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A Microfluidic Device for Studying Multiple Distinct Strains

The study of cell responses to environmental changes poses many experimental challenges: cells need to be imaged under changing conditions, often in a ...

Tel Aviv University

Cell-to-cell variability in the timing of cell-fate changes can be advantageous for a population of single-celled organisms growing in a fluctuating environment. We study timing variability during meiosis in Saccharomyces cerevisiae, initiated upon nutritional starvation. We use time-lapse fluorescence microscopy to measure the timing of meiotic events in single cells and find that the duration of meiosis is highly variable between cells. This variability is concentrated between the beginning of starvation and the onset of early meiosis genes. Cell-cycle variability and nutritional history have little effect on this timing variability. Rather, variation in the production rate of the meiotic master regulator Ime1 and its gradual increase over time govern this variability, and cell size effects are channeled through Ime1. These results tie phenotypic variability with expression dynamics of a transcriptional regulator and provide a general framework for the study of temporal developmental processes.

Dissecting timing variability in yeast meiosis.

&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x53D8;&#x5F02;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x4E8E;&#x5355;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5728;&#x8D77;&#x4F0F;&#x4E0D;&#x5B9A;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x4E0D;&#x65AD;&#x589E;&#x957F;&#x7684;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#xFF0C;&#x8425;&#x517B;&#x9965;&#x997F;&#x540E;&#x5F00;&#x59CB;&#x8FDB;&#x884C;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7814;&#x7A76;&#x65F6;&#x95F4;&#x53D8;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5EF6;&#x65F6;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5355;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5B89;&#x6392;&#x548C;&#x67E5;&#x627E;&#xFF0C;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x65F6;&#x95F4;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D8;&#x91CF;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D8;&#x5316;&#x662F;&#x9965;&#x997F;&#x7684;&#x96C6;&#x4E2D;&#x5F00;&#x59CB;&#x4E0E;&#x53D1;&#x75C5;&#x65E9;&#x671F;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x53D8;&#x5F02;&#x6027;&#x548C;&#x8425;&#x517B;&#x7684;&#x5386;&#x53F2;&#x6709;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65F6;&#x95F4;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5C0F;&#x3002;&#x76F8;&#x53CD;&#xFF0C;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x4E3B;&#x8C03;&#x8282;&#x5668; Ime1 &#x7684;&#x4EA7;&#x7387;&#x53D8;&#x5316;&#x548C;&#x968F;&#x7740;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#x9010;&#x6B65;&#x589E;&#x52A0;&#x6CBB;&#x7406;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53EF;&#x53D8;&#x6027;&#xFF0C;&#x800C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5927;&#x5C0F;&#x5F71;&#x54CD;&#x6D41;&#x7ECF; Ime1&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x914D;&#x5408;&#x8868;&#x8FBE;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x53D8;&#x5F02;&#x548C;&#x65F6;&#x6001;&#x53D1;&#x5C55;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x603B;&#x7684;&#x6846;&#x67B6;&#x3002;

&#x5939;&#x5C42;&#x65F6;&#x95F4;&#x53D8;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x51CF;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x3002;

Variabilit&eacute; de cellule &agrave; cellule du calendrier des changements cellulaires-sort peut &ecirc;tre avantageuse pour une population d&#39;organismes unicellulaires qui poussent dans un environnement fluctuant. Nous &eacute;tudions la variabilit&eacute; de chronom&eacute;trage au cours de la m&eacute;iose chez Saccharomyces cerevisiae, ouvert &agrave; la famine nutritionnelle. Nous utilisons la microscopie de fluorescence time-lapse pour mesurer la chronologie des &eacute;v&eacute;nements m&eacute;iotiques dans des cellules individuelles et de trouver que la dur&eacute;e de la m&eacute;iose est tr&egrave;s variable entre les cellules. Cette variabilit&eacute; est concentr&eacute;e entre le d&eacute;but de la famine et l&#39;apparition des g&egrave;nes pr&eacute;coces de la m&eacute;iose. Variabilit&eacute; du cycle cellulaire et l&#39;histoire nutritionnel ont peu d&#39;effet sur la variabilit&eacute; de ce calendrier. Au contraire, la variation du taux de production du Ma&icirc;tre r&eacute;gulateur Ime1 m&eacute;iotique et son augmentation progressive au fil du temps r&eacute;gissent cette variabilit&eacute;, et effets de taille des cellules sont achemin&eacute;s par le biais de Ime1. Ces r&eacute;sultats Attachez la variabilit&eacute; ph&eacute;notypique avec la dynamique de l&#39;expression d&#39;un r&eacute;gulateur transcriptionnel et fournissent un cadre g&eacute;n&eacute;ral pour l&#39;&eacute;tude des processus de d&eacute;veloppement temporels.

Dissection variabilit&eacute; de chronom&eacute;trage lors de la m&eacute;iose de levure.

Zell-Zell-Variabilit&auml;t in der Zeitpunkt der Zelle-Schicksal &Auml;nderungen kann vorteilhaft f&uuml;r eine Bev&ouml;lkerung von Einzeller in wechselnder Umgebung wachsen sein. Wir studieren Zeitmessung Variabilit&auml;t w&auml;hrend der Meiose in Saccharomyces Cerevisiae, initiierte auf Ern&auml;hrung Hunger. Wir verwenden Zeitraffer Fluoreszenzmikroskopie zu messen das Timing der meiotischen Ereignisse in Einzelzellen und finde, dass die Dauer der Meiose sehr Variable zwischen Zellen. Diese Variabilit&auml;t ist zwischen dem Anfang des Hungers und der Beginn der fr&uuml;hen Meiose Gene konzentriert. Zellzyklus Variabilit&auml;t und Ern&auml;hrung Geschichte haben wenig Auswirkung auf diese Timing-Variabilit&auml;t. Stattdessen Variation in die Produktionsrate des meiotischen Meister Reglers Ime1 und seine allm&auml;hliche Steigerung im Laufe der Zeit Regeln diese Variabilit&auml;t und Zelle Gr&ouml;&szlig;e Effekte sind durch Ime1 kanalisierten. Diese Ergebnisse tie ph&auml;notypische Variabilit&auml;t mit Ausdruck Dynamik der transcriptional Regulator und stellen einen allgemeinen Rahmen f&uuml;r die Untersuchung der zeitlichen Entwicklungsprozesse.

Zeitmessung Variabilit&auml;t in Hefe Meiose sezieren.

Cella a variabilit&agrave; nel calendario di cambiamenti di destino delle cellule pu&ograve; essere vantaggioso per una popolazione di singoli-celled organismi in crescita in un ambiente fluttuante. Studiamo la variabilit&agrave; di temporizzazione durante la meiosi in Saccharomyces cerevisiae, avviato su fame nutrizionale. Usiamo la microscopia di fluorescenza time-lapse per misurare i tempi degli eventi meiotica in cellule singole e trovare che la durata della meiosi &egrave; altamente variabile tra le cellule. Questa variabilit&agrave; &egrave; concentrata tra l&#39;inizio della fame e l&#39;insorgenza dei primi geni meiosi. Variabilit&agrave; del ciclo cellulare e la storia nutrizionale hanno poco effetto su questa variabilit&agrave; di temporizzazione. Piuttosto, variazione del tasso di produzione del regolatore master meiotic Ime1 e relativo aumento graduale nel tempo governano questa variabilit&agrave;, ed effetti della dimensione delle cellule sono incanalati attraverso Ime1. Questi risultati legano variabilit&agrave; fenotipica con dinamiche di espressione di un regolatore di transcriptional e forniscono un quadro generale per lo studio dei processi di sviluppo temporali.

Variabilit&agrave; di temporizzazione in meiosi lievito di dissezione.

