasculaire--la diff&eacute;rence entre les pressions interstitielles et de lumi&egrave;re--doit d&eacute;passer un certain seuil afin d&#39;&eacute;viter l&#39;effondrement. Mod&egrave;le g&eacute;om&eacute;tries se composait de matrices hexagonales des canaux ouverts en un &eacute;chafaudage isotrope, dans lequel un petit sous-ensemble des canaux a &eacute;t&eacute; s&eacute;lectionn&eacute; pour le drainage. &Eacute;coulement de fluide &agrave; travers les vaisseaux et les canaux de drainage, &agrave; travers la paroi vasculaire et par le biais de l&#39;&eacute;chafaud &eacute;taient r&eacute;gis par des &eacute;quations de Navier-Stokes, Loi de Filtration de Starling et de Darcy, respectivement. Nous avons constat&eacute; que chaque canal de drainage pourrait maintenir une pression transmurale de seuil uniquement dans les vaisseaux &agrave; proximit&eacute;, avec un rayon d&#39;action d&eacute;pend de g&eacute;om&eacute;trie vasculaire et les propri&eacute;t&eacute;s hydrauliques de la paroi vasculaire et l&#39;&eacute;chafaudage. Nous illustrons comment ces r&eacute;sultats peuvent &ecirc;tre appliqu&eacute;es &agrave; l&#39;ing&eacute;nierie tissulaire microvasculaire et sugg&egrave;rent que les &eacute;chafaudages soient con&ccedil;ues avec la perfusion et le drainage &agrave; l&#39;esprit.

Conception informatique de syst&egrave;mes de drainage pour &eacute;chafaudages vascularis&eacute;es.

Computational Studie analysiert wie ein Entw&auml;sserungssystem f&uuml;r por&ouml;se Ger&uuml;ste so entwerfen, dass die Ger&uuml;ste vascularized und perfused ohne Zusammenbruch des Schiffes-Lumen werden k&ouml;nnen. Wir postulieren, dass vaskul&auml;re Transmural Druck--der Unterschied zwischen lumenal und interstitielle Druck--darf einen Schwellenwert um Zusammenbruch zu verhindern. Modell Geometrien bestand aus sechseckigen Arrays der offenen Kan&auml;le in einem isotropen Ger&uuml;st, in dem eine kleine Teilmenge der Kan&auml;le f&uuml;r die Entw&auml;sserung ausgew&auml;hlt wurde. Fl&uuml;ssigkeitsstr&ouml;mung durch die Schiffe und Ablaufrinne in der Gef&auml;&szlig;wand, durch das Ger&uuml;st wurden durch die Navier-Stokes-Gleichungen, Starlings Gesetz der Filtration und Darcy Gesetz, bzw. geregelt. Wir fanden, dass jede Ablaufrinne einen Schwellenwert Transmural Druck nur in nahe gelegenen Schiffe, mit einem Radius-der-Aktion-abh&auml;ngigen vaskul&auml;re Geometrie und die hydraulischen Eigenschaften der Gef&auml;&szlig;wand und Ger&uuml;st aufrecht erhalten kann. Wir zeigen, wie diese Ergebnisse auf mikrovaskul&auml;re Tissue-Engineering angewendet werden k&ouml;nnen, und schlagen vor, da&szlig; Ger&uuml;ste mit Perfusion und Entw&auml;sserung im Verstand entworfen werden.

Computational Design der Entw&auml;sserungssysteme f&uuml;r gef&auml;&szlig;reichen Ger&uuml;sten.

