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DNA Methylation: Bisulphite Modification and Analysis

Epigenetics describes the heritable changes in gene function that occur independently to the DNA sequence. The molecular basis of epigenetic gene ...

Garvan Institute of Medical Research

&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684; cytosines &#x663E;&#x793A;&#x4E3A;&#x5E8F;&#x5217;&#x53D8;&#x5F02;&#x540E;&#x4E9A;&#x786B;&#x9178;&#x6CBB;&#x7597;&#x548C;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (PCR) &#x6269;&#x589E;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (MSP)&#xFF0C;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x80CC;&#x666F; unmethylated DNA &#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x3002;MSP &#x7ECF;&#x5E38;&#x7528;&#x6765;&#x6807;&#x8BC6;&#x5728;&#x764C;&#x53D8;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x80FD;&#x7ED3;&#x5408;&#x63A2;&#x9488;&#x5B9E;&#x65F6;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x6269;&#x589E;&#x4EA7;&#x7269;&#x7684; PCR &#x6269;&#x589E;&#x9636;&#x6BB5;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8367;&#x5149;&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B; (MethyLight)&#x3002;&#x4E9A;&#x786B;&#x9178;&#x6C22;&#x94A0;&#x6CBB;&#x7597;&#x671F;&#x95F4;&#x5DF2;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x8F6C;&#x6362;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x662F;&#x7ECF;&#x5E38; coamplified &#x5728; MSP&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x9AD8;&#x4F30;&#x4E86; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x7531;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x6216;&#x9650;&#x5236;&#x6458;&#x8981;&#xFF0C;&#x53EF;&#x786E;&#x5B9A;&#x90E8;&#x5206;&#x672A;&#x8F6C;&#x6362;&#x6750;&#x6599;&#x6E90;&#x81EA;&#x6269;&#x589E;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x6216;&#x5357;&#x90E8;&#x6C61;&#x70B9;&#x7684; MSPs&#x3002; &#x4EA4;&#x66FF;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x9644;&#x52A0;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x63A2;&#x9488;&#xFF0C;&#x9488;&#x5BF9;&#x672A;&#x8F6C;&#x6362; DNA (ConLight-MSP) &#x5185;&#x5355;&#x4E2A;&#x63A2;&#x9488;&#x53CD;&#x5E94;&#x5408;&#x5E76;&#x8F6C;&#x6362;&#x548C; PCR &#x68C0;&#x6D4B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE; MSP &#x68C0;&#x6D4B;&#x59CB;&#x7EC8;&#x5E94;&#x5305;&#x62EC;&#x68C0;&#x6D4B;&#x672A;&#x8F6C;&#x6362;&#x7684; DNA&#xFF0C;&#x907F;&#x514D;&#x9AD8;&#x4F30;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x6216;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684; DNA &#x6837;&#x672C;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x6B65;&#x3002;

&#x8F6C;&#x6362;&#x7279;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9E;&#x65F6;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94; (ConLight-MSP) &#x4EE5;&#x907F;&#x514D;&#x8BEF;&#x62A5;&#x7684; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

Methylated cytosines appear as sequence variations following bisulfite treatment and polymerase chain reaction (PCR) amplification. By using methylation-specific PCR (MSP), it is possible to detect methylated sequences in a background of unmethylated DNA with a high level of sensitivity. MSP is frequently used to identify methylated alleles in carcinogenesis, and may be combined with the TaqMan real-time PCR system, which uses fluorescence-based detection of amplification products during the amplification phase of the PCR and increases the sensitivity of detection (MethyLight). Sequences that have been incompletely converted during the bisulfite treatment are frequently coamplified during MSP, resulting in an overestimation of DNA methylation. The presence of amplified sequences originating from partially unconverted material may be determined by sequencing or by restriction digests or Southern blots of MSPs. Alternately, we have developed a method where the PCR and conversion assay are combined within a single TaqMan reaction by using an additional fluorescent probe directed against unconverted DNA (ConLight-MSP). We recommend that MSP detection always should include a step to detect unconverted DNA to avoid overestimation of the frequency or level of methylated DNA in the sample.

Conversion-specific detection of DNA methylation using real-time polymerase chain reaction (ConLight-MSP) to avoid false positives.

Cytosines m&#xE9;thyl&#xE9;es apparaissent comme des variations de s&#xE9;quence suivant un traitement au bisulfite et de la r&#xE9;action en cha&#xEE;ne par polym&#xE9;rase (PCR). En utilisant la m&#xE9;thylation sp&#xE9;cifique PCR (MSP), il est possible de d&#xE9;tecter des s&#xE9;quences m&#xE9;thyl&#xE9;es dans un contexte de l&#x26;#39;ADN non m&#xE9;thyl&#xE9; avec un haut niveau de sensibilit&#xE9;. MSP est fr&#xE9;quemment utilis&#xE9; pour identifier les all&#xE8;les m&#xE9;thyl&#xE9;s dans la canc&#xE9;rogen&#xE8;se, et peut &#xEA;tre combin&#xE9; avec le TaqMan en temps r&#xE9;el syst&#xE8;me de PCR, qui utilise la d&#xE9;tection bas&#xE9;e sur la fluorescence des produits d&#x26;#39;amplification au cours de la phase d&#x26;#39;amplification de la PCR et augmente la sensibilit&#xE9; de d&#xE9;tection (MethyLight). Les s&#xE9;quences qui ont &#xE9;t&#xE9; partiellement convertis au cours du traitement au bisulfite sont fr&#xE9;quemment coamplified cours MSP, ce qui entra&#xEE;ne une surestimation de la m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN. La pr&#xE9;sence de s&#xE9;quences amplifi&#xE9;es provenant des mati&#xE8;res partiellement non converti peut &#xEA;tre d&#xE9;termin&#xE9;e par s&#xE9;quen&#xE7;age ou par restriction dig&#xE8;re ou Southern blots de MSP. Sinon, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une m&#xE9;thode o&#xF9; le PCR et le dosage de conversion sont combin&#xE9;s au sein d&#x26;#39;une seule r&#xE9;action TaqMan en utilisant une sonde fluorescente suppl&#xE9;mentaires dirig&#xE9;s contre l&#x26;#39;ADN non converti (ConLight-MSP). Nous recommandons que la d&#xE9;tection MSP doit toujours comporter une &#xE9;tape pour d&#xE9;tecter l&#x26;#39;ADN non converti pour &#xE9;viter une surestimation de la fr&#xE9;quence ou le niveau de l&#x26;#39;ADN m&#xE9;thyl&#xE9; dans l&#x26;#39;&#xE9;chantillon.

Conversion sp&#xE9;cifique de d&#xE9;tection de m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN utilisant en temps r&#xE9;el (Polymerase Chain Reaction ConLight-MSP) pour &#xE9;viter les faux positifs

Conversion-spezifischen Nachweis von DNA-Methylierung mittels real-time Polymerase-Kettenreaktion (Conlight-MSP), Fehlalarme zu vermeiden.

