Preparation and Culture of Rat Lens Epithelial Explants for Studying Terminal Differentiation

The anterior surface of the ocular lens is covered by a monolayer of epithelial cells, which proliferate in an annular zone underlying the ciliary body.  ...

National Eye Institute (NEI), National Institutes of Health (NIH)

&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x955C;&#x5934;&#x7684;&#x5148;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E; Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EF4;&#x62A4;&#x524D;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x524D;&#x4F53;&#x6C60;&#x8C03;&#x8282;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x662F;&#x5426; Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x540E;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x9700;&#x8981;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x5E76;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8C03;&#x67E5; Notch2 &#x548C; Jagged1 &#x7684;&#x4F5C;&#x7528; (Jag1) &#x5728;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x5927;&#x9F20;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x5916;&#x690D;&#x4F53;&#x672F; FGF-2 &#x4F9D;&#x8D56;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;FGF &#x8BF1;&#x5BFC; Jag1 &#x8868;&#x8FBE;&#x53CA; Notch2 12-24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x5185;&#x4FE1;&#x53F7; &#xFF08;&#x5982;&#x6FC0;&#x6D3B; Notch2 &#x80DE;&#x5185;&#x57DF; (N2ICD) &#x7684;&#x5916;&#x8868;&#x6765;&#x770B;&#xFF09;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x66F4;&#x6539;&#x4E86;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7F3A;&#x53E3;&#x6548;&#x5E94;&#xFF0C;Hes5&#xFF0C;(N cad)&#x3001; N-&#x9499;&#x7C98;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0A;&#x8C03;&#x548C;&#x4E0B;&#x8C03;&#x7684; E-&#x9499; (E-cad)&#xFF0C;&#x9499;&#x5F00;&#x5173;&#x7279;&#x6027;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x3002;Jag1 &#x611F;&#x5E94;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x963B;&#x6B62;&#x7684; U0126&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242; MAPK/ERK &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x901A;&#x8FC7;&#x6B64;&#x9014;&#x5F84;&#x4E0B;&#x6E38; FGF &#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x6FC0;&#x6D3B; MAPK/ERK &#x4FE1;&#x53F7; &#xFF08;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; &#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x884D;&#x751F;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; &#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x6837;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;) &#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x56E0;&#x7D20;&#x786E;&#x5B9E;&#x4E0D;&#x4FC3;&#x4F7F; Jag1&#x3002;Notch &#x4F7F;&#x7528;&#x4F3D;&#x739B; secretase &#x6291;&#x5236;&#x5242; DAPT &#x548C; L 685,458 &#x6216;&#x53CD; Jag1 &#x6297;&#x4F53;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0B;&#x964D;&#x8868;&#x660E;&#x69FD;&#x53E3;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6A2A;&#x5411;&#x611F;&#x5E94;&#x7684; Jag1 FGF &#x4F9D;&#x8D56;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236; Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x51CF;&#x5C11; N-cad&#x3001; &#x8868;&#x8FBE;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#xFF0C;p57Kip2&#xFF0C;&#x5728;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D; Notch &#x4E3A;&#x6307;&#x793A;&#x7740;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x69FD;&#x53E3;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684; Jag1 &#x4FA7;&#x611F;&#x5E94; FGF &#x4F9D;&#x8D56;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;

&#x9700;&#x8981; Jagged1 FGF &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6676;&#x72B6;&#x4F53;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x5206;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x6A2A;&#x5411;&#x611F;&#x5E94; notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;

Previous studies of the developing lens have shown that Notch signaling regulates differentiation of lens fiber cells by maintaining a proliferating precursor pool in the anterior epithelium. However, whether Notch signaling is further required after the onset of fiber cell differentiation is not clear. This work investigates the role of Notch2 and Jagged1 (Jag1) in secondary fiber cell differentiation using rat lens epithelial explants undergoing FGF-2 dependent differentiation in vitro. FGF induced Jag1 expression and Notch2 signaling (as judged by the appearance of activated Notch2 Intracellular Domain (N2ICD)) within 12-24 h. These changes were correlated with induction of the Notch effector, Hes5, upregulation of N-cadherin (N-cad), and downregulation of E-cadherin (E-cad), a cadherin switch characteristic of fiber cell differentiation. Induction of Jag1 was efficiently blocked by U0126, a specific inhibitor of MAPK/ERK signaling, indicating a requirement for signaling through this pathway downstream of the FGF receptor. Other growth factors that activate MAPK/ERK signaling (EGF, PDGF, IGF) did not induce Jag1. Inhibition of Notch signaling using gamma secretase inhibitors DAPT and L-685,458 or anti-Jag1 antibody markedly decreased FGF-dependent expression of Jag1 demonstrating Notch-dependent lateral induction. In addition, inhibition of Notch signaling reduced expression of N-cad, and the cyclin dependent kinase inhibitor, p57Kip2, indicating a direct role for Notch signaling in secondary fiber cell differentiation. These results demonstrate that Notch-mediated lateral induction of Jag1 is an essential component of FGF-dependent lens fiber cell differentiation.

