Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech

In this video, we show the use of a pneumatic capillary gun for the accurate biolistic delivery of reagents into live tissue. We use the procedure to ...

University of California San Diego - UCSD

&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x63A2;&#x7A76;&#x88AB;&#x52A8;&#x51FA;&#x73B0;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x6599;&#x4E2D;&#x5FAE;&#x89C2;&#x901A;&#x9053;&#x7684;&#x4F4E;&#x96F7;&#x8BFA;&#x6570;&#x6D41;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x3002;&#x8BE5;&#x9891;&#x9053;&#x662F;&#x91CD;&#x590D;&#x540C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x751F;&#x6210;&#x4E09;&#x7EF4;&#x6E90;&#x6E90;&#x4E0D;&#x65AD;&#x4E0E;&#x62C9;&#x4F38;&#x548C;&#x6298;&#x53E0;&#xFF0C;&#x548C;&#x6DF7;&#x6C8C;&#x6DF7;&#x5408;&#x6BB5;&#x94FE;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x6D41;&#x4E2D;&#x8FDB;&#x884C;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x53D1;&#x73B0;&#x540C;&#x610F; Batchelor &#x5236;&#x5EA6;&#x4E2D;&#x6D41;&#x52A8;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x7684;&#x7406;&#x8BBA;&#x548C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7ED3;&#x679C;&#x90FD;&#x662F;&#x6DF7;&#x6C8C;&#x4E2D;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x62DF;&#x8BAE;&#x7684;&#x5FAE;&#x901A;&#x9053;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5FEB;&#x901F;&#x3001; &#x9AD8;&#x6548;&#x5730;&#x6DF7;&#x5408;&#x548C;&#x7B80;&#x5355;&#x5236;&#x4F5C;&#x3002;

&#x6DF7;&#x6C8C;&#x4E2D;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6D41;&#x5FAE;&#x901A;&#x9053;&#x6DF7;&#x5408;&#x3002;

We report experiments on mixing of a passively advected fluorescent dye in a low Reynolds number flow in a microscopic channel. The channel is a chain of repeating segments with a custom designed profile that generates a steady three-dimensional flow with stretching and folding, and chaotic mixing. A few statistical characteristics of mixing in the flow are studied and are all found to agree with theoretical and experimental results for the flows in the Batchelor regime of mixing that are chaotic in time. The proposed microchannel provides fast and efficient mixing and is simple to fabricate.

Chaotic mixing in a steady flow in a microchannel.

Nous rapportons des exp&eacute;riences sur le m&eacute;lange d&#39;un colorant fluorescent advection passivement &agrave; un faible d&eacute;bit de nombre de Reynolds dans un canal microscopique. Le canal est une cha&icirc;ne de r&eacute;p&eacute;ter les segments avec un profil personnalis&eacute; con&ccedil;u qui g&eacute;n&egrave;re un flux constant en trois dimensions avec &eacute;tirement et pliage et le m&eacute;lange chaotique. Quelques caract&eacute;ristiques statistiques de m&eacute;lange des flux sont &eacute;tudi&eacute;s et sont tous en accord avec les r&eacute;sultats th&eacute;oriques et exp&eacute;rimentaux pour les flux dans le r&eacute;gime de Batchelor de m&eacute;lange qui sont chaotiques dans le temps. Le projet microchannel fournit un m&eacute;lange rapide et efficace et simple &agrave; fabriquer.

Chaotique, m&eacute;langeant dans un flux constant dans un microchannel.

Chaotische Mischen in einem stetigen Fluss in einem Mikrokanal.

Riportiamo gli esperimenti sulla miscelazione di una tintura fluorescente advected passivamente in un basso flusso numero di Reynolds in un canale del microscopico. Il canale &egrave; una catena di ripetere i segmenti con un profilo personalizzato progettato che genera un flusso costante di tridimensionale con stretching e pieghevole e mescolanza caotica. Alcune caratteristiche statistiche di miscelazione nel flusso sono state studiate e sono tutti trovati d&#39;accordo con i risultati teorici e sperimentali per i flussi in regime Batchelor di miscelazione che sono caotici in tempo. Il microchannel proposto fornisce veloce ed efficiente miscelazione ed &egrave; semplice da fabbricare.