Cytosines metilati appaiono come variazioni di sequenza seguente amplificazione di bisolfito trattamento e polymerase chain reaction (PCR). Mediante PCR metilazione-specifico (MSP), &egrave; possibile rilevare le sequenze metilati in uno sfondo di DNA non metilato con un alto livello di sensibilit&agrave;. MSP &egrave; spesso utilizzato per identificare gli alleli metilati in cancerogenesi e pu&ograve; essere combinato con il TaqMan sistema PCR in tempo reale, che utilizza la fluorescenza-rilevamento dei prodotti di amplificazione durante la fase di amplificazione di PCR e aumenta la sensibilit&agrave; di rilevamento (MethyLight). Sequenze che sono state convertite in modo incompleto durante il trattamento del bisolfuro sono frequentemente coamplified durante MSP, risultante in una sovrastima di metilazione del DNA. La presenza di sequenze amplificate provenienti da materiale parzialmente non convertiti possa essere determinata mediante sequenziamento o di restrizione digest o Southern Blot di MSPs. alternativamente, abbiamo sviluppato un metodo dove il saggio PCR e conversione &egrave; combinato all&#39;interno di una singola reazione TaqMan utilizzando un&#39;ulteriore sonda fluorescente diretta contro DNA non convertito (ConLight-MSP). &Egrave; consigliabile che il rilevamento MSP sempre dovrebbe includere un passo per rilevare DNA non convertito per evitare sovrastima della frequenza o a livello del DNA metilato nel campione.

Rilevamento di conversione specifici di metilazione del DNA mediante reazione a catena della polimerasi in tempo reale (ConLight-MSP) per evitare falsi positivi.

&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30B7;&#x30C8;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x4E9C;&#x786B;&#x9178;&#x6C34;&#x7D20;&#x5869;&#x51E6;&#x7406;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC;&#xFF08;PCR&#xFF09;&#x5897;&#x5E45;&#x5F8C;&#x306B;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x7279;&#x7570;&#x7684;PCR&#xFF08;MSP&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x611F;&#x5EA6;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x975E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;DNA&#x306E;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002; MSP&#x306F;&#x3001;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x767A;&#x764C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;PCR&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x5897;&#x5E45;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#xFF08;MethyLight&#xFF09;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;TaqMan&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;PCR&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x4E9C;&#x786B;&#x9178;&#x6C34;&#x7D20;&#x5869;&#x51E6;&#x7406;&#x4E2D;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x914D;&#x5217;&#x304C;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x904E;&#x5927;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;MSP&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5171;&#x5897;&#x5E45;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x7269;&#x8CEA;&#x306B;&#x7531;&#x6765;&#x3059;&#x308B;&#x5897;&#x5E45;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30FC;&#x30AF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5236;&#x9650;&#x9175;&#x7D20;&#x6D88;&#x5316;&#x3084;MSP&#x306E;&#x30B5;&#x30B6;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EA4;&#x4E92;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;PCR&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5909;&#x63DB;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x672A;&#x5909;&#x63DB;DNA&#xFF08;ConLight-MSP&#xFF09;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;TaqMan&#x53CD;&#x5FDC;&#x306B;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;MSP&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306F;&#x3001;&#x5E38;&#x306B;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x4E2D;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;DNA&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x3084;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x904E;&#x5927;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x672A;&#x5909;&#x63DB;DNA&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x507D;&#x967D;&#x6027;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x9023;&#x9396;&#x53CD;&#x5FDC;&#xFF08;ConLight-MSP&#xFF09;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;

Methylated cytosines &#xD669;&#xC0B0; &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (PCR) &#xD655;&#xB300;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xD615;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xD2B9;&#xC815; PCR (MSP)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC10;&#xB3C4; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; unmethylated DNA&#xC758; &#xBC30;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; methylated &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xBD88;&#xAC00;&#xB2A5;. MSP &#xC790;&#xC8FC; &#xBC1C;&#xC554;, methylated &#xB300;&#xB9BD;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; TaqMan &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;, PCR&#xC758; &#xC99D;&#xD3ED; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3D9;&#xC548; &#xC99D;&#xD3ED; &#xC81C;&#xD488;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xAE30;&#xBC18; &#xAC80;&#xC0C9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xAC80;&#xC0C9; (MethyLight)&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xD568;&#xAED8; &#xACB0;&#xD569; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD88;&#xC644;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xD669;&#xC0B0; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB3C4;&#xC911; &#xBCC0;&#xD658; &#xB41C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; MSP, DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC758; &#xC5EC;&#xC720; &#xC788;&#xAC8C; &#xC608;&#xCE21; &#xACB0;&#xACFC; &#xC911; coamplified &#xC790;&#xC8FC;. &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBE44;&#xC804;&#xD5A5;&#xB41C; &#xC7AC;&#xB8CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC99D;&#xD3ED;&#xB41C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xB294; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2F1; &#xB610;&#xB294; &#xAE08;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xC774;&#xC81C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB610;&#xB294; MSPs. &#xB0A8;&#xBD80;&#xB3C4; &#xB9D0; &#xB610;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; PCR &#xBC0F; &#xBCC0;&#xD658; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E8;&#xC77C; TaqMan &#xBC18;&#xC751; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC804;&#xD5A5;&#xB41C; DNA (ConLight-MSP)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xB3C5; &#xCD94;&#xAC00; &#xD615;&#xAD11; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xD569; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. MSP &#xD0D0;&#xC9C0; &#xD56D;&#xC0C1; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC758; &#xC5EC;&#xC720; &#xC788;&#xAC8C; &#xC608;&#xCE21; &#xB610;&#xB294; &#xC218;&#xC900;&#xC758; methylated DNA &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC744; &#xD53C;&#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xBE44;&#xC804;&#xD5A5;&#xB41C; DNA&#xB97C; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD574;&#xC57C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751; (ConLight-MSP)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC00;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xD53C;&#xD558;&#xB824;&#xACE0; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; &#xAD00;&#xB828; &#xAC10;&#xC9C0;.