Notch signaling is required for lateral induction of Jagged1 during FGF-induced lens fiber differentiation.

Des &#xE9;tudes ant&#xE9;rieures de la lentille en d&#xE9;veloppement ont montr&#xE9; que la signalisation Notch r&#xE9;gule la diff&#xE9;renciation des cellules des fibres de lentilles par le maintien d&#x26;#39;un pool de pr&#xE9;curseur prolif&#xE9;ration dans l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium ant&#xE9;rieur. Toutefois, si la signalisation Notch est en outre n&#xE9;cessaire apr&#xE8;s le d&#xE9;but de la diff&#xE9;renciation cellulaire des fibres n&#x26;#39;est pas clair. Ce travail &#xE9;tudie le r&#xF4;le de Notch2 et Jagged1 (JAG1) dans la diff&#xE9;renciation des fibres cellule secondaire &#xE0; partir d&#x26;#39;explants de lentilles de rat &#xE9;pith&#xE9;liales subissent le FGF-2 de diff&#xE9;renciation d&#xE9;pend in vitro. FGF induit JAG1 expression et de signalisation (NOTCH2 &#xE0; en juger par l&#x26;#39;apparence de activ&#xE9; Notch2 domaine intracellulaire (N2ICD)) dans les 12-24 h. Ces changements ont &#xE9;t&#xE9; corr&#xE9;l&#xE9;es avec l&#x26;#39;induction de la voie Notch effecteur, Hes5, la r&#xE9;gulation positive de la N-cadh&#xE9;rine (N-cad), et la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de la E-cadh&#xE9;rine (E-cad), une caract&#xE9;ristique interrupteur cadh&#xE9;rine de la diff&#xE9;renciation cellulaire de la fibre. L&#x26;#39;induction de JAG1 a &#xE9;t&#xE9; bloqu&#xE9; efficacement par U0126, un inhibiteur sp&#xE9;cifique de MAPK / ERK, indiquant une exigence pour la signalisation &#xE0; travers cette voie en aval du r&#xE9;cepteur FGF. Autres facteurs de croissance qui activent MAPK / ERK (EGF, le PDGF, IGF) n&#x26;#39;a pas induit de JAG1. L&#x26;#39;inhibition de la signalisation Notch en utilisant gamma s&#xE9;cr&#xE9;tase inhibiteurs DAPT et L-685, 458 ou anti-JAG1 anticorps nettement diminu&#xE9; FGF-d&#xE9;pendante l&#x26;#39;expression de Notch JAG1 d&#xE9;montrant l&#x26;#39;induction li&#xE9;e lat&#xE9;rale. En outre, l&#x26;#39;inhibition de la signalisation Notch r&#xE9;duit l&#x26;#39;expression de la N-cad, et l&#x26;#39;inhibiteur de kinase cycline-d&#xE9;pendante, p57KIP2, indiquant un r&#xF4;le direct pour la signalisation Notch dans la diff&#xE9;renciation cellulaire des fibres secondaires. Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que Notch m&#xE9;di&#xE9;e par induction lat&#xE9;rale de JAG1 est une composante essentielle de la FGF-d&#xE9;pendante de la diff&#xE9;renciation cellulaire lentille de fibre.

De signalisation Notch est n&#xE9;cessaire pour l&#x26;#39;induction lat&#xE9;rale de Jagged1 Pendant FGF-induite diff&#xE9;renciation des fibres optique