Questo studio computazionale analizza come progettare un sistema di drenaggio per ponteggi porosi in modo che i ponteggi possono essere vascolarizzati e perfuso senza collasso di lumen la nave. Abbiamo postulato che la pressione transmurale vascolare - la differenza tra le pressioni interstiziali e lumenal - deve superare un valore di soglia per evitare il collasso. Modello geometrie consistevano di matrici esagonali di canali aperti in un&#39;impalcatura isotropico, in cui &egrave; stato selezionato un piccolo sottoinsieme dei canali per il drenaggio. Flusso del fluido attraverso i vasi e canale di drenaggio, attraverso la parete vascolare e il patibolo sono stati governati da equazioni di Navier-Stokes, legge di filtrazione di Starling e legge di Darcy, rispettivamente. Abbiamo trovato che ogni canale di drenaggio poteva mantenere una pressione transmurale soglia solo nei vasi vicini, con un raggio d&#39;azione dipende dal vascolare geometria e le propriet&agrave; idrauliche della parete vascolare e ponteggio. Illustriamo come questi risultati possono essere applicati all&#39;ingegneria dei tessuti Microvascolari e suggeriscono che i ponteggi essere progettato con perfusione e di drenaggio in mente.

Computational design di sistemi di drenaggio per ponteggi vascolarizzati.

&#x3053;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x8DB3;&#x5834;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x3057;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x8154;&#x306E;&#x5D29;&#x58CA;&#x306A;&#x3057;&#x704C;&#x6D41;&#x591A;&#x5B54;&#x8CEA;&#x306E;&#x6392;&#x6C34;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x7D4C;&#x58C1;&#x5727;--&#x516C;&#x6E96;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x5185;&#x8154;&#x5074;&#x3068;&#x9593;&#x8CEA;&#x5727; - &#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x5D29;&#x58CA;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3057;&#x304D;&#x3044;&#x5024;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB; &#x30B8;&#x30AA;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3067;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x6392;&#x6C34;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3001;&#x7B49;&#x65B9;&#x6027;&#x8DB3;&#x5834;&#x306E;&#x516D;&#x89D2;&#x5F62;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x304B;&#x3089;&#x6210;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6D41;&#x4F53;&#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x3068;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x306E;&#x5411;&#x3053;&#x3046;&#x306E;&#x6392;&#x6C34;&#x8DEF;&#x3068;&#x8DB3;&#x5834;&#x3092;&#x901A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x652F;&#x914D;&#x30CA;&#x30D3;&#x30A8; &#x30FB; &#x30B9;&#x30C8;&#x30FC;&#x30AF;&#x30B9;&#x65B9;&#x7A0B;&#x5F0F;&#x3001;&#x30E0;&#x30AF;&#x30C9;&#x30EA;&#x306E;&#x308D;&#x904E;&#x6CD5;&#x3001;&#x30C0;&#x30FC;&#x30B7;&#x30FC;&#x306E;&#x6CD5;&#x5247;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x5404;&#x6392;&#x6C34;&#x8DEF;&#x3057;&#x304D;&#x3044;&#x5024;&#x7D4C;&#x58C1;&#x5727;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x8FD1;&#x304F;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x8840;&#x7BA1;&#x5F62;&#x72B6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8DB3;&#x5834;&#x306E;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x884C;&#x52D5;&#x534A;&#x5F84;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x5DE5;&#x5B66;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x8DB3;&#x5834;&#x704C;&#x6D41;&#x3068;&#x6392;&#x6C34;&#x5FF5;&#x982D;&#x306B;&#x7F6E;&#x3044;&#x3066;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8840;&#x7BA1;&#x67C4;&#x4ED8;&#x304D;&#x306E;&#x8DB3;&#x5834;&#x306E;&#x6392;&#x6C34;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x7406;&#x8AD6;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3002;