Citosinas metiladas aparecen como variaciones en la secuencia despu&#xE9;s del tratamiento con bisulfito y la reacci&#xF3;n en cadena de polimerasa (PCR). Mediante el uso de PCR espec&#xED;fica de metilaci&#xF3;n (MSP), es posible detectar secuencias metilados en un fondo de ADN metilado con un alto nivel de sensibilidad. MSP se utiliza con frecuencia para identificar los alelos metilados en la carcinog&#xE9;nesis, y puede ser combinado con el TaqMan en tiempo real del sistema de PCR, que utiliza la fluorescencia basada en la detecci&#xF3;n de productos de amplificaci&#xF3;n durante la fase de amplificaci&#xF3;n de la PCR y aumenta la sensibilidad de detecci&#xF3;n (MethyLight). Las secuencias que han sido completamente convertidos durante el tratamiento de bisulfito con frecuencia durante la coamplified MSP, dando lugar a una sobreestimaci&#xF3;n de la metilaci&#xF3;n del ADN. La presencia de secuencias amplificadas procedentes de material parcialmente no convertido puede ser determinada mediante secuenciaci&#xF3;n o por digestiones de restricci&#xF3;n o transferencias Southern de tama&#xF1;o mediano. Alternativamente, hemos desarrollado un m&#xE9;todo donde la PCR y ensayo de conversi&#xF3;n se combinan en una sola reacci&#xF3;n TaqMan mediante una sonda fluorescente adicional dirigido contra el ADN no convertida (ConLight-MSP). Se recomienda que la detecci&#xF3;n MSP debe incluir siempre un paso para detectar el ADN no convertidos para evitar la sobreestimaci&#xF3;n de la frecuencia o el nivel de ADN metilado en la muestra.

Conversi&#xF3;n de detecci&#xF3;n espec&#xED;fica de la metilaci&#xF3;n del ADN utilizando la reacci&#xF3;n en cadena de la polimerasa (ConLight-MSP) para evitar falsos positivos

&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6269;&#x589E;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x7531;&#x7684;&#x5F15;&#x7269;&#x5E8F;&#x5217;&#x548C;&#x9000;&#x706B;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#x51B3;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x65B0;&#x7684; PCR &#x6280;&#x672F;&#x9274;&#x522B;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5185;&#x6269;&#x589E;&#x5B50;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;5&#39; &#x6269;&#x5C55;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5305;&#x542B;&#x5728;&#x5BF9;&#x5E94;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6269;&#x589E;&#x4E4B;&#x4E00;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A; &#xFF08;&#x6216;&#x4E24;&#x4E2A;&#xFF09; primer(s)&#x3002;&#x590D;&#x5236;&#x5E76;&#x5C06;&#x7EB3;&#x5165;&#x6B64;&#x5E8F;&#x5217;&#x7136;&#x540E;&#x5C31;&#x80FD;&#x591F;&#x56DE;&#x6765;&#xFF0C;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7684; PCR &#x4EA7;&#x7269;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5185;&#x90E8;&#x5E8F;&#x5217;&#x9000;&#x706B;&#x548C;&#x603B;&#x7406;&#x5230;&#x7A97;&#x4F53;&#x540E;&#x53D1;&#x5939;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF1A; &#x6B64;&#x7ED3;&#x6784;&#x662F;&#x7136;&#x540E;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x653E;&#x5927;&#x5230;&#x96BE;&#x6CBB;&#x6027;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x542B;&#x6709; 5&#39; &#x6269;&#x5C55;&#x5B8C;&#x7F8E;&#x5730;&#x5339;&#x914D;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x6269;&#x589E;&#x88AB;&#x51CF;&#x5F31;&#xFF0C;&#x800C;&#x5E8F;&#x5217;&#x5305;&#x542B;&#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#x6216;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x6269;&#x589E;&#x4E0D;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709; Headloop pcr &#x6280;&#x672F;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x5DF2;&#x4E9A;&#x786B;&#x9178;&#x6CBB;&#x7597;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x653E;&#x5927;&#x5230; 10 5 &#x500D;&#x8FC7;&#x91CF;&#x7684; unmethylated &#x5E8F;&#x5217;&#x5728;&#x5728;&#x573A;&#x7684;&#x4EBA; GSTP1 &#x57FA;&#x56E0;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684; DNA&#x3002;Headloop &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x540E;&#x4E9A;&#x786B;&#x9178;&#x6CBB;&#x7597;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5173;&#x4E8E;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6269;&#x589E;&#x5E8F;&#x5217;&#x53D8;&#x5F02;&#x6216;&#x7A81;&#x53D8;&#x5B58;&#x5728;&#x8FC7;&#x91CF;&#x7684;&#x5BC6;&#x5207;&#x76F8;&#x5173;&#x7684; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7532;&#x57FA;&#x5316; Dna &#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;

Headloop &#x6291;&#x5236;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x53CA;&#x5176;&#x5BF9;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6269;&#x589E;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x3002;

Selective amplification in PCR is principally determined by the sequence of the primers and the temperature of the annealing step. We have developed a new PCR technique for distinguishing related sequences in which additional selectivity is dependent on sequences within the amplicon. A 5' extension is included in one (or both) primer(s) that corresponds to sequences within one of the related amplicons. After copying and incorporation into the PCR product this sequence is then able to loop back, anneal to the internal sequences and prime to form a hairpin structure-this structure is then refractory to further amplification. Thus, amplification of sequences containing a perfect match to the 5' extension is suppressed while amplification of sequences containing mismatches or lacking the sequence is unaffected. We have applied Headloop PCR to DNA that had been bisulphite-treated for the selective amplification of methylated sequences of the human GSTP1 gene in the presence of up to a 10(5)-fold excess of unmethylated sequences. Headloop PCR has a potential for clinical application in the detection of differently methylated DNAs following bisulphite treatment as well as for selective amplification of sequence variants or mutants in the presence of an excess of closely related DNA sequences.

Headloop suppression PCR and its application to selective amplification of methylated DNA sequences.

Amplification s&#xE9;lective dans la PCR est principalement d&#xE9;termin&#xE9;e par la s&#xE9;quence des amorces et la temp&#xE9;rature de l&#x26;#39;&#xE9;tape de recuit. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; une nouvelle technique PCR pour distinguer les s&#xE9;quences apparent&#xE9;es dans lesquelles la s&#xE9;lectivit&#xE9; suppl&#xE9;mentaire d&#xE9;pend de s&#xE9;quences au sein de l&#x26;#39;amplicon. D&#x26;#39;extension en 5 &#x26;#39;est inclus dans une (ou deux) amorce (s) qui correspond &#xE0; des s&#xE9;quences dans l&#x26;#39;une des amplicons li&#xE9;s. Une fois la copie et l&#x26;#39;incorporation dans le produit de PCR de cette s&#xE9;quence est alors en mesure de boucle de retour, recuit des s&#xE9;quences internes et les premiers pour former une &#xE9;pingle &#xE0; cheveux structure de cette structure est alors r&#xE9;fractaire &#xE0; une amplification suppl&#xE9;mentaire. Ainsi, l&#x26;#39;amplification de s&#xE9;quences contenant un match parfait &#xE0; l&#x26;#39;extension de la 5 &#x26;#39;est supprim&#xE9;e tandis que l&#x26;#39;amplification de s&#xE9;quences contenant des m&#xE9;sappariements ou d&#xE9;pourvu de la s&#xE9;quence n&#x26;#39;est pas affect&#xE9;e. Nous avons appliqu&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;ADN par PCR Headloop qui avait &#xE9;t&#xE9; bisulfite-trait&#xE9;e pour l&#x26;#39;amplification s&#xE9;lective de s&#xE9;quences m&#xE9;thyl&#xE9;s de l&#x26;#39;humain GSTP1 g&#xE8;ne en pr&#xE9;sence d&#x26;#39;un maximum de une 10 (5) fois sup&#xE9;rieure &#xE0; s&#xE9;quences non m&#xE9;thyl&#xE9;s. Headloop PCR a un potentiel d&#x26;#39;application clinique dans la d&#xE9;tection d&#x26;#39;ADN m&#xE9;thyl&#xE9;es diff&#xE9;remment suivant le traitement de bisulfite ainsi que pour l&#x26;#39;amplification s&#xE9;lective de s&#xE9;quences variantes ou les mutants de la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;un exc&#xE8;s de s&#xE9;quences d&#x26;#39;ADN &#xE9;troitement apparent&#xE9;es.