&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x5909;&#x52D5;&#x306F;&#x5909;&#x52D5;&#x74B0;&#x5883;&#x3067;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x5358;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x3092;&#x6709;&#x5229;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6804;&#x990A;&#x98E2;&#x9913;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3001;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x5909;&#x52D5;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x53EF;&#x5909;&#x30BB;&#x30EB;&#x9593;&#x3067;&#x3059;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30D7;&#x30B9;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x98E2;&#x9913;&#x306E;&#x59CB;&#x307E;&#x308A;&#x3068;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x75C7;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x3068;&#x6804;&#x990A;&#x306E;&#x6B74;&#x53F2;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3080;&#x3057;&#x308D;&#x3001;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50; Ime1 &#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x7387;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x5F90;&#x3005; &#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x3092;&#x652F;&#x914D;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB; &#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x52B9;&#x679C; Ime1 &#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x5909;&#x52D5;&#x3092;&#x30CD;&#x30AF;&#x30BF;&#x30A4;&#x3057;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x767A;&#x9054;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x6E1B;&#x6570;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30BF;&#x30A4;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x5909;&#x52D5;&#x3092;&#x89E3;&#x5256;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D;&#xC5D0; &#xC140; &#xBCC0;&#xB3D9;&#xC131; &#xBCC0;&#xB3D9; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xB9AC;&#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; meiosis&#xC5D0; Saccharomyces cerevisiae, &#xC601;&#xC591; &#xAE30;&#xC544;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D; &#xBCC0;&#xD654; &#xC5F0;&#xAD6C;. &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC140;&#xC758; meiotic &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xC758; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; meiosis &#xAE30;&#xAC04;&#xC740; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC140; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBCC0;&#xC218; &#xCC3E;&#xC744;. &#xC774; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC740; &#xAE30;&#xC544; &#xC2DC;&#xC791;&#xACFC; &#xCD08;&#xAE30; meiosis &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xC0AC;&#xC774; &#xC9D1;&#xC911;. &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xBCC0;&#xD654; &#xBC0F; &#xC601;&#xC591; &#xC5ED;&#xC0AC;&#xAC00; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;. &#xC624;&#xD788;&#xB824;, meiotic &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; &#xADE4; ime1&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC810;&#xC9C4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC774; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xBC0F; &#xC140; &#xD06C;&#xAE30; &#xD6A8;&#xACFC; ime1&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD45C;&#xCD9C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; transcriptional &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC2DD; &#xC5ED;&#xD559; phenotypic &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC744; &#xBB36;&#xC5B4; &#xACE0; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xACFC;&#xC815;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD6A8; &#xBAA8; meiosis&#xC5D0; &#xD0C0;&#xC774;&#xBC0D; &#xBCC0;&#xD654; &#xD574; &#xBD80;.

Variabilidad de la c&eacute;lula a c&eacute;lula en el momento de los cambios de destino celular puede ser ventajosa para una poblaci&oacute;n de organismos unicelulares que crecen en un entorno fluctuante. Estudiamos la variabilidad del tiempo durante la meiosis en Saccharomyces cerevisiae, iniciado al hambre nutricional. Utilizamos microscop&iacute;a de fluorescencia de lapso de tiempo para medir el calendario de eventos mei&oacute;ticas en celdas individuales y encontrar que la duraci&oacute;n de la meiosis es altamente variable entre las c&eacute;lulas. Esta variabilidad se concentra entre el comienzo de la hambruna y la aparici&oacute;n de los primeros genes de la meiosis. Variabilidad del ciclo celular e historia nutricional tienen poco efecto sobre la variabilidad de este tiempo. Por el contrario, variaci&oacute;n en la tasa de producci&oacute;n del regulador principal mei&oacute;tica Ime1 y su aumento gradual con el tiempo rigen esta variabilidad, y efectos del tama&ntilde;o celular se canalizan a trav&eacute;s de Ime1. Estos resultados atan variabilidad fenot&iacute;pica con la din&aacute;mica de la expresi&oacute;n de un regulador transcripcional y proporcionan un marco general para el estudio de los procesos de desarrollo temporales.

Variabilidad de la sincronizaci&oacute;n en la meiosis de la levadura de la disecci&oacute;n.

HIV-1 positive feedback and lytic fate.

La r&eacute;troaction positive du VIH-1 et sort lytique.

HIV-1 positive R&uuml;ckmeldungen und lytische Schicksal.

Feedback positivo HIV-1 e destino litico.

HIV-1 &#x306E;&#x6B63;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x6EB6;&#x89E3;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3002;

&#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xD53C;&#xB4DC;&#xBC31;&#xACFC; &#xC6A9;&#xADE0;&#xC131; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Comentarios positivos de VIH-1 y destino l&iacute;tica.

&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x79EF;&#x6781;&#x53CD;&#x9988;&#x548C;&#x88C2;&#x89E3;&#x7684;&#x547D;&#x8FD0;&#x3002;

Transcriptional responses often consist of regulatory modules - sets of genes with a shared expression pattern that are controlled by the same regulatory mechanisms. Previous methods allow dissecting regulatory modules from genomics data, such as expression profiles, protein-DNA binding, and promoter sequences. In cases where physical protein-DNA data are lacking, such methods are essential for the analysis of the underlying regulatory program.

BRNI: Modular analysis of transcriptional regulatory programs.

R&eacute;ponses transcriptionnelles sont souvent consistant de modules r&eacute;glementaires - ensembles de g&egrave;nes avec un mod&egrave;le d&#39;expression partag&eacute;e qui sont contr&ocirc;l&eacute;s par les m&ecirc;mes m&eacute;canismes de r&eacute;glementation. M&eacute;thodes pr&eacute;c&eacute;dentes permettent de diss&eacute;quer les modules r&eacute;glementaires &agrave; partir des donn&eacute;es de g&eacute;nomique, tels que les profils d&#39;expression, la liaison de la prot&eacute;ine-ADN et s&eacute;quences promotrices. Dans les cas o&ugrave; l&#39;on manque de donn&eacute;es de la physique prot&eacute;ine-ADN, ces m&eacute;thodes sont essentielles pour l&#39;analyse du programme r&eacute;glementaire sous-jacent.

BRNI : Analyse modulaire des programmes r&eacute;gulation transcriptionnelles.

Transkriptionelle Antworten bestehen oft aus regulatorischen Module - Gruppen von Genen mit einem gemeinsamen Ausdrucksmuster, die durch die gleichen regulatorischen Mechanismen gesteuert werden. Vorherige Methoden erm&ouml;glichen sezieren regulatorischen-Module von Genomik Daten, z. B. Ausdruck Profile, Protein-DNA-Bindung und Projekttr&auml;ger Sequenzen. In F&auml;llen, in denen physische Protein-DNA-Daten fehlen, sind solche Methoden f&uuml;r die Analyse der zugrunde liegenden rechtlichen Programm.

BRNI: Modulare Analyse transkriptionelle regulatorischen Programme.

Risposte di transcriptional spesso costituiti da moduli normativi - set di geni con un pattern di espressione condivisa che sono controllati dagli stessi meccanismi normativi. Metodi precedenti consentono moduli normativi dalla genomica dei dati, come profili di espressione della proteina-DNA binding e sequenze promotore di dissezione. Nei casi in cui mancano dati fisici della proteina-DNA, tali metodi sono essenziali per l&#39;analisi del programma normativo sottostante.

BRNI: Analisi modulare di programmi regolatori trascrizionali.

&#x8F6C;&#x5F55;&#x53CD;&#x5E94;&#x5F80;&#x5F80;&#x5305;&#x62EC;&#x89C4;&#x7BA1;&#x6A21;&#x5757;-&#x7684;&#x540C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5171;&#x4EAB;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7531;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x673A;&#x5236;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5141;&#x8BB8;&#x5939;&#x5C42;&#x76D1;&#x7BA1;&#x6A21;&#x5757;&#x4ECE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5B66;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x5982;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x3001; &#x86CB;&#x767D;&#x8D28; DNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x5E8F;&#x5217;&#x3002;&#x5728;&#x7F3A;&#x4E4F; DNA-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7269;&#x7406;&#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

BRNI&#xFF1A; &#x6A21;&#x5757;&#x5316;&#x5206;&#x6790;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

&#x8EE2;&#x5199;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x3001;&#x898F;&#x5236;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB; - &#x540C;&#x3058;&#x898F;&#x5236;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x5FA1;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x5171;&#x6709;&#x8868;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x5F0F;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3001;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; DNA &#x7D50;&#x5408;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x914D;&#x5217;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x89E3;&#x6790;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x304B;&#x3089;&#x89E3;&#x96E2;&#x6027;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7269;&#x7406;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; DNA &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x304C;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x898F;&#x5236;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

BRNI: &#x8EE2;&#x5199;&#x898F;&#x5236;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306E;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30E9;&#x30FC;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#xC885;&#xC885; transcriptional &#xC751;&#xB2F5; &#xADDC;&#xC81C; &#xBAA8;&#xB4C8;-&#xACF5;&#xC720; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xADDC;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB418;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC9D1;&#xD569;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xBA74; &#xAC8C;&#xB188; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB4F1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADDC;&#xC81C; &#xBAA8;&#xB4C8; &#xBD80;. &#xC2E4;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;-DNA &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xAE30;&#xBCF8; &#xADDC;&#xC815; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;.

BRNI: &#xBAA8;&#xB4C8;&#xD615; transcriptional &#xADDC;&#xC81C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Respuesta transcripcional a menudo consiste en m&oacute;dulos reguladores - grupos de genes con un patr&oacute;n de expresi&oacute;n compartida que son controlados por los mismos mecanismos regulatorios. Los m&eacute;todos anteriores permiten m&oacute;dulos reguladores de gen&oacute;mica de datos, tales como perfiles de expresi&oacute;n vinculante prote&iacute;nas ADN y secuencias de promotor de la disecci&oacute;n. En casos donde se carecen de datos de ADN prote&iacute;na f&iacute;sica, tales m&eacute;todos son esenciales para el an&aacute;lisis del programa regulador subyacente.