Fr&uuml;here Studien der entwickelnden Linse zeigten, dass Notch Signalisierung Differenzierung Objektiv Faser Zellen reguliert durch die Pflege eines wuchernden Vorl&auml;ufer-Pools in der vorderen Epithel. Ob Notch Signalisierung weiter nach erforderlich ist ist der Beginn der Faser Zelldifferenzierung jedoch nicht klar. Diese Arbeit untersucht die Rolle von Notch2 und Jagged1 (Jag1) im sekund&auml;ren Faser Zelldifferenzierung mit Ratte Objektiv epitheliale Explantaten FGF-2 abh&auml;ngige Differenzierung in-vitro-unterzogen. FGF induzierte Jag1 Ausdruck und Notch2 Signalisierung (wie durch das Auftreten von aktivierten Notch2 intrazellul&auml;re Dom&auml;ne (N2ICD) beurteilt) innerhalb von 12-24 h. Diese &Auml;nderungen wurden mit Induktion von Notch Effektor, Hes5, Hochregulation von N-Cadherin (N-Cad) und Heraufregulation des E-Cadherin (E-Cad), ein Cadherin-Schalter, die charakteristisch f&uuml;r Faser-Zelldifferenzierung korreliert. Induktion von Jag1 wurde effizient durch U0126, einen speziellen Inhibitor der MAPK/ERK Signalisierung, angibt, eine Voraussetzung f&uuml;r die Signalisierung durch diese Pathway stromabw&auml;rts von der FGF-Rezeptor blockiert. Andere Wachstumsfaktoren, die MAPK/ERK Signalisierung (EGF, PDGF, IGF) aktivieren nicht Jag1 induzieren. Hemmung der Notch Signalisierung mit Gamma-Sekretase-Inhibitoren DAPT und L-685.458 oder Anti-Jag1 Antik&ouml;rper deutlich zur&uuml;ckgegangen FGF-abh&auml;ngigen Ausdruck Jag1 demonstrieren Notch-abh&auml;ngige seitliche Induktion. Zus&auml;tzlich reduziert Hemmung Kerbe zu signalisieren, Ausdruck der N-Cad und der cyclin abh&auml;ngigen Kinasehemmer, p57Kip2, eine direkte Rolle f&uuml;r Notch signalisieren in sekund&auml;ren Faser Zelldifferenzierung angibt. Diese Ergebnisse zeigen, dass Notch-vermittelte seitliche Induktion von Jag1 ein wesentlicher Bestandteil der FGF-abh&auml;ngige Objektiv Faser Zelldifferenzierung.

Signalisierung der Kerbe ist f&uuml;r seitliche Induktion von Jagged1 w&auml;hrend FGF-induzierte Objektiv Faser Differenzierung erforderlich.

Studi precedenti della lente in via di sviluppo hanno mostrato che Notch signaling regola la differenziazione delle cellule della fibra ottica attraverso il mantenimento di un pool di precursori proliferante nell&#39;epitelio anteriore. Tuttavia, se la tacca di segnalazione &egrave; necessaria ulteriore dopo l&#39;insorgenza della differenziazione delle cellule di fibra non &egrave; chiara. Questo lavoro indaga il ruolo di Notch2 e Jagged1 (Jag1) nel differenziamento cellulare fibra secondaria usando ratto lente epiteliali espianti in fase di FGF-2 dipendente dalla differenziazione in vitro. FGF indotta Jag1 espressione e Notch2 segnalazione (come giudicato dall&#39;apparizione di attivato Notch2 dominio intracellulare (N2ICD)) entro 12-24 h. Queste modifiche erano correlate con induzione di effector il tacca, Hes5, sovraregolazione di N-caderina (N-cad) e downregulation di E-caderina E (cad), un interruttore di cadherin caratteristico di differenziazione delle cellule di fibra. Induzione di Jag1 efficiente &egrave; stato bloccato da U0126, un inibitore specifico di MAPK/ERK di segnalazione, che indica un requisito per la segnalazione attraverso questo percorso a valle del recettore FGF. Altri fattori di crescita che attivano la via MAPK/ERK segnalazione (EGF, PDGF, IGF) non ha indotto Jag1. Inibizione della tacca di segnalazione utilizzando gamma secretasi inibitori DAPT e L-685.458 o anti-Jag1 anticorpo marcatamente diminuita espressione di FGF-dipendente di Jag1 dimostrando induzione laterale-tacca-dipendente. Inoltre, l&#39;inibizione della tacca di segnalazione ridotta espressione di N-cad e l&#39;inibitore della chinasi dipendente cyclin, p57Kip2, che indica un ruolo diretto per tacca di segnalazione nel differenziamento cellulare fibra secondaria. Questi risultati dimostrano che mediata da tacca laterale induzione di Jag1 &egrave; un componente essenziale di differenziazione delle cellule di FGF-dipendente lente fibra.

Tacca di segnalazione &egrave; necessaria per l&#39;induzione laterale del Jagged1 durante la differenziazione di fibre lente FGF-indotta.