R&#xE9;pression Headloop PCR et son application &#xE0; l&#x26;#39;amplification s&#xE9;lective de s&#xE9;quences d&#x26;#39;ADN m&#xE9;thyl&#xE9;s

Headloop Unterdr&#xFC;ckung PCR und ihre Anwendung auf die selektive Amplifikation der methylierten DNA-Sequenzen.

Amplificazione selettiva di PCR &egrave; determinato principalmente dalla sequenza dei primer e la temperatura del passaggio ricottura. Abbiamo sviluppato una nuova tecnica PCR per distinguere sequenze correlate in cui ulteriore selettivit&agrave; dipende da sequenze all&#39;interno dell&#39;amplicone. Un&#39;estensione di 5&#39; &egrave; incluso in primer(s) uno (o entrambi) che corrisponde alle sequenze all&#39;interno di uno delle relative sequenze amplificate. Dopo copia e incorporazione del prodotto di PCR, questa sequenza &egrave; quindi in grado di loop indietro, tempri le sequenze interne e prime per formare una struttura struttura-questo tornante poi &egrave; refrattaria all&#39;ulteriore amplificazione. Cos&igrave;, amplificazione di sequenze contenenti un fiammifero perfetto per l&#39;estensione di 5&#39; &egrave; soppresso mentre l&#39;amplificazione di sequenze contenenti discordanze o manca la sequenza non viene influenzato. Noi abbiamo applicato Headloop PCR del DNA che era stati trattati bisolfito per l&#39;amplificazione selettiva di metilato sequenze del gene GSTP1 umano in presenza di fino a 5-fold eccesso di sequenze non metilati. Headloop PCR ha un potenziale di applicazione clinica nella rilevazione di DNAs diversamente metilato dopo il trattamento di bisolfito pure per quanto riguarda l&#39;amplificazione selettiva di varianti di sequenza o mutanti in presenza di un eccesso di sequenze di DNA strettamente correlati.

Sequenze di soppressione Headloop PCR e la sua applicazione all&#39;amplificazione selettiva di DNA metilato.

PCR&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x5897;&#x5E45;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x30A2;&#x30CB;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x306E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x306E;&#x9806;&#x5E8F;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x304C;&#x5897;&#x5E45;&#x7523;&#x7269;&#x5185;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x95A2;&#x9023;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;PCR&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 5 &#x26;#39;&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B3;&#x30F3;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x5185;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#xFF08;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#xFF09;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#xFF08;S&#xFF09;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PCR&#x7523;&#x7269;&#x306B;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x304C;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x914D;&#x5217;&#x3068;&#x9996;&#x76F8;&#x306B;&#x30A2;&#x30CB;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x69CB;&#x9020;&#x3053;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x5897;&#x5E45;&#x306B;&#x96E3;&#x6CBB;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x304B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x6B20;&#x304F;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x304C;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;5 &#x26;#39;&#x62E1;&#x5F35;&#x5B50;&#x306B;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x4E00;&#x81F4;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x304C;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x914D;&#x5217;&#x306E;10&#xFF08;5&#xFF09;&#x500D;&#x904E;&#x5270;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;GSTP1&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x5897;&#x5E45;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E9C;&#x786B;&#x9178;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x305F;DNA&#x306B;Headloop PCR&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; Headloop PCR&#x6CD5;&#x306F;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;DNA&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x914D;&#x5217;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x5897;&#x5E45;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E9C;&#x786B;&#x9178;&#x51E6;&#x7406;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;DNA&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x5FDC;&#x7528;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Headloop&#x30B5;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;PCR&#x3068;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;DNA&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x5897;&#x5E45;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;

&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC99D;&#xD3ED; PCR&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB1CC;&#xAD00;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC5B4; &#xB2D0; &#xB9C1; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC628;&#xB3C4; &#xC758;&#xD574; &#xC8FC;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xCD94;&#xAC00; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; amplicon &#xB0B4;&#xC758; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xB97C; &#xAD6C;&#xBCC4;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; PCR &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 5&#39; &#xD655;&#xC7A5; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; amplicons &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xD558;&#xB098; (&#xB610;&#xB294; &#xB458; &#xBAA8;&#xB450;) primer(s)&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC5C6;&#xC774;&#xC774; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; &#xB2E4;&#xC2DC;, &#xBC18;&#xBCF5; &#xC218; PCR &#xC81C;&#xD488;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; anneal &#xACE0; &#xC591;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xD504;&#xB77C;&#xC784; &#xD6C4; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; &#xAD6C;&#xC870;-&#xC774; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xB354; &#xC99D;&#xD3ED; &#xB0B4; &#xD654; &#xB2E4;&#xC74C;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, 5&#39; &#xD655;&#xC7A5;&#xC744; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xC77C;&#xCE58;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xD655;&#xB300; &#xC99D;&#xD3ED; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC5B5;&#xC555; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; bisulphite unmethylated &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; 10 (5)-&#xBC30; &#xCD08;&#xACFC;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; GSTP1 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; methylated &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB41C; dna Headloop PCR&#xC744; &#xC801;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Headloop PCR &#xB2E4;&#xB974;&#xAC8C; methylated DNAs bisulphite &#xCE58;&#xB8CC; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xB610;&#xD55C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD574;&#xC11C;&#xB294; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCC0;&#xC885; &#xB610;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACFC;&#xB3C4; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xD0D0;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC784;&#xC0C1; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Headloop &#xC5B5;&#xC81C; PCR &#xBC0F; methylated DNA&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC99D;&#xD3ED;&#xC744; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;.