&#xC774; &#xACC4;&#xC0B0; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xAC74;&#xC124; &#xAE30;&#xACC4; &#xC784;&#xB300; vascularized &#xD558; &#xACE0; &#xC120;&#xBC15; &#xB8E8;&#xBA58; &#xBD95;&#xAD34; &#xC5C6;&#xC774; &#xB07C;&#xC5B9;&#xB294;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xACF5;&#xC131; &#xAC74;&#xC124; &#xAE30;&#xACC4; &#xC784;&#xB300;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xBC30;&#xC218; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD608;&#xAD00; transmural &#xC555;&#xB825;-&#xACF5;&#xC900; lumenal&#xACFC; &#xC911;&#xAC04; &#xC555;&#xB825;-&#xCC28;&#xC774; &#xBD95;&#xAD34;&#xB97C; &#xD53C;&#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC784;&#xACC4;&#xAC12; &#xAC12;&#xC744; &#xCD08;&#xACFC; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB378; &#xD615;&#xC0C1; &#xB4F1;&#xBC29;&#xC131; &#xBE44; &#xACC4;, &#xBC30;&#xC218; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558;&#xB294; &#xAC1C;&#xBC29; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC721;&#xAC01;&#xD615; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD608;&#xAD00; &#xBC0F; &#xD608;&#xAD00; &#xBCBD;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBC30;&#xC218; &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; &#xBE44; &#xACC4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC720;&#xCCB4; &#xD750;&#xB984; &#xAC01;&#xAC01; Navier-&#xC2A4;&#xD1A1; &#xC2A4; &#xBC29;&#xC815;&#xC2DD;&#xACFC; Starling&#xC758; &#xBC95;&#xCE59;&#xC758; &#xC5EC;&#xACFC;, &#xB2E4;&#xC544;&#xC2DC;&#xC758; &#xBC95;&#xCE59;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC9C0;&#xBC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC01; &#xBC30;&#xC218; &#xCC44;&#xB110; &#xC778;&#xADFC; &#xC120;&#xBC15;, &#xD608;&#xAD00; &#xAE30;&#xD558;&#xD559;&#xACFC; &#xD608;&#xAD00; &#xBCBD;&#xC758; &#xBE44; &#xACC4; &#xC720;&#xC555; &#xC18D;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xD589;&#xB3D9; &#xBC18;&#xACBD;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xC784;&#xACC4;&#xAC12; transmural &#xC555;&#xB825;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; microvascular &#xC870;&#xC9C1; &#xACF5;&#xD559;&#xC5D0; &#xC801;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xBC0F; &#xAC74;&#xC124; &#xAE30;&#xACC4; &#xC784;&#xB300; &#xAD00;&#xB958;&#xC640; &#xB9C8;&#xC74C;&#xC5D0; &#xBC30;&#xC218; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Vascularized &#xAC74;&#xC124; &#xAE30;&#xACC4; &#xC784;&#xB300;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC30;&#xC218; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC804;&#xC0B0; &#xC124;&#xACC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Este estudio computacional analiza c&oacute;mo dise&ntilde;ar un sistema de drenaje para andamios porosos para que los andamios pueden ser vascularizados y perfundidos sin colapso de los l&uacute;menes de la embarcaci&oacute;n. Postulamos que la presi&oacute;n transmural vascular--la diferencia entre las presiones intersticiales y lumenal--debe superar un umbral para evitar el colapso. Modelo geometr&iacute;as consisti&oacute; en matrices hexagonales de canales abiertos en un andamio isotr&oacute;pico, en el que un peque&ntilde;o subconjunto de canales fue seleccionado para el drenaje. Flujo de fluidos a trav&eacute;s de los vasos y canal de drenaje, a trav&eacute;s de la pared vascular y el andamio se rigen por ecuaciones de Navier-Stokes, Ley de filtraci&oacute;n de Starling y ley de Darcy, respectivamente. Encontramos que cada canal de drenaje podr&iacute;a mantener una presi&oacute;n transmural de umbral s&oacute;lo en los vasos cercanos, con un radio de acci&oacute;n depende de geometr&iacute;a vascular y las propiedades hidr&aacute;ulicas de la pared vascular y el andamio. Ilustramos c&oacute;mo estos resultados pueden ser aplicados a la ingenier&iacute;a de tejido microvascular y sugieren que los andamios dise&ntilde;arse con perfusi&oacute;n y drenaje en mente.

Dise&ntilde;o computacional de sistemas de drenaje para andamios vascularizados.