&#x958B;&#x767A;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x304C;&#x524D;&#x65B9;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6C34;&#x6676;&#x4F53;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x5F8C;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306F;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;FGF-2&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x7D4C;&#x3066;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6C34;&#x6676;&#x4F53;&#x4E0A;&#x76AE;&#x306E;&#x5916;&#x690D;&#x7247;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Notch2&#x3068;Jagged1&#xFF08;JAG1&#xFF09;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3059;&#x308B;&#x3002; FGF&#x8A98;&#x5C0E;JAG1&#x5F0F;&#x3068;12&#x304B;&#x3089;24&#x6642;&#x9593;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;Notch2&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;Notch2&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#xFF08;N2ICD&#xFF09;&#x306E;&#x5916;&#x89B3;&#x3067;&#x5224;&#x65AD;&#xFF09;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3001;Hes5&#x3001;N-&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;N-CAD&#xFF09;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;E-&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF08;E-CAD&#xFF09;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002; JAG1&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;FGF&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x4E0B;&#x6D41;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;U0126&#x3001;MAPK / ERK&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MAPK / ERK&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#xFF08;EGF&#x3001;PDGF&#x3001;IGF&#xFF09;&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x4ED6;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x306F;JAG1&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; &#x3B3;&#x30BB;&#x30AF;&#x30EC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;DAPT&#x3068;L-685&#x3001;458&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6297;JAG1&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x304C;&#x8457;&#x3057;&#x304F;JAG1&#x30C7;&#x30E2;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;FGF-&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x793A;&#x3059;N-CAD&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;p57Kip2&#x306F;&#x3001;Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x307B;&#x304B;&#x306B;&#x3001;&#x963B;&#x5BB3;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;JAG1&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30C1;&#x5A92;&#x4ECB;&#x6A2A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;FGF&#x4F9D;&#x5B58;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x5FC5;&#x9808;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306F;FGF-&#x8A98;&#x5C0E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D;&#x306B;Jagged1&#x306E;&#x6A2A;&#x65B9;&#x5411;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;

&#xAC1C;&#xBC1C; &#xB80C;&#xC988;&#xC758; &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC55E;&#xCABD;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xD53C;&#xC5D0; &#xBC29;&#xC9C0;&#xD560; &#xC804;&#xC870; &#xD480;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xC5EC; &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD6C4; &#xCD94;&#xAC00; &#xD544;&#xC694; &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5EC;&#xBD80; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC791;&#xC5C5;&#xC744; notch2&#xC640; jagged1&#xC758; &#xC5ED;&#xD560; &#xC870;&#xC0AC; (Jag1) 2 &#xCC28; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; FGF 2 &#xC885;&#xC18D; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xCCB4; &#xC678;&#xB97C; &#xBC1B;&#xACE0; &#xC0C1;&#xD53C; explants &#xB80C;&#xC988; &#xC950;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. FGF Jag1 &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; Notch2 12-24 &#xC2DC;&#xAC04; &#xC774;&#xB0B4; (&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; Notch2 &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (N2ICD)&#xC758; &#xC678;&#xBAA8;&#xB85C; &#xD310;&#xB2E8;)&#xB85C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC720;&#xBC1C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xB178;&#xCE58; &#xC774;&#xD399;&#xD130;, Hes5, N-cadherin (N-cad)&#xC758; upregulation &#xBC0F; E-cadherin (&#xC804;&#xC790; cad), &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; cadherin &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&#xC758; downregulation&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xD588;&#xB2E4;. Jag1&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; U0126, MAPK &#xC2E0;&#xD638;, &#xD558;&#xB958; FGF &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758;&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; ERK&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. MAPK/ERK (EGF, PDGF, IGF) &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790;&#xB294; jag1&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xB9C8; secretase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; DAPT &#xBC0F; L-685,458 &#xB610;&#xB294; &#xC548;&#xD2F0;-Jag1 &#xD56D; &#xCCB4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xD638; &#xB178;&#xCE58;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C; &#xAC10;&#xC18C; FGF &#xC885;&#xC18D; &#xC2DD; jag1&#xC758; &#xB178;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xCE21;&#xBA74; &#xC720;&#xB3C4; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5B5;&#xC81C; &#xAC10;&#xC18C; N cad &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; cyclin &#xC758;&#xC874; kinase &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; p57Kip2, &#xB178;&#xCE58; &#xBCF4;&#xC870; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC785;&#xC99D; jag1&#xC758; &#xCE21;&#xBA74; &#xC720;&#xB3C4; &#xB178;&#xCE58; &#xC911;&#xC7AC; FGF &#xC885;&#xC18D; &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; FGF &#xC720;&#xB3C4; &#xB80C;&#xC988; &#xC12C;&#xC720; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; jagged1&#xC758; &#xCE21;&#xBA74; &#xC720;&#xB3C4; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;.