Amplificaci&#xF3;n selectiva en la PCR se determina principalmente por la secuencia de los cebadores y la temperatura de la etapa de recocido. Hemos desarrollado una nueva t&#xE9;cnica de PCR para distinguir las secuencias relacionadas en el que la selectividad adicional depende de las secuencias dentro de la amplificaci&#xF3;n. Una extensi&#xF3;n 5 &#x26;#39;est&#xE1; incluido en una (o ambas) cebador (s) que corresponde a las secuencias dentro de uno de los amplicones relacionados. Despu&#xE9;s de la copia y la incorporaci&#xF3;n en el producto de PCR esta secuencia es entonces capaz de volver bucle, recocido a las secuencias internas y primos para formar una estructura de horquilla-esta estructura es entonces refractario a la amplificaci&#xF3;n adicional. As&#xED;, la amplificaci&#xF3;n de secuencias que contienen una combinaci&#xF3;n perfecta para la extensi&#xF3;n 5 &#x26;#39;, mientras que se suprime la amplificaci&#xF3;n de secuencias que contienen desajustes o carece de la secuencia no se ve afectada. Hemos aplicado Headloop PCR para ADN que hab&#xED;a sido tratada con bisulfito para la amplificaci&#xF3;n selectiva de secuencias metiladas del gen humano GSTP1 en la presencia de hasta un 10 (5) veces el exceso de secuencias no metilados. Headloop PCR tiene un potencial para la aplicaci&#xF3;n cl&#xED;nica en la detecci&#xF3;n de ADN metilado diferente despu&#xE9;s del tratamiento bisulfito as&#xED; como para la amplificaci&#xF3;n selectiva de variantes de secuencia o mutantes en presencia de un exceso de secuencias de ADN estrechamente relacionadas.

Headloop represi&#xF3;n de PCR y su aplicaci&#xF3;n a la amplificaci&#xF3;n selectiva de secuencias de ADN metilado

Auparavant, nous avons montr&#xE9; que la suppression du g&#xE8;ne se produit couramment dans le chromosome 2q14.2 dans le cancer colorectal, &#xE0; travers un processus de longue port&#xE9;e sous silence &#xE9;pig&#xE9;n&#xE9;tique (Lres), impliquant une combinaison de m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN et de r&#xE9;pression modifications des histones. Nous avons maintenant de d&#xE9;terminer si Lres se produit &#xE9;galement dans le cancer de la prostate &#xE0; travers cette r&#xE9;gion de 4 Mo et si m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN diff&#xE9;rentiel de 2q14.2 g&#xE8;nes pourrait fournir une formation r&#xE9;gionale de biomarqueurs du cancer de la prostate.

La d&#xE9;r&#xE9;glementation &#xE9;pig&#xE9;n&#xE9;tique travers chromosome 2q14.2 Diff&#xE9;rencier normal &#xE0; partir du cancer de la prostate et fournit un Comit&#xE9; r&#xE9;gional de biomarqueurs de m&#xE9;thylation d&#x26;#39;ADN innovant du cancer du

Zuvor, zeigten wir, dass gen Unterdr&uuml;ckung tritt h&auml;ufig auf Chromosom 2q14.2 bei Dickdarmkrebs, durch einen Prozess der weitr&auml;umigen epigenetische silencing (LRES), mit eine Kombination von DNA-Methylierung und repressiven Histon-Modifikationen. Wir untersuchen nun, ob LRES auch bei Prostatakrebs in dieser 4-Mb-Region auftritt und ob differenzielle DNA-Methylierung von 2q14.2 Genen einen regionalen Bereich Prostatakrebs Biomarker werden kann.

Epigenetische Deregulierung auf Chromosom 2q14.2 unterscheidet normal von Prostatakrebs und bietet einen regionalen Bereich der neuartigen DNA-Methylierung Krebs Biomarker.

In precedenza, vi abbiamo mostrato che soppressione genica si verifica comunemente in tutta 2q14.2 cromosoma nel cancro del colon-retto, attraverso un processo di silenziamento epigenetico a lungo raggio (LRES), che coinvolgono una combinazione di metilazione del DNA e le modifiche dell&#39;istone repressiva. Indaghiamo ora se LRES avviene anche nel cancro della prostata attraverso questa regione di 4 Mb e se i differenziali di metilazione del DNA dei geni 2q14.2 potrebbe fornire un panel regionale di biomarcatori del cancro alla prostata.

Deregolamentazione epigenetici attraverso cromosoma 2q14.2 differenzia normale da cancro alla prostata e fornisce un panel regionale di metilazione del DNA romanzo biomarcatori del cancro.

&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x57FA;&#x56E0;&#x6291;&#x5236;&#x901A;&#x5E38;&#x8DE8;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 2q14.2 &#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x764C;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FDC;&#x7A0B;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x6C89;&#x9ED8; (LRES) &#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x4F1A;&#x53D1;&#x751F;&#x6D89;&#x53CA; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x548C;&#x538B;&#x5236;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x8C03;&#x67E5;&#x662F;&#x5426; LRES &#x4E5F;&#x4F1A;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x4E2D;&#x8FD9; 4 Mb &#x533A;&#x57DF;&#x5404;&#x5730;&#x548C;&#x9274;&#x522B; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684; 2q14.2 &#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x5426;&#x80FD;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x533A;&#x57DF;&#x5C0F;&#x7EC4;&#x7684;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x3002;

&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x653E;&#x677E;&#x7BA1;&#x5236;&#x8DE8;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 2q14.2 &#x533A;&#x5206;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x578B; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x5C0F;&#x7EC4;&#x764C;&#x751F;&#x7269;&#x6807;&#x5FD7;&#x3002;

Previously, we showed that gene suppression commonly occurs across chromosome 2q14.2 in colorectal cancer, through a process of long-range epigenetic silencing (LRES), involving a combination of DNA methylation and repressive histone modifications. We now investigate whether LRES also occurs in prostate cancer across this 4-Mb region and whether differential DNA methylation of 2q14.2 genes could provide a regional panel of prostate cancer biomarkers.

Epigenetic deregulation across chromosome 2q14.2 differentiates normal from prostate cancer and provides a regional panel of novel DNA methylation cancer biomarkers.