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&#x5BF9;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x6DB2;&#x5FAE;&#x8840;&#x7BA1;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x80F6;&#x539F;&#x51DD;&#x80F6;&#x529F;&#x80FD;&#x673A;&#x68B0;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

This work examines how mechanical signals affect the barrier function and stability of engineered human microvessels in microfluidic type I collagen gels. Constructs that were exposed to chronic low flow displayed high permeabilities to bovine serum albumin and 10 kDa dextran, numerous focal leaks, low size selectivity, and short lifespan of less than one week. Higher flows promoted barrier function and increased longevity; at the highest flows, the barrier function rivaled that observed in vivo, and all vessels survived to day 14. By studying the physiology of microvessels of different geometries, we established that shear stress and transmural pressure were the dominant mechanical signals that regulated barrier function and vascular stability, respectively. In microvessels that were exposed to high flow, elevation of intracellular cyclic AMP further increased the selectivity of the barrier and strongly suppressed cell proliferation. Computational models that incorporated stress dependence successfully predicted vascular phenotype. Our results indicate that the mechanical microenvironment plays a major role in the functionality and stability of engineered human microvessels in microfluidic collagen gels.

Effect of mechanical factors on the function of engineered human blood microvessels in microfluidic collagen gels.

Cet ouvrage examine comment les signaux m&eacute;caniques affecter la fonction de barri&egrave;re et de stabilit&eacute; d&#39;ing&eacute;nierie microvaisseaux humaines en microfluidique gels de collag&egrave;ne de type I. Des constructions qui ont &eacute;t&eacute; expos&eacute;es &agrave; des d&eacute;bits d&#39;&eacute;tiage chronique affichent haute perm&eacute;abilit&eacute; &agrave; l&#39;albumine s&eacute;rique bovine et 10 kDa dextran, nombreuses fuites focales, s&eacute;lectivit&eacute; de faible taille et courte dur&eacute;e de vie de moins d&#39;une semaine. Fonction de barri&egrave;re de flux promus plus &eacute;lev&eacute;e et une long&eacute;vit&eacute; accrue ; &agrave; des flux plus &eacute;lev&eacute;s, la fonction de barri&egrave;re rivalisait avec celle observ&eacute;e in vivo et tous les navires ont surv&eacute;cu au jour 14. Par l&#39;&eacute;tude de la physiologie des microvaisseaux de g&eacute;om&eacute;tries diff&eacute;rentes, nous avons &eacute;tabli que la contrainte de cisaillement et de la pression transmurale &eacute;taient les signaux m&eacute;caniques dominantes qui r&eacute;gissait la fonction barri&egrave;re et stabilit&eacute; vasculaire, respectivement. Dans les microvaisseaux expos&eacute;es &agrave; haut d&eacute;bit, &eacute;l&eacute;vation du taux d&#39;AMP cyclique intracellulaire a encore augment&eacute; la s&eacute;lectivit&eacute; de la barri&egrave;re et fortement r&eacute;prim&eacute; la prolif&eacute;ration cellulaire. Mod&egrave;les de calcul qui a incorpor&eacute; la d&eacute;pendance de stress avec succ&egrave;s pr&eacute;disaient ph&eacute;notype vasculaire. Nos r&eacute;sultats indiquent que le microenvironnement m&eacute;canique joue un r&ocirc;le majeur dans la fonctionnalit&eacute; et la stabilit&eacute; d&#39;ing&eacute;nierie microvaisseaux humaines dans les gels collag&egrave;ne microfluidiques.

Effet de facteurs m&eacute;caniques sur la fonction des microvaisseaux machin&eacute; de sang humain dans les gels collag&egrave;ne microfluidiques.