Caotico di miscelazione in un flusso costante in un microchannel.

&#x53D7;&#x52D5;&#x7684; advected &#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#x3067;&#x3001;&#x4F4E;&#x30EC;&#x30A4;&#x30CE;&#x30EB;&#x30BA;&#x6570;&#x6D41;&#x308C;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5FAE;&#x8996;&#x7684;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;.&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x6D41;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x3068;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x5F0F;&#x306E;, &#x3068;&#x30AB;&#x30AA;&#x30B9;&#x6DF7;&#x5408;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30E0;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6D41;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D71;&#x8A08;&#x7279;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x3092;&#x6DF7;&#x5408;&#x306E;&#x7406;&#x8AD6;&#x7684;&#x30FB;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x30D0;&#x30C1;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x653F;&#x6A29;&#x5185;&#x6D41;&#x308C;&#x306F;&#x540C;&#x610F;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x6DF7;&#x6C8C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x9AD8;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x6DF7;&#x5408;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x4F5C;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x306F;&#x7C21;&#x5358;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30AB;&#x30AA;&#x30B9;&#x7684;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5B9A;&#x5E38;&#x6D41;&#x306E;&#x6DF7;&#x5408;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBBF8;&#xC138;&#xD55C; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0AE;&#xC740; &#xB808;&#xC774;&#xB180;&#xC988; &#xC218; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0; &#xC218; &#xB3D9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; advected &#xD615;&#xAD11; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xD63C;&#xD569;&#xC5D0; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. &#xCC44;&#xB110; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xCE6D; &#xD558; &#xACE0; &#xC811;&#xB294;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD63C;&#xB780; &#xD63C;&#xD569; &#xAFB8;&#xC900;&#xD55C; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xD750;&#xB984;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; &#xC9C0;&#xC815; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xACFC; &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC758; &#xCCB4;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD63C;&#xD569; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD1B5;&#xACC4;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xBAA8;&#xB450; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD63C;&#xD569; &#xBC30;&#xCCA0;&#xB7EC; &#xC815;&#xAD8C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB860;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC758; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xD63C;&#xB780;. &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xBC84;&#xC2A4;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xCC44;&#xB110; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xBBF9;&#xC2F1; &#xD558;&#xBA70; &#xC870;&#xC791; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558;&#xB2E4;.

&#xD63C;&#xB780; &#xD55C; &#xBC84;&#xC2A4;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAFB8;&#xC900;&#xD55C; &#xD750;&#xB984;&#xC758; &#xD63C;&#xD569;.

Divulgamos experimentos sobre la mezcla de un colorante fluorescente advected pasivamente en un bajo flujo de n&uacute;mero de Reynolds en un canal microsc&oacute;pico. El canal es una cadena de segmentos con un perfil de dise&ntilde;o personalizado que genera un constante flujo tridimensional con estiramiento y plegables y mezcla ca&oacute;tica de repetir. Algunas caracter&iacute;sticas estad&iacute;sticas de mezcla en el flujo se estudian y son todas encontradas de acuerdo con los resultados te&oacute;ricos y experimentales para los flujos en el r&eacute;gimen de Batchelor de mezcla son ca&oacute;ticos en el tiempo. La propuesta microchannel proporciona una mezcla r&aacute;pida y eficiente y es f&aacute;cil de fabricar.

Ca&oacute;tica mezcla en un flujo constante de un MCP.

Microtargeted &#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x548C;&#x5F02;&#x4F4D;&#x8868;&#x8FBE;&#x751F;&#x6D3B;&#x80DA;&#x80CE;&#x57FA;&#x56E0;&#x67AA;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x4F7F;&#x7528;&#x6C14;&#x52A8;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x7BA1;&#x67AA;&#x3002;

Microtargeted gene silencing and ectopic expression in live embryos using biolistic delivery with a pneumatic capillary gun.

Gene Silencing Microtargeted et d&#x26;#39;expression ectopique dans les embryons vivants &#xE0; l&#x26;#39;aide de livraison Biolistic avec un pistolet pneumatique capillaire

Microtargeted gen-silencing und ektopische Expression in Leben Embryonen mit biolistische Lieferung mit einer pneumatischen Kapillar-Kanone.