BRNI: An&aacute;lisis Modular de programas de regulaci&oacute;n transcripcionales.

&#x836F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5F80;&#x5F80;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x591A;&#x6570;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x6210;&#x4E3A;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x5927;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5E73;&#x5747;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x3001; &#x5EF6;&#x65F6;&#x5F71;&#x50CF;&#x6765;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5355;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE; (MEFs) &#x4ECE;&#x8BC4;&#x9009;&#x56E0;&#x5B50;&#x6297;&#x4F53;&#x9633;&#x6027;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x8D85;&#x8FC7; 2 &#x5468;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x8003;&#x8651;&#x5230;&#x53EA;&#x54CD;&#x5E94;&#x5F62;&#x5F0F;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x6700;&#x540E;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x7684;&#x8F83;&#x5927;&#x6570;&#x5B57;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x7684; MEFs &#x7684;&#x5F52;&#x4E00;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8D77;&#x6E90;&#x7F16;&#x7A0B;&#x6548;&#x7387;&#x8BA1;&#x7B97;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x9879;&#x56DE;&#x987E;&#x6027;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x6210;&#x529F;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x53D7;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E0D;&#x8C0B;&#x800C;&#x5408;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x7387;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9762;&#x79EF;&#x5FEB;&#x901F;&#x8F6C;&#x53D8;&#x3002;&#x53D1;&#x751F;&#x6B64;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x65F6;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65E9;&#x671F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x4E2D;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x4E0E;&#x7A97;&#x4F53;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (iPS) &#x5E72;&#x6B96;&#x6C11;&#x5730;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x7406;&#x8BBA;&#x5EFA;&#x6A21;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x67D0;&#x4E9B;&#x90E8;&#x5206;&#x6309;&#x7167;&#x5B9A;&#x4E49;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x968F;&#x673A;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x3002;

&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x793A;&#x6307;&#x5B9A;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;

The study of induced pluripotency often relies on experimental approaches that average measurements across a large population of cells, the majority of which do not become pluripotent. Here we used high-resolution, time-lapse imaging to trace the reprogramming process over 2 weeks from single mouse embryonic fibroblasts (MEFs) to pluripotency factor-positive colonies. This enabled us to calculate a normalized cell-of-origin reprogramming efficiency that takes into account only the initial MEFs that respond to form reprogrammed colonies rather than the larger number of final colonies. Furthermore, this retrospective analysis revealed that successfully reprogramming cells undergo a rapid shift in their proliferative rate that coincides with a reduction in cellular area. This event occurs as early as the first cell division and with similar kinetics in all cells that form induced pluripotent stem (iPS) cell colonies. These data contribute to the theoretical modeling of reprogramming and suggest that certain parts of the reprogramming process follow defined rather than stochastic steps.

Dynamic single-cell imaging of direct reprogramming reveals an early specifying event.

L&#39;&eacute;tude de la pluripotence induite s&#39;appuie souvent sur des approches exp&eacute;rimentales que les moyennes des mesures &agrave; travers une grande population de cellules, dont la majorit&eacute; ne deviennent pas pluripotentes. Ici nous avons utilis&eacute; d&#39;imagerie &agrave; haute r&eacute;solution, time-lapse de retracer le processus de reprogrammation plus de 2 semaines de fibroblastes embryonnaires de souris (MEFs) aux colonies de pluripotence facteur positif. Cela nous a permis de calculer une efficacit&eacute; de reprogrammation cellulaire d&#39;origine normalis&eacute;e qui prend en compte uniquement les MEFs initiales qui r&eacute;pondent &agrave; la reprogrammation de former des colonies plut&ocirc;t que le plus grand nombre de colonies finales. En outre, cette analyse r&eacute;trospective r&eacute;v&egrave;le qu&#39;avec succ&egrave;s de reprogrammation de cellules subissent un changement rapid de leur taux de prolif&eacute;ration qui co&iuml;ncide avec une r&eacute;duction de la superficie cellulaire. Cet &eacute;v&eacute;nement se produit le plus t&ocirc;t que la premi&egrave;re division cellulaire et la cin&eacute;tique similaire dans toutes les cellules que forme induit des colonies de cellules pluripotentes tige (iPS). Ces donn&eacute;es contribuent &agrave; la mod&eacute;lisation th&eacute;orique de la reprogrammation et sugg&egrave;rent que certaines parties du processus de reprogrammation suivent d&eacute;fini plut&ocirc;t que d&#39;&eacute;tapes stochastiques.

Imagerie dynamique de cellules individuelles de reprogrammation directe r&eacute;v&egrave;le un &eacute;v&eacute;nement pr&eacute;coce de la sp&eacute;cification.

Das Studium der induzierten Pluripotenz beruht oft auf experimentelle Ans&auml;tze, die Messungen &uuml;ber eine gro&szlig;e Population von Zellen, durchschnittlich von denen die meisten nicht zu pluripotenten werden. Hier wir hochaufl&ouml;sende, Zeitraffer imaging den Neuprogrammierung Prozess &uuml;ber 2 Wochen von einzelnen M&auml;useembryonalen (MEFs) zur Pluripotenz Faktor-positiven Kolonien Ablaufverfolgung verwendet. So konnten wir eine normalisierte Neuprogrammierung Zelle-of-Origin-Effizienz zu berechnen, die nur die anf&auml;nglichen MEFs ber&uuml;cksichtigt, die Form umprogrammiert Kolonien anstatt der gr&ouml;&szlig;eren Anzahl der letzten Kolonien zu reagieren. Diese Retrospektive Analyse zufolge dar&uuml;ber hinaus erfolgreich Neuprogrammierung Zellen durchmachen eine schnelle Verschiebung ihrer proliferative Rate, die deckt sich mit einem R&uuml;ckgang der zellul&auml;ren Bereich. Dieses Ereignis tritt bereits als die ersten Zellteilung und mit &auml;hnlichen Kinetik in allen Zellen, dass Formular pluripotenten Stammzellen (iPS) Zelle Kolonien induzierten. Diese Daten dazu beitragen, die theoretische Modellierung der Neuprogrammierung und schlagen vor, da&szlig; bestimmte Teile der Neuprogrammierung Prozess definierten statt stochastische Schritte folgen.

Dynamische Einzeller-Bildgebung der direkte Reprogrammierung zeigt eine fr&uuml;he Angabe Ereignis.

Lo studio della pluripotenza indotta spesso si basa su approcci sperimentali che media le misure attraverso una grande popolazione di cellule, la maggior parte delle quali non diventano pluripotenti. Qui abbiamo usato di imaging ad alta risoluzione, time-lapse di tracciare il processo di riprogrammazione oltre 2 settimane dal singolo fibroblasti embrionali (MEFs) le colonie di pluripotenza fattore positivo. Questo ci ha permesso di calcolare un normalizzato efficienza riprogrammazione delle cellule di origine che prende in considerazione solo l&#39;iniziale MEFs che rispondono alle colonie riprogrammata forma piuttosto che il pi&ugrave; grande numero di colonie finale. Inoltre, questa analisi retrospettiva ha rivelato che la riprogrammazione con successo cellule subiscono un rapido cambiamento nel loro tasso proliferativo che coincide con una riduzione della superficie cellulare. Questo evento si verifica come primi come la prima divisione delle cellule e con cinetica simile in tutte le cellule che forma indotta da colonie di cellule pluripotenti staminali (iPS). Questi dati contribuiscono per la modellizzazione teorica di riprogrammazione e suggeriscono che alcune parti del processo di riprogrammazione seguano definiti piuttosto che passi stocastici.

Dinamica imaging cella singola di riprogrammazione diretta rivela un precoce evento specificando.