Diese Arbeit untersucht, wie mechanische Signale beeinflussen die Barrierefunktion und Stabilit&auml;t der manipulierte Mensch Microvessels in mikrofluidische Typ I Kollagen-Gele. Konstrukte, die chronische low-Flow ausgesetzt waren hohe Flutbarkeitswerte, Rinderserumalbumin und 10 kDa Dextran, zahlreiche fokale Lecks, geringe Gr&ouml;&szlig;e Selektivit&auml;t und kurze Lebensdauer von weniger als einer Woche angezeigt. H&ouml;here Str&ouml;me gef&ouml;rdert Barrierefunktion und erh&ouml;hte Langlebigkeit; am h&ouml;chsten Str&ouml;me &uuml;berlebt die Barrierefunktion wetteifern in Vivo, und alle Schiffe beobachten, 14. Tag. Durch das Studium der Physiologie der Microvessels verschiedene Geometrien, haben wir festgestellt, dass Schubspannung und Transmural Druck waren die dominierenden mechanische Signale, die Barrierefunktion und vaskul&auml;re Stabilit&auml;t bzw. reguliert. In Microvessels, die high-Flow ausgesetzt waren, Erh&ouml;hung von intrazellul&auml;ren zyklischem AMP verst&auml;rkt die Selektivit&auml;t der Barriere und stark unterdr&uuml;ckt Zellproliferation. Berechnungsmodelle, die Spannung Abh&auml;ngigkeit erfolgreich integriert vorhergesagt vaskul&auml;re Ph&auml;notyp. Unsere Ergebnisse zeigen, dass die mechanische Untersuchungsverfahren eine wichtige Rolle in der Funktionalit&auml;t und Stabilit&auml;t des entwickelten menschlichen Microvessels in mikrofluidische Kollagen Gelen spielt.

Mechanische Faktoren Auswirkungen auf die Funktion der manipulierte Menschenblut Microvessels in mikrofluidische Kollagen Gelen.

Questo lavoro esamina come meccanica segnali possono influenzare la funzione di barriera e stabilit&agrave; di ingegneria umana Talengectasia in microfluidica gel di collagene di tipo I. Costrutti che sono stati esposti a basso flusso cronica visualizzato ad alta permeabilit&agrave; all&#39;albumina di siero bovino e 10 kDa Destrano, numerose perdite focali, selettivit&agrave; bassa dimensione e breve durata di meno di una settimana. Funzione di barriera flussi promossi maggiore e maggiore longevit&agrave;; presso i flussi pi&ugrave; alti, la funzione di barriera rivaleggiava con quello osservato in vivo e tutte le navi sopravvissuta al giorno 14. Studiando la fisiologia del Talengectasia di diverse geometrie, abbiamo stabilito che shear stress e pressione transmurale erano i segnali meccanici dominanti che regolavano la funzione barriera e stabilit&agrave; vascolare, rispettivamente. In Talengectasia che sono stati esposti ad alto flusso, elevazione dell&#39;AMP ciclico intracellulare aumentato ulteriormente la selettivit&agrave; della barriera e fortemente soppressa la proliferazione cellulare. Modelli computazionali che incorporato con successo lo stress dipendenza predetto fenotipo vascolare. I nostri risultati indicano che il microambiente meccanico gioca un ruolo importante nella funzionalit&agrave; e stabilit&agrave; di ingegneria umana Talengectasia in gel di collagene microfluidica.

Effetto dei fattori meccanici sulla funzione del sangue umano ingegnerizzati Talengectasia in gel di collagene microfluidica.