Microtargeted silenziamento genico ed espressione ectopica in live embrioni utilizzando tali consegna con una pistola pneumatica capillare.

&#x7A7A;&#x6C17;&#x5727;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D4;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x30AC;&#x30F3;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x9283;Delivery&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x80DA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Microtargeted&#x30B8;&#x30FC;&#x30F3;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x7570;&#x6240;&#x6027;&#x767A;&#x73FE;

Microtargeted &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35; &#xD558; &#xACE0; &#xC18C;&#xC131; &#xC2DD; &#xBC30;&#xC544; biolistic &#xBC30;&#xB2EC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC555;&#xCD95; &#xACF5;&#xAE30;&#xB97C; &#xB123;&#xC740; &#xBAA8; &#xC138;&#xAD00; &#xCD1D; &#xC0B4;.

El silenciamiento g&#xE9;nico Microtargeted y la expresi&#xF3;n ect&#xF3;pica en embriones vivos mediante la entrega biol&#xED;stica con una pistola neum&#xE1;tica capilar

&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3001; &#x5236;&#x9020;&#x3001; &#x548C;&#x64CD;&#x4F5C;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x6D41; cytometers &#x57FA;&#x4E8E;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x5668;&#x4EF6;&#x7684; poly(dimethylsiloxane) &#x5355;&#x94F8;&#x6240;&#x4F5C;&#x3002;&#x7C92;&#x5B50;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CE8;&#x5165;&#x8BBE;&#x5907;&#x6D41; hydrodynamically &#x96C6;&#x4E2D;&#x5728;&#x662F;&#x6A2A;&#x5411;&#x548C;&#x5916;&#x4FA7;&#x65B9;&#x5411;&#x3001; &#x7EDF;&#x4E00;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6709;&#x53EF;&#x8C03;&#x76F4;&#x5F84;&#x548C;&#x5F62;&#x72B6;&#x3002;&#x56F4;&#x7ED5;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x7684;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5177;&#x6709;&#x8367;&#x5149;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x76F8;&#x5F53;&#x4E8E;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x5546;&#x4E1A;&#x548C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5206;&#x6790;&#x591A;&#x8FBE; 17 &#x4E07;&#x7C92;/s&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x5728;&#x5EC9;&#x4EF7;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB; cytometers &#x6216;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7EFC;&#x5408;&#x5FAE;&#x89C2;&#x5206;&#x6790;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x5728;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x5230;&#x4E9A;&#x5FAE;&#x7C73;&#x539A;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5F71;&#x50CF;&#x5177;&#x6709;&#x9AD8;&#x6570;&#x503C;&#x5B54;&#x5F84;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x76EE;&#x6807;&#x7C92;&#x5B50;&#x6D41;&#x5C42;&#x96C6;&#x4E2D;&#x7684;&#x7C92;&#x5B50;&#x6D41;&#x3002;&#x91C7;&#x53D6;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x66DD;&#x5149;&#x3001; &#x4F4E;&#x5149;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x8BBE;&#x5907;&#x653E;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x79FB;&#x52A8;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x5E73;&#x8861;&#x5E73;&#x52A8;&#x7C92;&#x5B50;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7684;&#x6D41;&#x4E2D;&#x3002;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x663E;&#x5FAE;&#x7167;&#x7247;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8FDE;&#x7EED;&#x6D41;&#x52A8;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x5E03;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x548C;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x6D41;&#x5F0F;&#x6A21;&#x538B;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x5668;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x3002;

We describe the design, fabrication, and operation of two types of flow cytometers based on microfluidic devices made of a single cast of poly(dimethylsiloxane). The stream of particles or cells injected into the devices is hydrodynamically focused in both transverse and lateral directions, has a uniform velocity, and has adjustable diameter and shape. The cytometry system built around the first microfluidic device has fluorescence detection accuracy comparable with that of a commercial flow cytometer and can analyze as many as 17 000 particles/s. This high-throughput microfluidic device could be used in inexpensive stand-alone cytometers or as a part of integrated microanalysis systems. In the second device, a stream of particles is focused to a flow layer of a submicrometer thickness that allows imaging the particles with a high numerical aperture microscope objective. To take long-exposure, low-light fluorescence images of live cells, the device is placed on a moving stage, which accurately balances the translational motion of particles in the flow. The achieved resolution is comparable to that of still micrographs. This high-resolution device could be used for analysis of morphology and fluorescence distribution in cells in continuous flow.