&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x306F;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x4EBA;&#x53E3;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30D7;&#x30B9; &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x80DA;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE; (MEFs) 2 &#x9031;&#x9593;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x967D;&#x6027;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3057;&#x76F4;&#x3059;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x6570;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x518D;&#x690D;&#x6C11;&#x5730;&#x521D;&#x671F; MEFs &#x306E;&#x307F;&#x304C;&#x8003;&#x616E;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x6B63;&#x898F;&#x5316;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x8A08;&#x7B97;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x56DE;&#x9867;&#x5C55;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x7387;&#x6E1B;&#x5C11;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x30A8;&#x30EA;&#x30A2;&#x3067;&#x6025;&#x6FC0;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x521D;&#x671F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3068;&#x985E;&#x4F3C;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79; &#xFF08;iPS&#xFF09; &#x7D30;&#x80DE;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7406;&#x8AD6;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3057;&#x76F4;&#x3059;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x304C;&#x78BA;&#x7387;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x306B;&#x5F93;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3002;

&#x76F4;&#x63A5;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x52D5;&#x7684;&#x5358;&#x4E00;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x65E9;&#x671F;&#x6307;&#x5B9A;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC720;&#xB3C4; pluripotency &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC790;&#xC8FC;&#xB294; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; pluripotent &#xB420; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD070; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xCE21;&#xC815; &#xD3C9;&#xADE0; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;, &#xC2DC;&#xAC04; &#xACBD;&#xACFC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; pluripotency &#xC694;&#xC778;&#xC774; &#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBBF8; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; (MEFs)&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xCD94;&#xC801;. &#xC774; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCD5C;&#xC885; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xC218; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC624;&#xD788;&#xB824; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xC7AC;&#xC124;&#xC815;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; Mefs&#xB9CC;&#xC744; &#xACE0;&#xB824; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xADDC;&#xD654; &#xB41C; &#xC6D0;&#xBCF8; &#xC140; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xD6A8;&#xC728; &#xACC4;&#xC0B0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;,&#xC774; &#xD68C;&#xACE0;&#xC804; &#xBD84;&#xC11D; &#xACF5;&#xAC1C; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC140; &#xC138;&#xD3EC; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC99D;&#xC2DD; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xAE09;&#xACA9; &#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xAC70;&#xCE69;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xCD08;&#xAE30;&#xB85C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xC591;&#xC2DD; pluripotent &#xC904;&#xAE30; (iPS) &#xC138;&#xD3EC; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xC720;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC758; &#xC774;&#xB860;&#xC801; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xBD80;&#xBD84;&#xC774; &#xC815;&#xC758; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; stochastic &#xB2E8;&#xACC4; &#xB530;&#xB77C;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC9C1;&#xC811; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xC2F1;&#xAE00; &#xC140; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xCD08;&#xAE30; &#xC9C0;&#xC815; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

El estudio de la pluripotencia inducida a menudo se basa en aproximaciones experimentales que promedio de las mediciones a trav&eacute;s de una gran poblaci&oacute;n de c&eacute;lulas, la mayor&iacute;a de los cuales no sean pluripotentes. Aqu&iacute; utilizamos im&aacute;genes de alta resoluci&oacute;n, time-lapse para rastrear el proceso de reprogramaci&oacute;n durante 2 semanas de fibroblastos embrionarios de rat&oacute;n (MEFs) a colonias de pluripotencia factor positivo. Esto nos permiti&oacute; calcular una eficiencia normalizada de reprogramaci&oacute;n celular de origen que tiene en cuenta s&oacute;lo los MEFs iniciales que responden a las colonias forma reprogramado en lugar del mayor n&uacute;mero de colonias finales. Adem&aacute;s, este an&aacute;lisis retrospectivo revelaron que con &eacute;xito la reprogramaci&oacute;n de las c&eacute;lulas se someten a un cambio r&aacute;pido en su &iacute;ndice proliferativo que coincide con una reducci&oacute;n del &aacute;rea celular. Este evento se produce tan temprano como la primera divisi&oacute;n de la c&eacute;lula y con cin&eacute;tica similar en todas las c&eacute;lulas que forma inducida por colonias de c&eacute;lulas pluripotentes v&aacute;stago (iPS). Estos datos contribuyen a la modelizaci&oacute;n te&oacute;rica de reprogramaci&oacute;n y sugieren que ciertas partes del proceso de reprogramaci&oacute;n sigan definida en lugar de pasos estoc&aacute;sticos.

Proyecci&oacute;n de imagen din&aacute;mica de unicelular de reprogramaci&oacute;n directa revela un acontecimiento especificar temprano.

&#x4E0E;&#x8870;&#x8001;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x5982;&#x5E15;&#x91D1;&#x68EE;&#x75C5;&#x3001; &#x963F;&#x5C14;&#x8328;&#x6D77;&#x9ED8;&#x6C0F;&#x75C7;&#x548C;&#x4EA8;&#x5EF7;&#x987F;&#x75C5;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x6700;&#x7EC8;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7EC6;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x96C6;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x4EA8;&#x5EF7;&#x987F;&#x6C0F;&#x821E;&#x8E48;&#x75C5;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D; huntingtin &#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x548C;&#x75BE;&#x75C5;&#x53D1;&#x75C5;&#x5E74;&#x9F84;&#x6210;&#x53CD;&#x6BD4;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x591A;&#x805A;&#x8C37;&#x6C28;&#x9170;&#x80FA;&#x9053;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9A;&#x91CF;&#x68C0;&#x6D4B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4E0B;&#x4F30;&#x8BA1;&#x548C;&#x6355;&#x83B7;&#x751F;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x96C6;&#xFF0C;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E0E;&#x8001;&#x5316;&#x6709;&#x5173;&#x805A;&#x5408; GFP &#x6807;&#x8BB0;&#x3001; huntingtin &#x6E90;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C; polyQ &#x957F;&#x5EA6;&#x4E2D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x77ED; 25Q &#x86CB;&#x767D;&#x4ECE;&#x672A;&#x805A;&#x5408;&#x800C;&#x957F; 103Q &#x7248;&#x672C;&#x603B;&#x662F;&#x805A;&#x5408;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x578B; 47Q &#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x6EB6;&#x4E8E;&#x9752;&#x5E74;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F93;&#x5165;&#x7684;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x548C;&#x5E74;&#x9F84;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x6570;&#x589E;&#x957F;&#x9175;&#x6BCD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x805A;&#x5408;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x7ED8;&#x5236;&quot;&#x805A;&#x5408;&quot;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x8868;&#x3002;&#x8FD9;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x8001;&#x5316;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x662F;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x663E;&#x793A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0E;&#x8870;&#x8001;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5316;&#x9176; 2 &#x548C; HSF1&#xFF0C;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD; polyQ &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x3002;&Delta;sir2 &#x5E94;&#x53D8;&#x52A0;&#x5267;&#x8001;&#x5316;&#x4F9D;&#x8D56; 47Q &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; Hsf1 &#x6291;&#x5236;&#x805A;&#x5408;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x578B; 47Q &#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B9A;&#x91CF;&#x805A;&#x5408;&#x68C0;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6709;&#x4EF7;&#x503C;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x89E3;&#x5F00;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x73AF;&#x5883;&#x6761;&#x4EF6;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E0E;&#x8870;&#x8001;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

PolyQ &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x662F;&#x9175;&#x6BCD;&#x7684;&#x8001;&#x5316;&#x540E;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x548C;&#x53D7;&#x5316;&#x9176; 2 &#x548C; Hsf1&#xFF1A; &#x65B0;&#x578B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x548C;&#x663E;&#x5FAE;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

Aging-related neurodegenerative disorders, such as Parkinson's, Alzheimer's and Huntington's diseases, are characterized by accumulation of protein aggregates in distinct neuronal cells that eventually die. In Huntington's disease, the protein huntingtin forms aggregates, and the age of disease onset is inversely correlated to the length of the protein's poly-glutamine tract. Using quantitative assays to estimate microscopically and capture biochemically protein aggregates, here we study in Saccharomyces cerevisiae aging-related aggregation of GFP-tagged, huntingtin-derived proteins with different polyQ lengths. We find that the short 25Q protein never aggregates whereas the long 103Q version always aggregates. However, the mid-size 47Q protein is soluble in young logarithmically growing yeast but aggregates as the yeast cells enter the stationary phase and age, allowing us to plot an "aggregation timeline". This aging-dependent aggregation was associated with increased cytotoxicity. We also show that two aging-related genes, SIR2 and HSF1, affect aggregation of the polyQ proteins. In Î”sir2 strain the aging-dependent aggregation of the 47Q protein is aggravated, while overexpression of the transcription factor Hsf1 attenuates aggregation. Thus, the mid-size 47Q protein and our quantitative aggregation assays provide valuable tools to unravel the roles of genes and environmental conditions that affect aging-related aggregation.

Aggregation of polyQ proteins is increased upon yeast aging and affected by Sir2 and Hsf1: novel quantitative biochemical and microscopic assays.