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&#xC774; &#xC791;&#xD488; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xAE30;&#xACC4; &#xC2E0;&#xD638; &#xC7A5;&#xBCBD; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xBC0F; &#xC5D4;&#xC9C0;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; microvessels &#xACB0;&#xD569;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC824; &#xD0C0;&#xC785;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9CC;&#xC131; &#xB0AE;&#xC740; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xAD6C;&#xBB38; &#xC18C; &#xD608; &#xCCAD; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; &#xBC0F; 10 kDa dextran, &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xCD08;&#xC810; &#xB204;&#xC218;, &#xB0AE;&#xC740; &#xD06C;&#xAE30; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xBC0F; 1 &#xC8FC;&#xC77C; &#xBBF8;&#xB9CC;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xC218;&#xBA85; &#xB192;&#xC740; permeabilities&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xB192;&#xC740; &#xD750;&#xB984; &#xC2B9;&#xC9C4; &#xC7A5;&#xBCBD; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC7A5; &#xC218;; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0; &#xC7A5;&#xBCBD; &#xAE30;&#xB2A5; rivaled vivo &#xBC0F; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC120;&#xBC15;&#xC5D0;&#xB294; &#xD558;&#xB8E8;&#xC5D0; 14&#xC5D0; &#xC0B4;&#xC544;&#xB0A8;&#xC558;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30; &#xD558; &#xB3C4;&#xD615; microvessels&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC804;&#xB2E8; &#xC751;&#xB825; &#xBC0F; transmural &#xC555;&#xB825; &#xADDC;&#xC81C; &#xC7A5;&#xBCBD; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xD608;&#xAD00; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xAC01;&#xAC01; &#xC9C0;&#xBC30;&#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xACC4; &#xC2E0;&#xD638; &#xD588;&#xB2E4; &#xC124;&#xB9BD;. &#xB192;&#xC740; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; microvessels&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC21C;&#xD658; &#xC570;&#xD504;&#xC758; &#xACE0;&#xB3C4; &#xCD94;&#xAC00; &#xC7A5;&#xC560;&#xBB3C;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C;. &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC758;&#xC874;&#xB3C4; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD569; &#xC804;&#xC0B0; &#xBAA8;&#xB378; &#xC608;&#xCE21; &#xD608;&#xAD00; &#xD615;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAE30;&#xACC4; microenvironment &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xC870;&#xC791;&#xB41C; &#xC778;&#xAC04; microvessels &#xBBF8;&#xC138; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC824;&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xBBF8;&#xC138; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC824;&#xC5D0;&#xC11C; microvessels &#xC124;&#xACC4;&#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;.

Este trabajo examina como mec&aacute;nica se&ntilde;ales afectan la funci&oacute;n de barrera y estabilidad de ingenier&iacute;a humana microvasos en microfluidos geles de col&aacute;geno de tipo I. Construcciones que fueron expuestas a flujo bajo cr&oacute;nico muestran altas permeabilidades de alb&uacute;mina s&eacute;rica bovina y dextran 10 kDa, numerosas fugas focales, selectividad de bajo tama&ntilde;o y vida corta de menos de una semana. Funci&oacute;n de barrera flujos promovidos m&aacute;s alta y mayor longevidad; en los flujos m&aacute;s altos, la funci&oacute;n de barrera rivaliz&oacute; con lo observado en vivo y todos los buques sobrevivieron hasta el d&iacute;a 14. Mediante el estudio de la fisiolog&iacute;a de los microvasos de distintas geometr&iacute;as, establecimos que la tensi&oacute;n de esquileo y presi&oacute;n transmural eran las se&ntilde;ales mec&aacute;nicas dominantes que regulaci&oacute;n la funci&oacute;n de la barrera y la estabilidad vascular, respectivamente. En microvasos que fueron expuestos a alto flujo, elevaci&oacute;n de intracelular de AMP c&iacute;clico aument&oacute; a&uacute;n m&aacute;s la selectividad de la barrera y fuertemente reprimida la proliferaci&oacute;n celular. Modelos computacionales que incorporaba la dependencia de estr&eacute;s con &eacute;xito predijeron fenotipo vascular. Nuestros resultados indican que el microambiente mec&aacute;nico desempe&ntilde;a un papel importante en la funcionalidad y estabilidad de ingenier&iacute;a humana microvasos en geles de col&aacute;geno de microfluidos.

Efecto de factores mec&aacute;nicos en la funci&oacute;n de ingenier&iacute;a sangre humana microvasos en geles de col&aacute;geno de microfluidos.