High-throughput and high-resolution flow cytometry in molded microfluidic devices.

Nous d&eacute;crivons la conception, la fabrication et le fonctionnement des deux types de cytom&egrave;tres issu des dispositifs microfluidiques, faites d&#39;un seul lancer de poly(dimethylsiloxane). Le flux de particules ou de cellules inject&eacute;es dans les p&eacute;riph&eacute;riques se concentre hydrodynamique dans les directions lat&eacute;rales et transversales, a une vitesse uniforme et a la forme et diam&egrave;tre r&eacute;glable. Le syst&egrave;me de cytom&eacute;trie en flux, construit autour du premier dispositif microfluidique a une pr&eacute;cision de d&eacute;tection de fluorescence comparable &agrave; celle d&#39;un cytom&egrave;tre de flux commerciaux et permet d&#39;analyser plus de 17 000 particules/s. Ce dispositif microfluidique haut d&eacute;bit pourrait servir &agrave; peu co&ucirc;teux cytom&egrave;tres de flux autonome ou dans le cadre de syst&egrave;mes int&eacute;gr&eacute;s de microanalyse. Dans le second p&eacute;riph&eacute;rique, un flux de particules se concentre &agrave; un calque de l&#39;&eacute;coulement d&#39;une &eacute;paisseur de SUBMICROMETRIQUES qui permet l&#39;imagerie les particules avec un objectif de microscope de forte ouverture num&eacute;rique. Pour prendre des photos de longue exposition, lumi&egrave;re faible fluorescence des cellules vivantes, l&#39;appareil est plac&eacute; sur une sc&egrave;ne &eacute;mouvante, qui &eacute;quilibre exactement le mouvement de translation des particules dans le flux. La r&eacute;solution atteinte est comparable &agrave; celle de toujours les micrographies. Cet appareil haute r&eacute;solution pourrait servir pour l&#39;analyse de la morphologie et la fluorescence de distribution dans les cellules en flux continu.

Haut-d&eacute;bit et haute r&eacute;solution cytom&eacute;trie en dispositifs microfluidiques moul&eacute;.

Wir beschreiben den Entwurf, die Herstellung und den Betrieb von zwei Arten von flie&szlig;en Cytometers basierend auf Microfluidic Vorrichtungen hergestellt aus einem Guss von Poly. Der Stream Partikel oder Zellen injiziert in die Ger&auml;te konzentriert sich hydrodynamisch in sowohl die quer-als auch die seitlichen Richtungen, hat eine einheitliche Geschwindigkeit und hat verstellbare Durchmesser und Form. Das Cytometry-System gebaut, um das erste Ger&auml;t der Microfluidic hat Fluoreszenz Erkennungsgenauigkeit vergleichbar mit der einer kommerziellen Flow Cytometer und mehr als 17 000 Teilchen/s analysieren kann. Dieser Hochdurchsatz Microfluidic-Ger&auml;t k&ouml;nnte in preiswerten eigenst&auml;ndigen Cytometers oder als Teil des integrierten Mikroanalyse-Systeme verwendet werden. In das zweite Ger&auml;t konzentriert sich ein Strom von Partikeln auf einer Fluss-Schicht mit einer Dicke von seiner, die erlaubt, die Partikel mit einer hohen numerischen Apertur Mikroskop Zielsetzung imaging. Um langbelichtetes, Lichtverh&auml;ltnissen Fluoreszenzbilder der lebenden Zellen zu nutzen, ist das Ger&auml;t auf einer beweglichen B&uuml;hne, das genau die translatorische Bewegung der Teilchen in den Fluss gleicht. Die erreichte Aufl&ouml;sung ist vergleichbar mit der noch Aufnahmen. Dieses hochaufl&ouml;sende Ger&auml;t k&ouml;nnte f&uuml;r die Analyse der Morphologie und Fluoreszenz-Verteilung in den Zellen in kontinuierlichen Fluss verwendet werden.

Hochdurchsatz und hochaufl&ouml;sende Durchflusszytometrie in geformten Microfluidic Vorrichtungen.