Neurod&eacute;g&eacute;n&eacute;ratives li&eacute;es au vieillissement des troubles, comme la maladie de Parkinson, d&#39;Alzheimer et les maladies de la maladie de Huntington, sont caract&eacute;ris&eacute;es par l&#39;accumulation d&#39;agr&eacute;gats de prot&eacute;ines dans les cellules neuronales distinctes qui finissent par mourir. Dans la maladie de Huntington, la huntingtine prot&eacute;ine forme des agr&eacute;gats et l&#39;&acirc;ge d&#39;apparition de la maladie est inversement corr&eacute;l&eacute;e &agrave; la longueur du tube poly-glutamine de la prot&eacute;ine. &Agrave; l&#39;aide de dosages quantitatifs afin d&#39;estimer au microscope et de capturer des agr&eacute;gats de prot&eacute;ine biochimiquement, ici, nous &eacute;tudions dans le Saccharomyces cerevisiae li&eacute;es au vieillissement agr&eacute;gation des prot&eacute;ines GFP-&eacute;tiquet&eacute;e, d&eacute;riv&eacute; de la huntingtine avec polyQ de diff&eacute;rentes longueurs. Nous trouvons que la prot&eacute;ine de courte 25Q agr&egrave;ge jamais alors que la version longue de 103 q agr&egrave;ge toujours. Toutefois, la prot&eacute;ine Mid-Size 47Q est soluble dans young croissante logarithmiquement levure mais des agr&eacute;gats, comme les cellules de levure, entrer dans la phase stationnaire et l&#39;&acirc;ge, ce qui nous permet de tracer une &laquo; chronologie d&#39;agr&eacute;gation &raquo;. Cette agr&eacute;gation de vieillissement d&eacute;pendant &eacute;tait associ&eacute;e &agrave; une cytotoxicit&eacute; accrue. Nous montrons &eacute;galement que deux g&egrave;nes li&eacute;s au vieillissement, SIR2 et HSF1, affectent l&#39;agr&eacute;gation des prot&eacute;ines polyQ. L&#39;agr&eacute;gation de vieillissement d&eacute;pendant de la prot&eacute;ine 47Q est aggrav&eacute;e chez la souche &Delta;sir2, tandis que la surexpression du facteur de transcription Hsf1 att&eacute;nue l&#39;agr&eacute;gation. Ainsi, la prot&eacute;ine Mid-Size 47Q et nos analyses quantitatives de l&#39;agr&eacute;gation des outils pr&eacute;cieux pour &eacute;lucider le r&ocirc;le des g&egrave;nes et des conditions environnementales qui affectent l&#39;agr&eacute;gation li&eacute;es au vieillissement.

L&#39;agr&eacute;gation des prot&eacute;ines polyQ est augment&eacute;e sur le vieillissement de la levure et affect&eacute;e par Sir2 et Hsf1 : nouveaux dosages quantitatifs de biochimiques et microscopiques.

Im Zusammenhang mit der Alterung Neurodegenerative Erkrankungen wie Parkinson, Alzheimer und Huntingtons Krankheiten, zeichnen sich durch Akkumulation von Protein-Aggregate in verschiedenen neuronalen Zellen, die schlie&szlig;lich sterben. Bei Huntington-Krankheit das Protein Chorea Huntington bildet Aggregate und Krankheit Erkrankungsalter ist umgekehrt auf die L&auml;nge der das Protein Poly-Glutamin-Trakt korreliert. Verwenden quantitative Proben mikroskopisch einsch&auml;tzen und erfassen biochemisch Protein-Aggregate, studieren hier wir in Saccharomyces Cerevisiae Altern-bezogene Aggregation von GFP-etikettiert, Chorea Huntington abgeleitete Proteine mit unterschiedlichen PolyQ L&auml;ngen. Wir finden, dass das kurze 25Q Protein nie aggregiert w&auml;hrend die langen 103Q-Version immer aggregiert. Das mittelst&auml;ndische 47Q-Protein ist jedoch l&ouml;slich in junge logarithmisch wachsenden Hefe aber Aggregate wie die Hefezellen der station&auml;ren Phase und dem Alter, geben Sie uns erlauben, eine &quot;Aggregation Zeitachse&quot; plot. Diese Alterung-abh&auml;ngige Aggregation wurde erh&ouml;hte Zytotoxizit&auml;t zugeordnet. Wir zeigen auch, dass zwei Altern-bezogenen Gene, SIR2 und HSF1, Aggregation der Proteine PolyQ beeinflussen. &Delta;sir2 Belastung wird die Alterung-abh&auml;ngige Aggregation des Proteins 47Q versch&auml;rft, w&auml;hrend eine &Uuml;berexpression des Transkriptionsfaktors Hsf1 Aggregation d&auml;mpft. Somit bieten die Mid-Size 47Q-Protein und unsere quantitativen Aggregation-Assays wertvolle Tools um die Rolle der Gene und Umweltbedingungen, die im Zusammenhang mit der Alterung Aggregation beeinflussen zu entwirren.

Aggregation von PolyQ Proteinen erh&ouml;ht auf Hefe Altern und von Sir2 und Hsf1 betroffen ist: Roman quantitative biochemische und mikroskopische Assays.

Neurodegenerative invecchiamento correlati disturbi, come il morbo di Parkinson, Alzheimer e malattie di Huntington, sono caratterizzate da accumulo di aggregati di proteine in cellule neuronali distinti che alla fine muoiono. Nella malattia di Huntington, la proteina huntingtina forme inerti, e l&#39;et&agrave; di esordio della malattia &egrave; inversamente correlata alla lunghezza del tratto di poly-glutammina della proteina. Utilizzando dosaggi quantitativi per valutare al microscopio e catturare biochimicamente aggregati di proteina, qui si studiano in aggregazione Saccharomyces cerevisiae con invecchiamento correlati di proteine GFP-etichettato, derivato dell&#39;huntingtina con polyQ differenti lunghezze. Troviamo che la proteina 25Q breve non aggrega mai mentre la versione lunga 103Q sempre aggregati. Tuttavia, la proteina 47Q di medie dimensioni &egrave; solubile nei giovani cresce logaritmicamente lievito ma aggregati come le cellule di lievito entra la fase stazionaria e l&#39;et&agrave;, che ci permette di tracciare una linea &quot;aggregazione temporale&quot;. Questa aggregazione di invecchiamento-dipendente &egrave; stata associata con maggiore citotossicit&agrave;. Mostriamo anche che due geni correlati a invecchiamento, SIR2 e HSF1, possono influenzare l&#39;aggregazione delle proteine polyQ. Nel ceppo &Delta;sir2 &egrave; aggravata dall&#39;aggregazione di invecchiamento-dipendente della proteina 47Q, mentre iperespressione del fattore di trascrizione Hsf1 attenua aggregazione. Cos&igrave;, la proteina di medie dimensioni 47Q e nostra analisi quantitativa aggregazione forniscono strumenti preziosi per svelare il ruolo dei geni e delle condizioni ambientali che influiscono sull&#39;invecchiamento-relative di aggregazione.

Aggregazione delle proteine polyQ &egrave; aumentato all&#39;invecchiamento di lievito e colpiti da Sir2 e Hsf1: romanzo quantitative dosaggi biochimici e microscopici.

&#x8001;&#x5316;&#x95A2;&#x9023;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3001;&#x30D1;&#x30FC;&#x30AD;&#x30F3;&#x30BD;&#x30F3;&#x306A;&#x3069;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C4;&#x30CF;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x75C5;&#x3001;&#x30CF;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30F3;&#x75C5;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x6B7B;&#x306C;&#x500B;&#x5225;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x30CF;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30F3;&#x75C5;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; huntingtin &#x96C6;&#x8A08;&#x3001;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x75BE;&#x60A3;&#x767A;&#x75C7;&#x5E74;&#x9F62;&#x53CD;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA; l-&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x7BA1;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x306B;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x7684;&#x63A8;&#x5B9A;&#x30FB;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x3092;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30C1;&#x30E3;&#x3059;&#x308B;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x8A66;&#x91D1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x30B5;&#x30C3;&#x30AB;&#x30ED; &#x30DF;&#x30BB;&#x30B9;&#x9175;&#x6BCD;&#x8001;&#x5316;&#x95A2;&#x9023;&#x96C6;&#x8A08; GFP &#x30BF;&#x30B0;&#x3001;huntingtin &#x6D3E;&#x751F;&#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA; q &#x3067;&#x52C9;&#x5F37;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x9577;&#x3044; 103Q &#x306E;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5E38;&#x306B;&#x96C6;&#x8A08;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x77ED;&#x3044; 25Q &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x6C7A;&#x3057;&#x3066;&#x96C6;&#x7D04;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4E2D;&#x578B; 47Q &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x56FA;&#x5B9A;&#x76F8;&#x3068;&#x5E74;&#x9F62;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x5BFE;&#x6570;&#x9175;&#x6BCD;&#x304C;&#x96C6;&#x8A08;&#x6210;&#x9577;&#x30E4;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x300C;&#x96C6;&#x7D04;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x300D;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9AD8;&#x9F62;&#x5316;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x96C6;&#x8A08;&#x306F;&#x9AD8;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F; 2 &#x3064;&#x306E;&#x9AD8;&#x9F62;&#x5316;&#x95A2;&#x9023;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;SIR2 &#x3068; HSF1&#x3001;&#x30DD;&#x30EA; q &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x96C6;&#x5408;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;.&Delta;sir2 &#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x306E;&#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; Hsf1 &#x96C6;&#x7D04;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9; 47Q &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x52A0;&#x9F62;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x96C6;&#x8A08;&#x304C;&#x60AA;&#x5316;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x4E2D;&#x578B; 47Q &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x51DD;&#x96C6;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x8001;&#x5316;&#x95A2;&#x9023;&#x96C6;&#x8A08;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x74B0;&#x5883;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DD;&#x30EA; q &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x96C6;&#x5408;&#x3092;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x8001;&#x5316;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;Sir2 &#x3068; Hsf1 &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5F71;&#x97FF;: &#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x7684;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3002;