&#x672C;&#x7AE0;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86;&#x4E00;&#x9879;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x91CF;&#x5316;&#x5176;&#x6E17;&#x900F;&#x5230;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x5F62;&#x6210;&#x5F00;&#x653E;&#x76AE;&#x7BA1;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7BA1;&#x7531;&#x5408;&#x6D41;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x7684;&#x704C;&#x6D41;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x80F6;&#x539F;&#x51DD;&#x80F6;&#x4E2D;&#x5FAE;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x7BA1;&#x5B50;&#x7684;&#x5706;&#x67F1;&#x51E0;&#x4F55;&#x6A21;&#x4EFF;&#x5FAE;&#x8840;&#x7BA1;&#x4F53;&#x5185; &#xFF1B; &#x7684;&#x5F62;&#x72B6;&#x5B83;&#x5141;&#x8BB8;&#x540C;&#x65F6;&#x6216;&#x91CD;&#x590D;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x6E17;&#x900F;&#x7CFB;&#x6570;&#x548C;&#x7126;&#x6CC4;&#x6F0F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4F53;&#x5916;&#x6A21;&#x578B;&#x6765;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5BF9;&#x5FAE;&#x8840;&#x7BA1;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6B63;&#x5728;&#x4E3A;&#x6570;&#x7EC4;&#x7684;&#x5FAE;&#x8840;&#x7BA1;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x3002;

&#x5F62;&#x6210;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x5FAE;&#x8840;&#x7BA1;&#x7BA1;&#x548C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5176;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x6E17;&#x900F;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

This chapter describes a protocol for forming open endothelial tubes in vitro and quantifying their permeability to macromolecules. These tubes consist of confluent monolayers of human microvascular endothelial cells in perfused microfluidic collagen gels. The cylindrical geometry of the tubes mimics the shape of microvessels in vivo; it allows simultaneous and/or repeated measurements of permeability coefficients and detection of focal leaks. We have used these in vitro models to test the effects of agonists on microvascular permeability and are developing arrays of microvascular tubes to enable large-scale testing.

Methods for forming human microvascular tubes in vitro and measuring their macromolecular permeability.

Ce chapitre d&eacute;crit un protocole pour le formage des tubes endoth&eacute;liales ouverts in vitro et de quantifier leur perm&eacute;abilit&eacute; aux macromol&eacute;cules. Ces tubes sont constitu&eacute;s de monocouches confluentes de cellules endoth&eacute;liales microvasculaires humaines dans les gels collag&egrave;ne microfluidique perfus&eacute;. La g&eacute;om&eacute;trie cylindrique des tubes imite la forme des microvaisseaux in vivo ; Il permet simultan&eacute;ment et/ou r&eacute;p&eacute;t&eacute;e des mesures des coefficients de perm&eacute;abilit&eacute; et la d&eacute;tection de fuites de la focales. Nous ont utilis&eacute; ces mod&egrave;les in vitro pour tester les effets des agonistes sur la perm&eacute;abilit&eacute; microvasculaire et mettent au point les tableaux de tubes microvasculaires pour permettre un d&eacute;pistage &agrave; grande &eacute;chelle.

M&eacute;thodes de formage des tubes microvasculaires humaines in vitro et de mesurer leur perm&eacute;abilit&eacute; macromol&eacute;culaire.

Dieses Kapitel beschreibt ein Protokoll f&uuml;r bilden offene endothelial Tubes in Vitro und ihre Durchl&auml;ssigkeit f&uuml;r Makromolek&uuml;le zu quantifizieren. Diese Rohre bestehen aus konfluierende Monolayers des menschlichen mikrovaskul&auml;re Endothelzellen in durchblutete mikrofluidische Kollagen Gelen. Die zylindrische Geometrie der Rohre ahmt die Form des Microvessels in-vivo; Es erm&ouml;glicht gleichzeitige und/oder wiederholte Messungen der Durchl&auml;ssigkeit Koeffizienten und Nachweis von fokalen Lecks. Wir haben diese in-vitro-Modelle verwendet, um die Auswirkungen der Agonisten auf mikrovaskul&auml;re Permeabilit&auml;t testen und entwickeln Arrays mikrovaskul&auml;re R&ouml;hren umfangreiche Tests zu aktivieren.

Methoden f&uuml;r die Bildung der menschlichen mikrovaskul&auml;re Rohre in-vitro- und messen ihre Makromolekulare Durchl&auml;ssigkeit.