Los estudios previos de la lente en desarrollo han demostrado que la muesca de se&#xF1;alizaci&#xF3;n regula la diferenciaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas de fibra de lentes mediante el mantenimiento de una piscina precursor proliferantes en el epitelio anterior. Sin embargo, si la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Notch Se requiere adem&#xE1;s despu&#xE9;s del inicio de la diferenciaci&#xF3;n celular de fibra no est&#xE1; claro. Este trabajo investiga el papel de Notch2 y Jagged1 (Jag1) en la diferenciaci&#xF3;n celular secundaria de fibra utilizando explantes de rata epiteliales de la lente se someten a FGF-2 dependiente de la diferenciaci&#xF3;n in vitro. FGF inducida Jag1 expresi&#xF3;n y Notch2 se&#xF1;alizaci&#xF3;n (a juzgar por la apariencia de activado Notch2 dominio intracelular (N2ICD)) dentro de las 12-24 h. Estos cambios se correlacionaron con la inducci&#xF3;n de la Notch efector, HES5, la regulaci&#xF3;n positiva de la cadherina N (N-CAD), y la regulaci&#xF3;n a la baja de la E-cadherina (E-CAD), una caracter&#xED;stica interruptor de cadherina de la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas de fibra. La inducci&#xF3;n de Jag1 fue bloqueada eficientemente por U0126, un inhibidor espec&#xED;fico de MAPK / ERK se&#xF1;alizaci&#xF3;n, lo que indica un requisito para la se&#xF1;alizaci&#xF3;n a trav&#xE9;s de esta v&#xED;a aguas abajo del receptor de FGF. Otros factores de crecimiento que activan MAPK / ERK se&#xF1;alizaci&#xF3;n (EGF, PDGF, IGF) no indujo Jag1. La inhibici&#xF3;n de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Notch con inhibidores de la gamma secretasa DAPT y L-685, 458 o anticuerpo anti-Jag1 disminuy&#xF3; notablemente el FGF-dependiente de la expresi&#xF3;n de Jag1 demostrando Notch-dependen de la inducci&#xF3;n lateral. Adem&#xE1;s, la inhibici&#xF3;n de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n Notch reduce la expresi&#xF3;n de N-cad, y el inhibidor de quinasas dependientes de ciclina, p57KIP2, lo que indica un papel directo de se&#xF1;alizaci&#xF3;n Notch en la diferenciaci&#xF3;n celular secundaria de la fibra. Estos resultados demuestran que la muesca mediada por la inducci&#xF3;n lateral de Jag1 es un componente esencial de FGF-dependiente diferenciaci&#xF3;n celular lente de fibra.

La se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Notch es necesaria para la inducci&#xF3;n lateral de Jagged1 Durante el FGF-la diferenciaci&#xF3;n inducida por la lente de fibra

Notch &#x4FE1;&#x53F7;&#x662F;&#x9002;&#x5F53;&#x955C;&#x5934;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x6CA1;&#x6709;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E2A;&#x522B;&#x69FD;&#x53E3;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x5177;&#x4F53;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; Notch2 &#x6761;&#x4EF6;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x5C0F;&#x773C;&#x7403;&#x81F4;&#x75C5;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x77B3;&#x5B54;&#x5F00;&#x53E3;&#xFF0C;&#x7834;&#x574F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#xFF0C;&#x6700;&#x7EC8;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x524D;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x4E0D;&#x5168;&#x3001; &#x51C0;&#x5316;&#x5DE5;&#x827A;&#x7F3A;&#x9677;&#x548C;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#x6676;&#x4F53;&#x8868;&#x578B;&#x3002;Notch2 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; E14.5 &#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F66;&#x53A2;&#x8FD8;&#x6301;&#x7EED;&#x955C;&#x5934;&#x79F8;&#x79C6;&#x5C3D;&#x65E9; E11.5&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5F02;&#x5E38; DNA &#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x540E;&#x7684; Notch2 &#x7684;&#x635F;&#x5931;&#xFF0C;&#x6709;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x5347;&#x9AD8; Cdkn1a &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8C03;&#x8282;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684; (p21Cip1)&#x3001; Ccnd2 (CyclinD2) &#x548C; Trp63 (p63) &#x7684;&#x6D88;&#x6781;&#x8C03;&#x8282; Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x518D;&#x52A0;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x8C03; Cdh1 (E-&#x9499;&#x7C98;&#x86CB;&#x767D;)&#x3002;Notch2 &#x53BB;&#x9664;&#x8FD8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5982;&#x5728; Rbpj &#x548C; Jag1 &#x6761;&#x4EF6;&#x7A81;&#x53D8;&#x955C;&#x5934;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;Notch2 &#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x673A;&#x573A;&#x5FEB;&#x7EBF;&#x6269;&#x6563;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x8C03;&#x8282;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; Notch2 &#x901A;&#x5E38;&#x963B;&#x6B62;&#x955C;&#x5934;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x603B;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA; Notch2 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x8C03;&#x8282;&#x955C;&#x5934;&#x5F62;&#x6001;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x64A4;&#x51FA;&#x548C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x3002;