&#xB178;&#xD654;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC7A5;&#xC560;, &#xD30C; &#xD0A8; &#xC2A8; &#xBCD1;, &#xB4F1; Alzheimer&#xC640; &#xD5CC;&#xD305;&#xD134;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;, &#xACB0;&#xAD6D; &#xC8FD; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xD5CC;&#xD305;&#xD134;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; huntingtin &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xC9D1;&#xACC4; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xBC1C;&#xBCD1;&#xC758; &#xB098;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD3F4; &#xB9AC; &#xAE00;&#xB8E8;&#xD0C0;&#xBBFC; &#xAD00;&#xC758; &#xAE38;&#xC774;&#xC5D0; &#xBC18;&#xBE44;&#xB840; &#xC0C1;&#xAD00;. &#xC591;&#xC801; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xCE21; &#xD558; &#xACE0; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9D1;&#xACC4; &#xCEA1;&#xCC98;&#xB97C;, &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xACF5;&#xBD80; &#xB2E4;&#xB978; polyQ &#xAE38;&#xC774; GFP &#xD0DC;&#xADF8;, huntingtin&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; Saccharomyces cerevisiae &#xB178;&#xD654; &#xAD00;&#xB828; &#xC9D1;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; 25Q &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xACB0;&#xCF54; &#xAE34; 103Q &#xBC84;&#xC804;&#xC744; &#xD56D;&#xC0C1; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xC9D1;&#xACC4; &#xCC3E;&#xC73C;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC911;&#xD615; 47Q &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &quot;&#xC9D1;&#xACC4; &#xD0C0;&#xC784; &#xB77C;&#xC778;&quot;&#xC744; &#xADF8;&#xB9B4; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC785;&#xB825; &#xACE0;&#xC815; &#xC704;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xB098;&#xC774;, &#xD6A8; &#xBAA8;&#xB9CC; &#xC9D1;&#xACC4;&#xB97C; &#xB85C;&#xADF8; &#xC131;&#xC7A5; &#xC601;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB178;&#xD654; &#xC885;&#xC18D; &#xC9D1;&#xACC4; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00;&#xC640; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB178;&#xD654; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790;, sir2&#xC640; HSF1, polyQ &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC9D1;&#xD569;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &Delta;sir2 &#xBCC0;&#xD615; overexpression &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; hsf1&#xC758; &#xC57D;&#xD654; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; 47Q &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB178;&#xD654; &#xC885;&#xC18D; &#xC9D1;&#xACC4; &#xC545;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC911;&#xD615; 47Q &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC591;&#xC801; &#xC9D1;&#xACC4; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB178;&#xD654; &#xAD00;&#xB828; &#xC9D1;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xB294; &#xD658;&#xACBD; &#xC870;&#xAC74;&#xACFC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD574;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

PolyQ &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB178;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; sir2&#xC640; hsf1&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;: &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC0F; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBD84;&#xC11D; &#xC815;&#xB7C9; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC18C;&#xC124;.

Enfermedades neurodegenerativas de relacionadas con el envejecimiento, tales como Parkinson, Alzheimer y enfermedades de Huntington, se caracterizan por la acumulaci&oacute;n de agregados de prote&iacute;na en las c&eacute;lulas neuronales distintas que eventualmente mueren. En la enfermedad de Huntington, la prote&iacute;na huntingtina forma agregados, y la edad de inicio de la enfermedad se correlaciona inversamente con la longitud del tracto de poli-glutamina de la prote&iacute;na. Mediante ensayos cuantitativos para estimar microsc&oacute;pico y capturar bioqu&iacute;micamente agregados proteicos, aqu&iacute; estudiamos en la Saccharomyces cerevisiae relacionadas con el envejecimiento agregaci&oacute;n de prote&iacute;nas GFP-etiquetado, derivados de la huntingtina con longitudes diferentes poliQ. Encontramos que la prote&iacute;na 25Q corto nunca agregados mientras que la versi&oacute;n de 103Q largo siempre agregados. Sin embargo, la prote&iacute;na de tama&ntilde;o mediano 47Q es soluble en j&oacute;venes crecimiento logar&iacute;tmico levadura pero agregados como las c&eacute;lulas de levadura entrar en la fase estacionaria y la edad, lo que nos permite trazar una l&iacute;nea &quot;agregaci&oacute;n temporal&quot;. Esta agregaci&oacute;n de envejecimiento dependiente se asoci&oacute; con mayor citotoxicidad. Tambi&eacute;n mostramos que dos genes relacionados con el envejecimiento, SIR2 y HSF1, afectan la agregaci&oacute;n de las prote&iacute;nas poliQ. En la cepa &Delta;sir2 se agrava la agregaci&oacute;n del envejecimiento-dependiente de la prote&iacute;na 47Q, mientras que la sobreexpresi&oacute;n del factor de transcripci&oacute;n Hsf1 aten&uacute;a la agregaci&oacute;n. Por lo tanto, nuestros an&aacute;lisis de agregaci&oacute;n cuantitativa y la prote&iacute;na de tama&ntilde;o mediano 47Q proporcionan valiosas herramientas para desentra&ntilde;ar las funciones de los genes y las condiciones ambientales que afectan la agregaci&oacute;n relacionadas con el envejecimiento.

Agregaci&oacute;n de prote&iacute;nas poliQ es aumentada sobre envejecimiento de levadura y afectada por Sir2 y Hsf1: novela Ensayos bioqu&iacute;micos y microsc&oacute;picos cuantitativos.

Il batterio gram-negativo Pseudomonas syringae pv. pomodoro (Pst) &egrave; l&#39;agente causale della malattia di speck in pomodoro. Patogenicit&agrave; PST dipende da un sistema di secrezione di III tipo che fornisce proteine effettrici in cellule ospiti, dove promuovono la malattia manipolando i processi per il vantaggio dell&#39;agente patogeno. Precedenti studi identificati sette effettori Pst che inibiscono la crescita quando espresso in lievito in condizioni di normale crescita, suggerendo che interferiscono con i processi cellulari conservati nel lievito e piante. Abbiamo ipotizzato che effettori bersaglio anche conservati i processi cellulari che sono necessari per la crescita del lievito solo in condizioni di stress. Abbiamo quindi esaminato fenotipi indotti dall&#39;espressione di effettori Pst nel lievito coltivato in presenza di vari fattori di stress. Fuori 29 effettori testato, cinque (HopX1, HopG1, HopT1-1, HopH1 e AvrPtoB) visualizzato fenotipi di inibizione di crescita solo in combinazione con condizioni di stress. Analisi di redditivit&agrave; ha rivelato che il effector HopX1 ha causato perdita di attuabilit&agrave; delle cellule sotto stress osmotico prolungato. Utilizzando i reporter trascrizione, abbiamo trovato che HopX1 attenuato l&#39;attivazione di osmolarit&agrave; alta glicerolo (HOG) proteina mitogene-attivata chinasi (MAPK) via, che &egrave; responsabile per la sopravvivenza del lievito sotto stress osmotico, mentre altre vie MAPK sono stati moderatamente colpiti dalla HopX1. &Egrave; interessante notare, fenotipi HopX1-mediata in lievito dipendevano triade catalitica transglutaminasi putativo il effector. Questo studio ingrandisce il pool di fenotipi disponibili per l&#39;analisi funzionale di effettori III tipo Pst in lievito ed esemplifica come analisi dei fenotipi rilevato nel lievito in condizioni di stress possono portare all&#39;identificazione di processi cellulari eucariotici colpite da effettori batteriche.

Espressione di Pseudomonas syringae tipo III effettori nel lievito in condizioni di stress rivela che HopX1 attenua la attivazione della via di chinasi del glicerolo mappa ad alta osmolarit&agrave;.