Descriviamo la progettazione, la fabbricazione e il funzionamento dei due tipi di citometri di flusso basato su dispositivi microfluidici costituiti da un singolo cast di poly(dimethylsiloxane). Il flusso di particelle o cellule iniettate in dispositivi involucro &egrave; concentrato nelle direzioni trasversale e laterale, ha una velocit&agrave; uniforme e ha forma e diametro regolabile. Il sistema di citometria costruito intorno al primo dispositivo microfluidico ha fluorescenza rilevamento precisione comparabile con quella di un citometro a flusso commerciale e possibile analizzare oltre 17 000 particelle/s. Questo dispositivo high-throughput microfluidica potrebbe essere utilizzato in poco costoso citometri stand-alone o come parte di sistemi di microanalisi integrato. Il secondo dispositivo, un flusso di particelle &egrave; concentrato in un livello di flusso di spessore submicrometriche che permette che le particelle con un obiettivo del microscopio ad alta apertura numerica di imaging. Per prendere immagini a lunga esposizione, basso-luce di fluorescenza di cellule vive, il dispositivo &egrave; posizionato su una fase commovente, che bilancia con precisione il movimento translational delle particelle nel flusso. La risoluzione raggiunta &egrave; paragonabile a quella di micrografie ancora. Questo dispositivo ad alta risoluzione potrebbe essere utilizzato per l&#39;analisi di fluorescenza e morfologia distribuzione nelle cellule in flusso continuo.

Citometria a flusso ad alta velocit&agrave; e ad alta risoluzione in dispositivi microfluidici modellata.

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Se describen el dise&ntilde;o, fabricaci&oacute;n y operaci&oacute;n de dos tipos de cit&oacute;metros de flujo basados en dispositivos microflu&iacute;dicos de un elenco &uacute;nico de poly(dimethylsiloxane). La corriente de part&iacute;culas o c&eacute;lulas inyectadas en los dispositivos hidrodin&aacute;mico se centra en direcciones tanto laterales como transversales, tiene una velocidad uniforme y tiene forma y di&aacute;metro ajustable. El sistema de citometr&iacute;a en torno al primer dispositivo microflu&iacute;dico tiene una precisi&oacute;n de detecci&oacute;n de fluorescencia comparable de un cit&oacute;metro de flujo comercial y puede analizar hasta 17 000 part&iacute;culas/s. Este dispositivo microflu&iacute;dico alto rendimiento podr&iacute;a utilizarse en barato cit&oacute;metros independiente o como parte de sistemas integrados de microan&aacute;lisis. En el segundo dispositivo, una corriente de part&iacute;culas se centra en una capa de flujo de un espesor de Submicrom&eacute;trica que permite obtener im&aacute;genes las part&iacute;culas con un objetivo de microscopio de alta apertura num&eacute;rica. Para tomar im&aacute;genes de larga exposici&oacute;n, poca luz fluorescencia de c&eacute;lulas vivas, el dispositivo se coloca en un escenario m&oacute;vil, que equilibra exactamente el movimiento traslacional de las part&iacute;culas en el flujo. La resoluci&oacute;n alcanzada es comparable a la de micrograf&iacute;as todav&iacute;a. Este dispositivo de alta resoluci&oacute;n podr&iacute;a utilizarse para el an&aacute;lisis de la distribuci&oacute;n de la morfolog&iacute;a y fluorescencia en c&eacute;lulas en flujo continuo.

Citometr&iacute;a de flujo de alto rendimiento y alta resoluci&oacute;n en dispositivos microflu&iacute;dicos moldeado.