Notch2 &#x53D7;&#x4F53;&#x5728;&#x773C;&#x955C;&#x5934;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x6D88;&#x878D;&#x3002;

Notch signaling is essential for proper lens development, however the specific requirements of individual Notch receptors have not been investigated. Here we report the lens phenotypes of Notch2 conditionally mutant mice, which exhibited severe microphthalmia, reduced pupillary openings, disrupted fiber cell morphology, eventual loss of the anterior epithelium, fiber cell dysgenesis, denucleation defects, and cataracts. Notch2 mutants also had persistent lens stalks as early as E11.5, and aberrant DNA synthesis in the fiber cell compartment by E14.5. Gene expression analyses showed that upon loss of Notch2, there were elevated levels of the cell cycle regulators Cdkn1a (p21Cip1), Ccnd2 (CyclinD2), and Trp63 (p63) that negatively regulates Wnt signaling, plus down-regulation of Cdh1 (E-Cadherin). Removal of Notch2 also resulted in an increased proportion of fiber cells, as was found in Rbpj and Jag1 conditional mutant lenses. However, Notch2 is not required for AEL proliferation, suggesting that a different receptor regulates this process. We found that Notch2 normally blocks lens progenitor cell death. Overall, we conclude that Notch2-mediated signaling regulates lens morphogenesis, apoptosis, cell cycle withdrawal, and secondary fiber cell differentiation.

Conditional ablation of the Notch2 receptor in the ocular lens.

Signalisation Notch est essentiel pour le d&#xE9;veloppement lentille correcte, mais les exigences sp&#xE9;cifiques de r&#xE9;cepteurs Notch individuels n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; investigu&#xE9;s. Ici, nous rapportons les ph&#xE9;notypes de lentilles de NOTCH2 souris mutantes conditionnellement, qui pr&#xE9;sentaient microphtalmie s&#xE9;v&#xE8;re, la r&#xE9;duction des ouvertures pupillaires, perturb&#xE9; la morphologie des cellules de fibres, de la perte &#xE9;ventuelle de l&#x26;#39;&#xE9;pith&#xE9;lium, dysg&#xE9;n&#xE9;sie ant&#xE9;rieure cellule de fibres, de d&#xE9;fauts denucleation et les cataractes. NOTCH2 mutants &#xE9;galement eu tiges de lentilles persistants que d&#xE8;s E11.5, et la synth&#xE8;se d&#x26;#39;ADN aberrant dans le compartiment de la cellule de fibres par E14.5. Analyses d&#x26;#39;expression g&#xE9;nique ont montr&#xE9; que lors de la perte de Notch2, il y avait des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s de la r&#xE9;glementation du cycle cellulaire CDKN1A (p21Cip1), Ccnd2 (CyclinD2), et Trp63 (p63) qui r&#xE9;gule n&#xE9;gativement la signalisation Wnt, ainsi que la r&#xE9;gulation n&#xE9;gative de Cdh1 (E-cadh&#xE9;rine ). Enl&#xE8;vement des Notch2 &#xE9;galement donn&#xE9; lieu &#xE0; une proportion accrue de cellules fibreuses, comme on l&#x26;#39;a trouv&#xE9; dans Rbpj et JAG1 conditionnelles lentilles mutantes. Toutefois, Notch2 n&#x26;#39;est pas requise pour la prolif&#xE9;ration AEL, ce qui sugg&#xE8;re que un r&#xE9;cepteur diff&#xE9;rent r&#xE9;glemente ce processus. Nous avons constat&#xE9; que Notch2 normalement lentille blocs anc&#xEA;tre mort cellulaire. Dans l&#x26;#39;ensemble, nous concluons que Notch2 la signalisation m&#xE9;di&#xE9;e par r&#xE9;glemente la morphogen&#xE8;se objectif, l&#x26;#39;apoptose, le retrait du cycle cellulaire, la diff&#xE9;renciation cellulaire et secondaire de la fibre.