&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;DNA&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x6291;&#x5727;&#x7684;&#x306A;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x4FEE;&#x98FE;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x9577;&#x8DDD;&#x96E2;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;LRES&#xFF09;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6291;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x5927;&#x8178;&#x764C;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;2q14.2&#x9593;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;LRES&#x3082;&#x3001;&#x3053;&#x306E;4 MB&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x304C;&#x3093;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3068;2q14.2&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5DEE;&#x306E;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x764C;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x30D1;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3002;

&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;2q14.2&#x30A2;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x898F;&#x5236;&#x7DE9;&#x548C;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x764C;&#x304B;&#x3089;&#x901A;&#x5E38;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x65B0;&#x898F;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x764C;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x30D1;&#x30CD;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF8; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7A5;&#xAC70;&#xB9AC; epigenetic &#xCE68;&#xBB35; (LRES)&#xC758; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB300; &#xC7A5; &#xC554;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 2q14.2&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC640; &#xC5B5;&#xC555; &#xC801;&#xC778; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; &#xC218;&#xC815;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; LRES&#xB3C4; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC5EC;&#xBD80; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554;&#xC5D0;&#xC774; 4&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0;&#xC640; 2q14.2 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xB97C; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xD328;&#xB110;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 2q14.2&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; epigenetic &#xADDC;&#xC81C; &#xC644;&#xD654; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xC0C1;&#xC744; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC554; &#xBC14;&#xC774;&#xC624; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xD328;&#xB110;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Anteriormente, hemos demostrado que la supresi&#xF3;n de genes ocurre com&#xFA;nmente en el cromosoma 2q14.2 en el c&#xE1;ncer colorrectal, a trav&#xE9;s de un proceso de largo alcance el silenciamiento epigen&#xE9;tico (LRE), que implica una combinaci&#xF3;n de metilaci&#xF3;n del ADN y las modificaciones de histonas represivas. Ahora investigar si lres tambi&#xE9;n ocurre en el c&#xE1;ncer de pr&#xF3;stata en toda la regi&#xF3;n de 4 Mb y si la metilaci&#xF3;n del ADN diferencial de los genes 2q14.2 podr&#xED;a proporcionar un panel regional de biomarcadores de c&#xE1;ncer de pr&#xF3;stata.

La desregulaci&#xF3;n epigen&#xE9;tica cromosoma 2q14.2 trav&#xE9;s Diferencia normal de c&#xE1;ncer de pr&#xF3;stata, y dispone de un panel regional de nuevos biomarcadores de ADN del c&#xE1;ncer de metilaci&#xF3;n

&#x6700;&#x597D;&#x7684;&#x5B66;&#x4E60;&#x8C03;&#x6E29;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x53D8;&#x5316;&#x4E4B;&#x4E00;&#x662F;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5370;&#x8FF9;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x5370;&#x8FF9;&#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x5730;&#x533A; (ICRs)&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x5904;&#x7406;&#x5BF9;&#x8868;&#x89C2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x578B;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728; 128 &#x5BF9;&#x540C;&#x5375;&#x53CC; (MZ) &#x53CA; 128 &#x5BF9;&#x53CC;&#x5375;&#x53CC;&#x751F; (DZ) &#x53CC;&#x80DE;&#x80CE;&#xFF0C;&#x5BA1;&#x95EE;&#x7684; IGF2 &#x4E92;&#x8054;&#x3001; H19&#x3001; KCNQ1&#x3001; &#x683C;&#x7EB3;&#x65AF;&#x548C; RUNX1 &#x975E;&#x5370;&#x8FF9;&#x57FA;&#x56E0; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x72B6;&#x6001;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x7532;&#x57FA;&#x5316; MZ &#x548C; DZ &#x53CC;&#x80DE;&#x80CE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x6574;&#x4F53;&#x6A21;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E2A;&#x522B; CpG &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x5728; H19/IGF2 &#x57FA;&#x56E0;&#x4F4D;&#x70B9;&#x7684;&#x53D8;&#x5F02;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x3002;&#x4E00;&#x5B9A;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#xFF0C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x5730;&#x65B9;&#x548C;&#x533A;&#x57DF;&#x7684; CpG &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x975E; MZ &#x548C; DZ &#x4E2A;&#x522B;&#x5BF9;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x534F;&#x8C03;&#x6027;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x548C;&#x8C10;&#x7684;&#x6536;&#x76CA;&#x6216;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5185;&#x4E2A;&#x522B;&#x53CC;&#x6210;&#x5BF9;, &#x90FD;&#x5728; MZ DZ &#x53CC;&#x6210;&#x5BF9;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x8BE5;&#x5FB7;&#x8BFA;&#x6BD4;&#x4EFB;&#x4F55;&#x65F6;&#x5019;&#x90FD;&#x66F4;&#x5E38;&#x89C1;&#x548C;/&#x6216;&#x7EF4;&#x62A4;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5F71;&#x54CD;&#x57FA;&#x7840;&#x7684; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x5730;&#x8BF4;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;rs10732516 &#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21; [] &#x591A;&#x6001;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x5173;&#x952E; ctcf &#x7ED3;&#x6784;&#x57DF;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x4E2D; H19 ICR &#x8F68;&#x8FF9;&#xFF0C;&#x662F;&#x589E;&#x52A0;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E2D;&#x592E;&#x4EBA;&#x6C11;&#x653F;&#x5E9C;&#x7F51;&#x7AD9;&#x5728;&#x4EA7;&#x5987; H19 &#x57FA;&#x56E0;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x4E0E;&#x5F3A;&#x70C8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x57FA;&#x56E0;&#x5BF9;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5F71;&#x54CD;&#x548C;&#x5C55;&#x793A;&#x800C; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x56FD;&#x5BB6;&#x5219;&#x7D27;&#x7D27;&#x5730;&#x4FDD;&#x6301;&#x57FA;&#x56E0;&#x76F8;&#x540C;&#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x4E4B;&#x95F4;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x90A3;&#x91CC;&#x76F8;&#x5F53;&#x5927;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x53D8;&#x5F02;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x75BE;&#x75C5;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x3002;

&#x5BF9;&#x8868;&#x89C2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x8868;&#x73B0;&#x5728;&#x5370;&#x8FF9;&#x5730;&#x533A;&#x6765;&#x81EA;&#x5355;&#x5375;&#x53CC;&#x751F;&#x548C;&#x53CC;&#x5375;&#x53CC;&#x751F;&#x7684;&#x53CC;&#x80DE;&#x80CE;&#x7684; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;

One of the best studied read-outs of epigenetic change is the differential expression of imprinted genes, controlled by differential methylation of imprinted control regions (ICRs). To address the impact of genotype on the epigenome, we performed a detailed study in 128 pairs of monozygotic (MZ) and 128 pairs of dizygotic (DZ) twins, interrogating the DNA methylation status of the ICRs of IGF2, H19, KCNQ1, GNAS and the non-imprinted gene RUNX1. While we found a similar overall pattern of methylation between MZ and DZ twins, we also observed a high degree of variability in individual CpG methylation levels, notably at the H19/IGF2 loci. A degree of methylation plasticity independent of the genome sequence was observed, with both local and regional CpG methylation changes, discordant between MZ and DZ individual pairs. However, concordant gains or losses of methylation, within individual twin pairs were more common in MZ than DZ twin pairs, indicating that de novo and/or maintenance methylation is influenced by the underlying DNA sequence. Specifically, for the first time we showed that the rs10732516 [A] polymorphism, located in a critical CTCF binding site in the H19 ICR locus, is strongly associated with increased hypermethylation of specific CpG sites in the maternal H19 allele. Together, our results highlight the impact of the genome on the epigenome and demonstrate that while DNA methylation states are tightly maintained between genetically identical and related individuals, there remains considerable epigenetic variation that may contribute to disease susceptibility.