&#x9769;&#x5170;&#x9634;&#x6027;&#x6746;&#x83CC;&#x91CE;&#x706B;&#x5149;&#x4F0F;&#x3002;&#x756A;&#x8304; (Pst) &#x662F;&#x756A;&#x8304;&#x6591;&#x70B9;&#x75C5;&#x7684;&#x81F4;&#x75C5;&#x3002;Pst &#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x4F20;&#x9012;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x8FDB;&#x5165;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7684;&#x64CD;&#x4F5C;&#x4F18;&#x52BF;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x4EBA;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x4E86;&#x75BE;&#x75C5;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E09;&#x3001; &#x5206;&#x6CCC;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E03;&#x6291;&#x5236;&#x751F;&#x957F;&#x65F6;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x589E;&#x957F;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5E72;&#x6270;&#x5B88;&#x6052;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x548C;&#x690D;&#x7269;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x9175;&#x6BCD;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; Pst &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x8BBE;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x8FD8;&#x9488;&#x5BF9;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x53EA;&#x6709;&#x5728;&#x5E94;&#x529B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x751F;&#x957F;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x8868;&#x578B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684; Pst &#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x7D27;&#x5F20;&#x6027;&#x523A;&#x6FC0;&#x4E0B;&#x957F;&#x5927;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;&#x4ECE; 29 &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x6D4B;&#x8BD5;&#xFF0C;&#x4E94;&#x4E2A; &#xFF08;HopX1&#x3001; HopG1&#x3001; HopT1-1&#x3001; HopH1 &#x548C; AvrPtoB&#xFF09; &#x751F;&#x957F;&#x6291;&#x5236;&#x578B;&#x4EC5;&#x663E;&#x793A;&#x5728;&#x4E0E;&#x5E94;&#x529B;&#x6761;&#x4EF6;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x63ED;&#x793A; HopX1 &#x6548;&#x5E94;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x6E17;&#x900F;&#x80C1;&#x8FEB;&#x4E0B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8BB0;&#x8005;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; HopX1 &#x51CF;&#x6BD2;&#x8D1F;&#x8D23;&#x6E17;&#x900F;&#x80C1;&#x8FEB;&#x4E0B;&#x9175;&#x6BCD;&#x751F;&#x5B58;&#x800C;&#x5176;&#x4ED6; MAPK &#x901A;&#x8DEF;&#x8F7B;&#x5EA6;&#x53D7; HopX1 &#x9AD8;&#x6E17;&#x900F;&#x538B;&#x7518;&#x6CB9; (&#x732A;) &#x4E1D;&#x88C2;&#x7D20;&#x6D3B;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; (MAPK) &#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;HopX1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x578B;&#x9175;&#x6BCD;&#x90FD;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5047;&#x5B9A;&#x9170;&#x80FA;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x9ED1;&#x793E;&#x4F1A;&#x7684;&#x6548;&#x5E94;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x589E;&#x5927;&#x4F9B;&#x9175;&#x6BCD;&#xFF0C;Pst &#x7C7B;&#x578B;&#x4E09;&#x3001; &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x6C60;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F53;&#x73B0;&#x5728;&#x5E94;&#x529B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x5206;&#x6790;&#x5982;&#x4F55;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9274;&#x5B9A;&#x7684;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x53D7;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;

&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC;&#x6591;&#x70B9;&#x75C5;&#x7C7B;&#x578B; III &#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x5E94;&#x529B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86; HopX1 &#x6291;&#x5236;&#x9AD8;&#x6E17;&#x900F;&#x538B;&#x7518;&#x6CB9;&#x5730;&#x56FE;&#x6FC0;&#x9176;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

The Gram-negative bacterium Pseudomonas syringae pv. tomato (Pst) is the causal agent of speck disease in tomato. Pst pathogenicity depends on a type III secretion system that delivers effector proteins into host cells, where they promote disease by manipulating processes to the advantage of the pathogen. Previous studies identified seven Pst effectors that inhibit growth when expressed in yeast under normal growth conditions, suggesting that they interfere with cellular processes conserved in yeast and plants. We hypothesized that effectors also target conserved cellular processes that are required for yeast growth only under stress conditions. We therefore examined phenotypes induced by expression of Pst effectors in yeast grown in the presence of various stressors. Out of 29 effectors tested, five (HopX1, HopG1, HopT1-1, HopH1 and AvrPtoB) displayed growth inhibition phenotypes only in combination with stress conditions. Viability assays revealed that the HopX1 effector caused loss of cell viability under prolonged osmotic stress. Using transcription reporters, we found that HopX1 attenuated the activation of the high osmolarity glycerol (HOG) mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathway, which is responsible for yeast survival under osmotic stress, while other MAPK pathways were mildly affected by HopX1. Interestingly, HopX1-mediated phenotypes in yeast were dependent on the putative transglutaminase catalytic triad of the effector. This study enlarges the pool of phenotypes available for the functional analysis of Pst type III effectors in yeast, and exemplifies how analysis of phenotypes detected in yeast under stress conditions can lead to the identification of eukaryotic cellular processes affected by bacterial effectors.

Expression of Pseudomonas syringae type III effectors in yeast under stress conditions reveals that HopX1 attenuates activation of the high osmolarity glycerol MAP kinase pathway.

La bact&eacute;rie Gram-n&eacute;gative Pseudomonas syringae pv. tomate (Pst) est l&#39;agent causal de la maladie de la tache chez la tomate. Pathog&eacute;nicit&eacute; PST d&eacute;pend d&#39;un syst&egrave;me de s&eacute;cr&eacute;tion de type III qui fournit des prot&eacute;ines effectrices dans les cellules de l&#39;h&ocirc;te, o&ugrave; ils favorisent la maladie en manipulant le processus au profit de l&#39;agent pathog&egrave;ne. Des &eacute;tudes ant&eacute;rieures a identifi&eacute; sept effecteurs de Pst qui inhibent la croissance lorsqu&#39;elle est exprim&eacute;e dans la levure dans des conditions de croissance normales, sugg&eacute;rant qu&#39;elles interf&egrave;rent avec les processus cellulaires conserv&eacute;es chez les levures et les plantes. Nous avons &eacute;mis l&#39;hypoth&egrave;se qu&#39;effecteurs ciblent &eacute;galement conserv&eacute;s les processus cellulaires qui sont n&eacute;cessaires pour la croissance de levure seulement des conditions de stress. Nous avons donc examin&eacute; les ph&eacute;notypes induites par l&#39;expression des effecteurs de la TVP en levures cultiv&eacute;es en pr&eacute;sence de diff&eacute;rents facteurs de stress. Hors 29 effecteurs test&eacute;s, cinq (HopX1, HopG1, HopT1-1, HopH1 et AvrPtoB) affichent les ph&eacute;notypes de l&#39;inhibition de croissance uniquement en combinaison avec des conditions de stress. Dosages de viabilit&eacute; a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que l&#39;effecteur HopX1 caus&eacute; la perte de viabilit&eacute; cellulaire sous stress osmotique prolong&eacute;. &Agrave; l&#39;aide de reporters de la transcription, nous avons constat&eacute; que HopX1 a att&eacute;nu&eacute; l&#39;activation de la voie haute osmolarit&eacute; glyc&eacute;rol (HOG) mitogen-activated protein kinases (MAPK), qui est responsable de la survie de la levure sous stress osmotique, tandis que d&#39;autres voies MAPK &eacute;taient intoxique par HopX1. Fait int&eacute;ressant, induite par l&#39;HopX1 des ph&eacute;notypes dans la levure d&eacute;pendaient de la triade catalytique transglutaminase putatif de l&#39;effecteur. Cette &eacute;tude s&#39;&eacute;largit &agrave; la piscine des ph&eacute;notypes disponibles pour l&#39;analyse fonctionnelle des Pst type III effecteurs dans la levure et illustre comment l&#39;analyse des ph&eacute;notypes d&eacute;tect&eacute; chez la levure en conditions de stress peut conduire &agrave; l&#39;identification des processus cellulaires eucaryotes, touch&eacute;s par des effecteurs bact&eacute;riennes.

Expression des effecteurs d&#39;III de type Pseudomonas syringae chez la levure en conditions de stress r&eacute;v&egrave;le qu&#39;activation de la voie de kinase de glyc&eacute;rol carte haute osmolarit&eacute; l&#39;att&eacute;nue la HopX1.

Die Gram-negativen Bakteriums Pseudomonas Syringae pv. Tomate (Pst) ist der Erreger der S&uuml;dtiroler Speck Krankheit in Tomaten. PST Pathogenit&auml;t h&auml;ngt eine Typ-III-Sekretionssystem, der Effektor-Proteine in Wirtszellen wo sie Krankheit f&ouml;rdern liefert, durch Manipulation der Prozesse zum Vorteil des Erregers. Fr&uuml;here Studien identifiziert sieben Pst-Effektoren, die hemmen das Wachstum ausgedr&uuml;ckt in der Hefe unter normalen Wachstumsbedingungen, was darauf hindeutet, dass diese zellul&auml;re Prozesse konserviert in Hefe und Pflanzen beeintr&auml;chtigen. Wir die Hypothese, dass die Effektoren Zielen auch konservierte zellul&auml;re Prozesse, die f&uuml;r das Wachstum der Hefe nur unter Stressbedingungen erforderlich sind. Wir untersuchten daher Ph&auml;notypen induziert durch Ausdruck der Pst Effektoren in Hefe in Anwesenheit von verschiedenen Stressoren gewachsen. Aus 29 Effektoren getestet, f&uuml;nf (HopX1, HopG1, HopT1-1, HopH1 und AvrPtoB) Wachstum Hemmung Ph&auml;notypen nur in Kombination mit hoher Belastung angezeigt. Lebensf&auml;higkeit Proben ergab, dass der HopX1-Effektor Zellviabilit&auml;t unter l&auml;ngerer osmotischer Stress verursacht. Mit Transkription Reporter, fanden wir, dass HopX1 die Aktivierung des hohen Osmolarit&auml;t Glycerin (HOG) Mitogen-activated Protein Kinase (MAPK) Signalweges, abgeschw&auml;cht, das verantwortlich f&uuml;r Hefe-&Uuml;berleben unter osmotischer Stress ist, w&auml;hrend andere MAPK-Wege leicht von HopX1 betroffen waren. Interessanterweise waren HopX1-vermittelte Ph&auml;notypen in der Hefe die vermeintliche Transglutaminase Katalytische Triade der Effektor abh&auml;ngig. Diese Studie vergr&ouml;&szlig;ert den Pool der Ph&auml;notypen f&uuml;r die funktionale Analyse der Pst Typ III Effektoren in Hefe, und veranschaulicht, wie die Analyse der Ph&auml;notypen, die in der Hefe unter Stressbedingungen erkannt zur Identifizierung der eukaryotischen zellul&auml;re Prozesse, die durch bakterielle Effektoren beeinflusst f&uuml;hren kann.