Ablation conditionnelle du r&#xE9;cepteur Notch2 dans la lentille oculaire

Kerbe Signalisierung unbedingt richtige Objektiv-Entwicklung, jedoch nicht die spezifischen Anforderungen der einzelnen Notch Rezeptoren untersucht haben. Hier berichten wir &uuml;ber die Objektiv-Ph&auml;notypen Notch2 bedingt Mutante M&auml;use, die schweren Mikrophthalmie ausgestellt, Pupillen &Ouml;ffnungen reduziert, gest&ouml;rt Faser Zellmorphologie, letztendlichen Verlust der vorderen Epithel Faser Zelle Dysgenesie, Denucleation M&auml;ngel, und Katarakte. Notch2 Mutanten hatte auch persistente Objektiv Stiele bereits als E11.5 und aberrante DNA-Synthese in der Faser Zelle Fach von E14.5. Gen Ausdruck Analysen nachwiesen, dass beim Ausfall der Notch2, erh&ouml;hte Niveaus der Zellzyklus Regulatoren Cdkn1a (p21Cip1), Ccnd2 (CyclinD2), und Trp63 (p63) reguliert, die negativ Wnt signalisieren, zuz&uuml;glich Herunterregulation Cdh1 (E-Cadherin). Entfernung von Notch2 f&uuml;hrte ebenfalls einen erh&ouml;hten Anteil an Ballaststoffen Zellen, wie in Rbpj und Jag1 bedingte mutant Objektive gefunden wurde. Ist jedoch Notch2 nicht erforderlich f&uuml;r die Vermehrung von AEL, was darauf hindeutet, dass ein anderes Rezeptor dieser Prozess regelt. Wir fanden, dass Notch2 normalerweise Objektiv Stammvater Zelltod blockiert. Insgesamt schlie&szlig;en wir, dass Notch2-vermittelte Signalisierung Objektiv Morphogenese, Apoptosis, Zellzyklus R&uuml;ckzug und sekund&auml;ren Faser Zelldifferenzierung regelt.

Bedingte Ablation des Notch2-Rezeptors in der okul&auml;re Linse.

Tacca di segnalazione &egrave; essenziale per lo sviluppo obiettivo corretto, tuttavia non sono state indagate le esigenze specifiche dei singoli recettori Notch. Qui riportiamo i fenotipi lente di Notch2 topi condizionalmente mutanti, che esposto microftalmia severa, ridotto aperture pupillare, sconvolto la morfologia cellulare fibra, eventuale perdita del epitelio anteriore, disgenesia cella fibra, denucleation difetti e cataratta. Notch2 mutanti avevano anche persistenti lente gambi gi&agrave; come E11.5 e la sintesi del DNA aberrante nel vano cella fibra di E14.5. Analisi di espressione genica hanno dimostrato che sulla perdita di Notch2, ci sono stati livelli elevati del ciclo delle cellule regolatori Cdkn1a (p21Cip1), Ccnd2 (CyclinD2) e Trp63 (p63) che regola negativamente segnalazione Wnt, oltre a down-regulation di Cdh1 (E-caderina). Rimozione di Notch2 ha portato anche in una percentuale maggiore di cellule di fibra, come &egrave; stato trovato in Rbpj e Jag1 lenti mutante condizionale. Tuttavia, Notch2 non &egrave; necessaria per la proliferazione di AEL, suggerendo che un recettore diverso regola questo processo. Abbiamo trovato che la Notch2 blocca normalmente lente progenitrici delle cellule morte. In generale, possiamo concludere che Notch2-mediata segnalazione regola la morfogenesi lente, apoptosi, ritiro del ciclo cellulare e differenziamento cellulare fibra secondaria.

Ablazione condizionale del recettore Notch2 la lente oculare.

Notch&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;Notch&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x304C;&#x691C;&#x8A0E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x91CD;&#x7BE4;&#x306A;&#x773C;&#x7403;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;Notch2&#x6761;&#x4EF6;&#x4ED8;&#x304D;&#x5909;&#x7570;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3001;&#x6E1B;&#x5C11;&#x77B3;&#x5B54;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x90E8;&#x306F;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x7834;&#x58CA;&#x3057;&#x3001;&#x524D;&#x65B9;&#x306E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x80B2;&#x4E0D;&#x5168;&#x306E;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x640D;&#x5931;&#x3001;&#x8131;&#x6838;&#x6B20;&#x9665;&#x3001;&#x767D;&#x5185;&#x969C;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Notch2&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;E14.5 E11.5&#x3067;&#x65E9;&#x304F;&#x3082;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x5185;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;DNA&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x830E;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;Notch2&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x8CA0;&#x306E;Wnt&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;CDKN1A&#xFF08;p21Cip1&#xFF09;&#x3001;Ccnd2&#xFF08;CyclinD2&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;Trp63&#xFF08;P63&#xFF09;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;CDH1&#xFF08;E-&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3002;&#xFF09; Rbpj&#x3068;JAG1&#x6761;&#x4EF6;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;Notch2&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;Notch2&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;AEL&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;Notch2&#x901A;&#x5E38;&#x306F;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;Notch2&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x306E;&#x64A4;&#x9000;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4E8C;&#x6B21;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x63A5;&#x773C;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;Notch2&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x30A2;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;