Impact of the genome on the epigenome is manifested in DNA methylation patterns of imprinted regions in monozygotic and dizygotic twins.

Un des mieux &#xE9;tudi&#xE9;s lire les aboutissants de changement &#xE9;pig&#xE9;n&#xE9;tique est l&#x26;#39;expression diff&#xE9;rentielle de g&#xE8;nes soumis &#xE0; empreinte, contr&#xF4;l&#xE9;es par la m&#xE9;thylation diff&#xE9;rentielle des r&#xE9;gions de contr&#xF4;le imprim&#xE9;s (RVS). Pour faire face &#xE0; l&#x26;#39;impact du g&#xE9;notype sur l&#x26;#39;&#xE9;pig&#xE9;nome, nous avons effectu&#xE9; une &#xE9;tude d&#xE9;taill&#xE9;e dans 128 paires de jumeaux monozygotes (MZ) et dizygotes 128 paires de (DZ) des jumeaux, d&#x26;#39;interroger le statut de m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN des RVS de IGF2, H19, KCNQ1, GNAS et l&#x26;#39;RUNX1 g&#xE8;ne non-imprim&#xE9;. Alors que nous avons trouv&#xE9; un sch&#xE9;ma similaire globale de m&#xE9;thylation entre jumeaux MZ et DZ, nous avons &#xE9;galement observ&#xE9; un haut degr&#xE9; de variabilit&#xE9; dans les diff&#xE9;rents niveaux de m&#xE9;thylation CpG, notamment au niveau des loci H19/IGF2. Un degr&#xE9; de plasticit&#xE9; m&#xE9;thylation ind&#xE9;pendant de la s&#xE9;quence du g&#xE9;nome a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e, &#xE0; la fois locaux et r&#xE9;gionaux des changements de m&#xE9;thylation CpG, discordante entre MZ et DZ paires individuelles. Toutefois, les gains ou les pertes concordantes de m&#xE9;thylation, au sein de chaque paires de jumeaux &#xE9;taient plus fr&#xE9;quentes chez MZ que les couples jumeaux DZ, ce qui indique que de novo et / ou la m&#xE9;thylation de maintenance est influenc&#xE9;e par la s&#xE9;quence d&#x26;#39;ADN sous-jacent. Plus pr&#xE9;cis&#xE9;ment, pour la premi&#xE8;re fois, nous avons montr&#xE9; que le rs10732516 [A] polymorphisme, situ&#xE9; dans un site de liaison critique FCCT dans le locus H19 ICR, est fortement associ&#xE9;e &#xE0; une hyperm&#xE9;thylation accru de sites CpG sp&#xE9;cifiques dans le H19 maternelle all&#xE8;le. Ensemble, nos r&#xE9;sultats mettent en &#xE9;vidence l&#x26;#39;impact du g&#xE9;nome sur l&#x26;#39;&#xE9;pig&#xE9;nome et de d&#xE9;montrer que si les Etats m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN sont &#xE9;troitement maintenu entre individus g&#xE9;n&#xE9;tiquement identiques et connexes, il reste consid&#xE9;rable variation &#xE9;pig&#xE9;n&#xE9;tique qui peut contribuer &#xE0; la susceptibilit&#xE9; aux maladies.

Impact de la g&#xE9;nomique sur la Epigenome se manifeste dans les profils de m&#xE9;thylation d&#x26;#39;ADN de r&#xE9;gions imprim&#xE9;e dans jumeaux monozygotes et dizygotes

Ist eines der am besten untersuchten Auslesen der epigenetische Ver&auml;nderungen der differenziellen Ausdruck der eingepr&auml;gten Gene, durch differenzielle Methylierung der eingepr&auml;gten Steuerelement Regionen (ICRs) gesteuert. Um die Auswirkungen des Genotyps auf die Epigenome zu l&ouml;sen, f&uuml;hrten wir eine detaillierte Studie in 128 Paare von eineiigen (MZ) und 128 paar zweieiigen Zwillinge (DZ), Abfragen mithilfe des DNA-Methylierung Status der ICRs IGF2, H19, KCNQ1, GNAS und nicht bedruckte gen RUNX1. W&auml;hrend wir ein &auml;hnliches allgemeine Muster der Methylierung zwischen MZ und DZ Zwillinge gefunden, beobachteten wir auch ein hohes Ma&szlig; an Variabilit&auml;t der einzelnen CpG Methylierung Ebenen, vor allem auf die H19/IGF2-Loci. Ein Ma&szlig; an Methylierung Plastizit&auml;t unabh&auml;ngig von der Genom-Sequenz wurde, mit lokalen und regionalen CpG Methylierung &Auml;nderungen, uneinigen zwischen MZ und DZ einzelne Paare beobachtet. Jedoch konkordanten Gewinne oder Verluste der Methylierung, innerhalb einzelner zwei Paare wurden h&auml;ufiger bei MZ als DZ Zweibettzimmer-Paaren, die angibt, dass de-Novo bzw. Wartung Methylierung wird beeinflusst durch die zugrunde liegenden DNA-Sequenz. Insbesondere ist zum ersten Mal, das wir, dass die rs10732516 zeigten [A] Polymorphismus, befindet sich in einem kritischen CTCF-Bindungsstelle in der H19-ICR-Locus, stark verbunden mit erh&ouml;hter Hypermethylierung spezifische CpG-Sites in der m&uuml;tterlichen H19-Allel. Gemeinsam unsere Ergebnisse die Auswirkungen des Genoms auf die Epigenome und zeigen, dass w&auml;hrend der DNA-Methylierung Staaten eng zwischen genetisch identische und &auml;hnliche Personen verwaltet werden, bleibt es erhebliche epigenetische Unterschiede, die zu Krankheit Anf&auml;lligkeit beitragen kann.

Auswirkungen des Genoms auf die Epigenome manifestiert sich in DNA-Methylierungsmuster eingepr&auml;gten Regionen bei eineiigen und zweieiigen Zwillingen.