Ausdruck von Pseudomonas Syringae Typ III Effektoren in der Hefe unter Stressbedingungen zeigt, dass HopX1 Aktivierung des hohen Osmolarit&auml;t Glycerin MAP-Kinase-Signalweges d&auml;mpft.

&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;&#x75C5;&#x83CC; pv&#x3002;&#x30C8;&#x30DE;&#x30C8; (Pst) &#x30C8;&#x30DE;&#x30C8;&#x6591;&#x70B9;&#x75C5;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x83CC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Pst &#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3069;&#x3053;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x75C5;&#x6C17;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; III &#x5206;&#x6CCC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x9175;&#x6BCD;&#x9175;&#x6BCD;&#x3068;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x5E72;&#x6E09;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x6210;&#x9577;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B; 7 &#x3064;&#x306E; Pst &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x8B58;&#x5225;&#x3002;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x5FDC;&#x529B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4FDD;&#x5B58;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;Pst &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x80B2;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;.29 &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8; 5 &#x3064; (HopX1&#x3001;HopG1&#x3001;HopT1 1&#x3001;HopH1 &#x304A;&#x3088;&#x3073; AvrPtoB) &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x6210;&#x9577;&#x963B;&#x5BB3;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1; HopX1 &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x8A18;&#x8005;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; HopX1 &#x4ED6; MAPK &#x7D4C;&#x8DEF;&#x8EFD;&#x5EA6; HopX1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x3001;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x4E0B;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3001;&#x9AD8;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#xFF08;&#x8C5A;&#xFF09; &#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#xFF08;MAPK&#xFF09; &#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;HopX1 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C8;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A2;&#x30C9;&#x306E;&#x4E0A;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x9175;&#x6BCD;&#x3001;Pst &#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; III &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x7528;&#x306E;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x62E1;&#x5927;&#x3057;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x4F8B;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9;&#x75C5;&#x83CC;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; III &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F; HopX1 &#x9AD8;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xB179; syringae pv. &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0; (&#xD0DC;&#xD3C9;&#xC591; &#xD45C;&#xC900;&#xC2DC;) &#xD1A0;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC18;&#xC810; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC778;&#xACFC; &#xB300;&#xB9AC;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pst pathogenicity &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810;&#xC740; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC870;&#xC791; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xD64D;&#xBCF4;&#xB85C; effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xD615;&#xC2DD; III &#xBD84; &#xBE44; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC640; &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC874; &#xC138;&#xD3EC; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC131;&#xC7A5; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xBA74; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; 7 &#xD0DC;&#xD3C9;&#xC591; &#xD45C;&#xC900;&#xC2DC; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558; &#xC5D0;&#xC11C;&#xB9CC; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC138;&#xC6E0;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC131;&#xC7A5; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; Pst &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xACE0;&#xAE30; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0;. 29 &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC911; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;, 5 (HopX1, HopG1, HopT1 1, HopH1 &#xBC0F; AvrPtoB) &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0; &#xC131;&#xC7A5; &#xC800;&#xD574; &#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xACF5;&#xAC1C; HopX1 &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04; &#xC0BC; &#xD22C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xAE30;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; HopX1 &#xAC10;&#xC1E0; &#xB2E4;&#xB978; MAPK &#xACBD;&#xB85C; Hopx1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC57D;&#xAC04; &#xBC1B;&#xC740; &#xBC18;&#xBA74; &#xC0BC; &#xD22C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC740; &#xB192;&#xC740; osmolarity &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; (&#xB3FC;&#xC9C0;) &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; (MAPK) &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, HopX1-&#xC911;&#xC7AC; &#xACE0;&#xAE30; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0;&#xB294; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xC0C1; transglutaminase &#xCD09;&#xB9E4; 3 &#xC778;&#xC870;&#xC5D0; &#xC758;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xACE0;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD6A8; &#xBAA8;, &#xD0DC;&#xD3C9;&#xC591; &#xD45C;&#xC900;&#xC2DC; &#xD615;&#xC2DD; III &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD480; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xACE0;&#xAE30; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC9C4; &#xD575; &#xC138;&#xD3EC; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xC138;&#xADE0; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xC218; &#xB2E8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;.

&#xB179; syringae &#xC720;&#xD615; III &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0;&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4; HopX1 &#xC57D;&#xD654; &#xB192;&#xC740; osmolarity &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xB2C8; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;.

El Gram-negative bacteria Pseudomonas syringae pv. tomate (Pst) es el agente causal de la enfermedad de la Mota en tomate. Patogenicidad de PST depende de un sistema de secreci&oacute;n tipo III que entrega prote&iacute;nas efectoras en las c&eacute;lulas del hu&eacute;sped, donde promueven la enfermedad mediante la manipulaci&oacute;n de procesos en beneficio del pat&oacute;geno. Estudios previos identifican siete efectores de Pst que inhiben el crecimiento cuando se expresan en levaduras bajo condiciones de crecimiento normal, sugiriendo que interfieren con los procesos celulares que se conservan en levaduras y plantas. Presumimos que efectores dirigidos tambi&eacute;n conservados procesos celulares que se requieren para el crecimiento de la levadura s&oacute;lo bajo condiciones de estr&eacute;s. Por lo tanto se examinaron fenotipos inducidos por la expresi&oacute;n de efectores Pst en levaduras cultivadas en presencia de varios factores estresantes. De 29 efectores probado, cinco (HopX1, HopG1, HopT1-1, HopH1 y AvrPtoB) muestran fenotipos de inhibici&oacute;n de crecimiento s&oacute;lo en combinaci&oacute;n con condiciones de estr&eacute;s. An&aacute;lisis de viabilidad revelaron que el efector HopX1 caus&oacute; p&eacute;rdida de viabilidad celular bajo estr&eacute;s osm&oacute;tico prolongado. Usando reporteros de transcripci&oacute;n, encontramos que HopX1 aten&uacute;a la activaci&oacute;n de la elevada osmolaridad glicerol (HOG) activadas por mit&oacute;genos prote&iacute;na quinasa (MAPK) v&iacute;a, que es responsable de la supervivencia de levaduras bajo estr&eacute;s osm&oacute;tico, mientras que otras v&iacute;as MAPK afectaron levemente a HopX1. Curiosamente, fenotipos HopX1-mediada en levaduras eran dependientes en la tr&iacute;ada catal&iacute;tica de transglutaminasa putativos de la unidad de efectos. Este estudio ampl&iacute;a la piscina de fenotipos disponibles para el an&aacute;lisis funcional de los efectores III de tipo Pst en la levadura y ejemplifica c&oacute;mo an&aacute;lisis de fenotipos detectado en levadura bajo condiciones de estr&eacute;s pueden conducir a la identificaci&oacute;n de los procesos celulares eucariotas afectados por efectores bacterianas.

Expresi&oacute;n de efectores III de tipo Pseudomonas syringae en levadura bajo condiciones de estr&eacute;s revela que HopX1 aten&uacute;a la activaci&oacute;n de la v&iacute;a de cinasa de glicerol mapa de elevada osmolaridad.

Iftach Nachman

Department of Biochemistry and Molecular Biology,
George S. Wise Faculty of Life Sciences,
Department of Biochemistry and Molecular Biology, George S. Wise Faculty of Life Sciences

Tel Aviv University

A Microfluidic Device for Studying Multiple Distinct Strains

Iftach Nachman

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Biochemistry and Molecular Biology,George S. Wise Faculty of Life Sciences,Department of Biochemistry and Molecular Biology, George S. Wise Faculty of Life Sciences

Tel Aviv University

A Microfluidic Device for Studying Multiple Distinct Strains

Department of Biochemistry and Molecular Biology,
George S. Wise Faculty of Life Sciences,
Department of Biochemistry and Molecular Biology, George S. Wise Faculty of Life Sciences