Questo capitolo descrive un protocollo per formatura tubi aperti endoteliali in vitro e quantificare la loro permeabilit&agrave; alle macromolecole. Questi tubi sono costituiti di Monostrati confluenti di umane cellule endoteliali Microvascolari in gel di collagene microfluidica perfusi. La geometria dei tubi cilindrica imita la forma di Talengectasia in vivo; permette di simultanea e/o ripetute misurazioni dei coefficienti di permeabilit&agrave; e rilevamento di perdite di focale. Ci hanno usato questi modelli in vitro per testare gli effetti di agonisti sulla permeabilit&agrave; microvascolare e matrici di tubi microvascolare per consentire la sperimentazione su larga scala sono in via di sviluppo.

Metodi per formatura tubi microvascolare umane in vitro e loro permeabilit&agrave; macromolecolare di misurazione.

&#x3053;&#x306E;&#x7AE0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x5F62;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30F3;&#x5185;&#x76AE;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6; in vitro &#x8A66;&#x9A13;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x704C;&#x6D41;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3; &#x30FB; &#x30B2;&#x30EB;&#x5185;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x5358;&#x5C64;&#x819C;&#x306E;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5186;&#x7B52;&#x5F62;&#x72B6;&#x306E;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x5FAA;&#x74B0;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x6A21;&#x5023;;&#x540C;&#x6642;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7126;&#x70B9;&#x30EA;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3068;&#x900F;&#x6C34;&#x4FC2;&#x6570;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; in vitro &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x8840;&#x7BA1;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x8A66;&#x9A13;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

In vitro &#x3072;&#x3068;&#x8840;&#x7BA1;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x6210;&#x5F62;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x900F;&#x78C1;&#x7387;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#xC774; &#xC7A5; &#xD615;&#xC131; &#xC624;&#xD508; &#xB0B4; &#xD53C; &#xD29C;&#xBE0C; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; &#xBC0F; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD22C;&#xACFC;&#xC728;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD29C;&#xBE0C; confluent monolayers perfused &#xBBF8;&#xC138; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC824;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; microvascular &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD29C;&#xBE0C;&#xC758; &#xC6D0;&#xD1B5;&#xD615; &#xD615;&#xC0C1;&#xC744; &#xBAA8;&#xBC29;&#xD55C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;; microvessels&#xC758; &#xBAA8;&#xC591; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC218; &#xB610;&#xB294; &#xBC18;&#xBCF5; &#xB418;&#xB294; &#xCE68;&#xD22C;&#xC131; &#xACC4;&#xC218; &#xCE21;&#xC815; &#xBC0F; &#xCD08;&#xC810; &#xB204;&#xC218; &#xD0D0;&#xC9C0;. &#xC6B0;&#xB9AC; microvascular &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;&#xC5D0; agonists&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCCB4; &#xC678; &#xBAA8;&#xB378; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; microvascular &#xD29C;&#xBE0C;&#xC758; &#xBC30;&#xC5F4;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; microvascular &#xD29C;&#xBE0C; &#xCCB4; &#xC678;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790; &#xD22C;&#xACFC;&#xC728; &#xCE21;&#xC815; &#xBC29;&#xBC95;.

Este cap&iacute;tulo describe un protocolo para tubos endoteliales abiertos formando en vitro y cuantificar su permeabilidad a las macromol&eacute;culas. Estos tubos consisten en monocapas confluentes de c&eacute;lulas endoteliales microvasculares humanas en geles de col&aacute;geno microflu&iacute;dicos inundada. La geometr&iacute;a cil&iacute;ndrica de los tubos imita la forma de microvasos in vivo; permite simult&aacute;nea y/o repetir las mediciones de los coeficientes de permeabilidad y detecci&oacute;n de fugas focales. Hemos utilizado estos modelos in vitro para probar los efectos de los agonistas en la permeabilidad microvascular y est&aacute;n desarrollando matrices de tubos microvasculares para comprobar a gran escala.

Gavrielle Price

Center for Engineering in Medicine

Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, Shriners Hospitals for Children

Decellularization and Recellularization of Whole Livers

Gavrielle Price

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Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School, Shriners Hospitals for Children

Decellularization and Recellularization of Whole Livers

Center for Engineering in Medicine