Uno dei migliori letture ha studiati dei cambiamenti epigenetici &egrave; l&#39;espressione differenziale dei geni imprinted, controllata da differenziali di metilazione di regioni di controllo impresso (ICRs). Per affrontare l&#39;impatto del genotipo sull&#39;Epigenoma, abbiamo effettuato uno studio dettagliato in 128 coppie di monozigoti (MZ) e 128 coppie dizigote gemelli (DZ), interrogare lo stato di metilazione del DNA della ICRs di IGF2, H19, KCNQ1, GNAS e il gene non impresse RUNX1. Mentre abbiamo trovato un simile modello complessivo di metilazione tra gemelli MZ e DZ, abbiamo anche osservato un alto grado di variabilit&agrave; nei singoli livelli di metilazione CpG, in particolare presso i loci H19/IGF2. Un certo grado di plasticit&agrave; metilazione indipendente della sequenza del genoma &egrave; stato osservato, con variazioni locali e regionali metilazione CpG, discordante tra singole coppie MZ e DZ. Tuttavia, concordanti guadagni o perdite di metilazione, all&#39;interno di coppie di gemelli singoli erano pi&ugrave; comuni in MZ di coppie di gemelli DZ, indicando che de novo o metilazione di mantenimento &egrave; influenzata dalla sequenza del DNA sottostante. In particolare, per la prima volta che vi abbiamo mostrato il rs10732516 [A] polimorfismo, che si trova in un sito di legame CTCF critico nel locus H19 ICR, &egrave; fortemente associato con aumentato ipermetilazione dei siti CpG specifici allele H19 materna. Insieme, i nostri risultati evidenziano l&#39;impatto del genoma sull&#39;Epigenoma e dimostrano che mentre gli Stati di metilazione del DNA sono strettamente mantenuti tra individui geneticamente identici e correlati, rimane considerevole variazione epigenetica che possa contribuire alla predisposizione di malattia.

Impatto del genoma sull&#39;Epigenoma si manifesta in schemi di metilazione del DNA delle regioni impresso in gemelli monozigoti e dizigote.

&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x53D6;&#x308A;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x5237;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x5236;&#x5FA1;&#x9818;&#x57DF;&#xFF08;ICR&#x306E;&#xFF09;&#x306E;&#x5DEE;&#x52D5;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5DEE;&#x6B21;&#x7684;&#x767A;&#x73FE;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E0A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x578B;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;IGF2&#x3001;H19&#x3001;KCNQ1&#x3001;GNAS&#x306E;ICR&#x306E;&#x306E;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x554F;&#x3044;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3001;&#x4E00;&#x5375;&#x6027;&#x53CC;&#x751F;&#x5150;&#xFF08;MZ&#xFF09;&#x306E;128&#x30DA;&#x30A2;&#x3068;&#x4E8C;&#x5375;&#x6027;&#x53CC;&#x751F;&#x5150;&#xFF08;DZ&#xFF09;&#x53CC;&#x5B50;&#x306E;128&#x7D44;&#x3067;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3092;&#x884C;&#x3044;&#x3001;&#x975E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;RUNX1&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;MZ&#x3068;DZ&#x53CC;&#x5B50;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7279;&#x306B;H19/IGF2&#x5EA7;&#x3067;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;CpG&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306F;&#x8033;&#x969C;&#x308A;MZ&#x3068;DZ&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;CpG&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3001;&#x3068;&#x3001;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x53CC;&#x5B50;&#x306E;&#x30DA;&#x30A2;&#x5185;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x305F;&#x640D;&#x76CA;&#x306F;de novo&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7DAD;&#x6301;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;DNA&#x914D;&#x5217;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;DZ&#x53CC;&#x5B50;&#x30DA;&#x30A2;&#x3088;&#x308A;&#x3082;MZ&#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x305D;&#x308C;rs10732516 [A] H19 ICR&#x8ECC;&#x8DE1;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;CTCF&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x591A;&#x578B;&#x306F;&#x3001;&#x5F37;&#x304F;&#x6BCD;&#x6027;H19&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;CpG&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3001;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x72B6;&#x614B;&#x304C;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x540C;&#x4E00;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x500B;&#x4EBA;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x7DAD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x75BE;&#x60A3;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x6B8B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

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&#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xACF5;&#xBD80; &#xC9C0;&#xC694; epigenetic &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xD558;&#xB098; &#xCC0D;&#xD78C;&#xB41C; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xC601;&#xC5ED; (ICRs)&#xC758; &#xCC28;&#xB3D9; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xCC0D;&#xD78C;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC2DD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Epigenome&#xC5D0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD615;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; monozygotic (MZ) 128 &#xC30D;&#xACFC; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC; IGF2 ICRs, H19, KCNQ1, &#xADF8; &#xB098; &#xC2A4;&#xC640; &#xBE44; &#xAC01; &#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; RUNX1 &#xC9C8;&#xBB38; &#xB780; (DZ) &#xC30D;&#xB465;&#xC774;&#xC758; 128 &#xC30D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xC138;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC218;&#xD589;. &#xB3D9;&#xC548; &#xC6B0;&#xB9AC; MZ&#xC640; DZ &#xC30D;&#xB465;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBA54; &#xD2F8;&#xC758; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; H19/IGF2 loci&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xAC1C;&#xBCC4; CpG &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC758; &#xAD00;&#xCC30;. &#xBA54; &#xD2F8; &#xC18C;&#xC131; &#xAC8C;&#xB188; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC758; &#xC815;&#xB3C4; &#xAD00;&#xCC30;, &#xB85C;&#xCEEC; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xC5ED; CpG &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xBCC0;&#xD654; MZ&#xC640; DZ &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC30D; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBD88;&#xD611;&#xD654;&#xC74C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC870;&#xD654; &#xB41C; &#xC774;&#xC775; &#xB610;&#xB294; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC30D;&#xB465;&#xC774; &#xC30D; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA54; &#xD2F8;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4; DZ &#xC30D;&#xB465;&#xC774; &#xC30D;, &#xADF8; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xBCF4;&#xB2E4; MZ&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801; &#xB610;&#xB294; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xAE30;&#xBCF8; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; rs10732516 &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; H19 ICR &#xB85C;&#xCEE4; &#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; CTCF &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; [A] &#xB2E4;&#xD615;&#xC131; &#xBAA8;&#xC790; H19 &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; CpG &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; hypermethylation &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; epigenome&#xC5D0; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC804;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3D9;&#xC77C; &#xD558; &#xACE0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xAC1C;&#xC778; &#xAC04;&#xC758; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC720;&#xC9C0; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xAC70;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; epigenetic &#xBCC0;&#xD654; &#xB0A8;&#xC544; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Epigenome&#xC5D0; &#xAC8C;&#xB188;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5; &#xBC0F; &#xB780; monozygotic &#xC30D;&#xB465;&#xC774;&#xC5D0; &#xCC0D;&#xD78C; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xD328;&#xD134;&#xC5D0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098; &#xC2E0;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Wenjia Qu

Epigenetics Group,
Cancer Research Program,
Epigenetics Group, Cancer Research Program

Garvan Institute of Medical Research

DNA Methylation: Bisulphite Modification and Analysis

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Garvan Institute of Medical Research

DNA Methylation: Bisulphite Modification and Analysis

Epigenetics Group,
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