&#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xB178;&#xCE58; &#xC2E0;&#xD638; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xB178;&#xCE58; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xB80C;&#xC988; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; microphthalmia &#xC804;&#xC2DC;, &#xB3D9; &#xACF5; &#xAD6C;&#xBA4D; &#xAC10;&#xC18C;, &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;, &#xC55E;&#xCABD;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xD53C;, &#xC12C;&#xC720; &#xC140; dysgenesis, denucleation &#xACB0;&#xD568; &#xBC31; &#xB0B4;&#xC7A5;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xCC28;&#xC9C8;&#xC774; Notch2 &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xB80C;&#xC988; &#xACE0;&#xAE30; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Notch2 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; E14.5&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC12C;&#xC720; &#xC140; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC601;&#xAD6C; &#xB80C;&#xC988; &#xC904;&#xAE30; &#xC77C;&#xCC0D; E11.5, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD0C8; &#xC120; DNA &#xD569;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC9C4; &#xC2DD; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; notch2&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; Cdkn1a (p21Cip1), ccnd2&#xAC00; &#xC788;&#xB2E4;&#xACE0; (CyclinD2), &#xBC0F; trp63&#xB294; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; Wnt &#xC2E0;&#xD638; &#xD50C;&#xB7EC;&#xC2A4; cdh1&#xC758; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; (p63) &#xADDC;&#xC81C; (&#xC804;&#xC790; Cadherin). Notch2&#xC758; &#xC81C;&#xAC70; &#xB610;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xBE44;&#xC728; Rbpj&#xACFC; Jag1 &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB80C;&#xC988;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, Notch2 &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; AEL &#xD655;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xAC00;&#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xC790;. Notch2 &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB80C;&#xC988; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FD;&#xC74C; &#xCC28;&#xB2E8;&#xB97C; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB80C;&#xC988; morphogenesis, apoptosis, &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xCCA0;&#xC218; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC870; &#xC12C;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654; &#xC870;&#xC808; &#xC2E0;&#xD638; Notch2 &#xC911;&#xC7AC; &#xACB0;&#xB860;.

&#xB208; &#xB80C;&#xC988;&#xC5D0; Notch2 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC870;&#xAC74;&#xBD80; &#xC808;&#xC81C;.

Se&#xF1;alizaci&#xF3;n Notch es esencial para el desarrollo lente adecuada, sin embargo los requisitos espec&#xED;ficos de receptores Notch individuales no han sido investigados. Aqu&#xED; mostramos los fenotipos de la lente de Notch2 los ratones mutantes condicionalmente, que presentaban severas microftalmia, la reducci&#xF3;n de las aberturas pupilares, interrumpido morfolog&#xED;a de las c&#xE9;lulas de fibra, la eventual p&#xE9;rdida del epitelio anterior de disgenesia, c&#xE9;lula de la fibra, defectos denucleation y cataratas. Notch2 mutantes tambi&#xE9;n ten&#xED;an tallos persistentes lentes tan pronto como E11.5 y la s&#xED;ntesis de ADN aberrante en el compartimento de c&#xE9;lulas de fibra por E14.5. Los an&#xE1;lisis de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica mostraron que, tras la p&#xE9;rdida de Notch2, hab&#xED;a niveles elevados de la del ciclo celular reguladores CDKN1A (p21Cip1), Ccnd2 (CyclinD2), y Trp63 (p63), que regula negativamente la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de Wnt, adem&#xE1;s de la baja regulaci&#xF3;n de Cdh1 (E-cadherina ). La eliminaci&#xF3;n de Notch2 tambi&#xE9;n dio lugar a una mayor proporci&#xF3;n de c&#xE9;lulas de fibra, como se constat&#xF3; en Rbpj y JAG1 lentes de mutantes condicionales. Sin embargo, Notch2 no es necesario para la proliferaci&#xF3;n AEL, lo que sugiere que un receptor diferente regula este proceso. Hemos encontrado que Notch2 normalmente lente bloques progenitora la muerte celular. En general, llegamos a la conclusi&#xF3;n de que Notch2 regula la se&#xF1;alizaci&#xF3;n mediada por la morfog&#xE9;nesis del objetivo, la apoptosis, la retirada del ciclo celular y la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas de fibra secundaria.

Senthil S. Saravanamuthu

Laboratory of Molecular and Developmental Biology

National Eye Institute (NEI), National Institutes of Health (NIH)

Preparation and Culture of Rat Lens Epithelial Explants for Studying Terminal Differentiation

Senthil S. Saravanamuthu

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Laboratory of Molecular and Developmental Biology

National Eye Institute (NEI), National Institutes of Health (NIH)

Preparation and Culture of Rat Lens Epithelial Explants for Studying Terminal Differentiation

Laboratory of Molecular and Developmental Biology