&#x751F;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C; RNA&#xFF0C;&#x6298;&#x53E0;&#x7814;&#x7A76;&#x662F;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x751F;&#x7269;&#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x751F;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x8FC5;&#x901F;&#x53D1;&#x751F;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#x9700;&#x8981;&#x5C06;&#x89E6;&#x53D1;&#x5176;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x8FD9;&#x901A;&#x5E38;&#x901A;&#x8FC7;&#x5728;&#x6E4D;&#x6D41;&#x6405;&#x62CC;&#x7684;&#x5F88;&#x77ED;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x3002;&#x66F4;&#x52A0;&#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x9AD8;&#x6548;&#x6837;&#x672C;&#x6DF7;&#x5408;&#x5C42;&#x6D41;&#x5728;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x6837;&#x672C;&#x662F;&#x4E8C;&#x7EF4; (2D) &#x805A;&#x7126;&#x6210;&#x8584;&#x677F;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x64CD;&#x4F5C;&#x7684;&#x4E09;&#x7EF4; (3D) &#x6D41;&#x805A;&#x7126;&#x8D85;&#x5FEB;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x4F53;&#x6DF7;&#x5408;&#x5668;&#x3002;&#x5230;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x5FAE;&#x901A;&#x9053;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7A84;&#x6D41;&#x7684;&#x4E13;&#x6CE8;&#x4E8E; 3D &#x7684;&#x6837;&#x672C;&#x5206;&#x5A29;&#x5448;&#x73B0;&#x5176;&#x901F;&#x5EA6;&#x63A5;&#x8FD1;&#x5747;&#x5300;&#xFF0C;&#x548C;&#x4F7F;&#x5B83;&#x80FD;&#x591F;&#x76D1;&#x6D4B;&#x53CD;&#x5E94;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6CA1;&#x6709;&#x6392;&#x65A5;&#x4EFB;&#x4F55;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x793A;&#x4F8B;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x793A;&#x4F8B;&#x6D88;&#x8D39;&#x4F1A;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x76D1;&#x89C6;&#x6837;&#x54C1;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x7126;&#x5B89;&#x88C5;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;3D &#x805A;&#x7126;&#x9AD8;&#x7684;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x79CD;&#x57FA;&#x4E8E;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x4E13;&#x95E8;&#x7814;&#x5236;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x5141;&#x8BB8;&#x7B80;&#x6613;&#x6D4B;&#x91CF;&#x901F;&#x5EA6;&#x7684;&#x793A;&#x4F8B;&#x3002;&#x4E0A;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x4E0E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x7528;&#x4E8E;&#x7CBE;&#x786E;&#x6821;&#x51C6;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x548C;&#x53CD;&#x5E94;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8F6C;&#x6362;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7CBE;&#x786E;&#x3002;&#x8BBE;&#x5907;&#x6267;&#x884C;&#x6DF7;&#x5408;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x7684;&#x5C42;&#x6D41;&#x6405;&#x62CC;&#x5668;&#x7684; 2D &#x805A;&#x7126;&#x89C4;&#x6A21;&#x8F83; 10 &#x5FAE;&#x7C73;&#x3002;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x8D85;&#x5FEB;&#x5C42;&#x6D41;&#x6405;&#x62CC;&#x673A;&#x3001; &#x88AB;&#x52A0;&#x5DE5;&#x786C;&#x8D28;&#x6750;&#x6599;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x8BBE;&#x5907;&#x7531; poly(dimethylsiloxane)&#x3001; &#x805A;&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x7845;&#x6C27;&#x70F7;&#xFF0C;&#x5355;&#x94F8;&#x9020;&#x7684;&#x56E0;&#x800C;&#x66F4;&#x7B80;&#x5355;&#x3001; &#x66F4;&#x4FBF;&#x5B9C;&#xFF0C;&#x5236;&#x9020;&#x3002;

&#x8D85;&#x5FEB;&#x7684;&#x5FAE;&#x6D41;&#x63A7;&#x6405;&#x62CC;&#x673A;&#x4E09;&#x7EF4;&#x6D41;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x91CD;&#x70B9;&#x3002;

Studies of the kinetics of biochemical reactions, especially of folding of proteins and RNA, are important for understanding the function of biomolecules and processes in live cells. Many biochemical reactions occur rapidly and thus need to be triggered on very short time scales for their kinetics to be studied, which is often accomplished by mixing in a turbulent flow. More rapid and sample-efficient mixing is achieved in laminar flow in a microfluidic device, in which the sample is two-dimensionally (2D) focused to a thin sheet. Here we describe the design and operation of an ultrafast microfluidic mixer with three-dimensional (3D) flow focusing. The confinement of a 3D-focused sample to a narrow stream near the middle of a microchannel renders its velocity nearly uniform and makes it possible to monitor the reaction kinetics without exclusion of any parts of the sample. Hence, the sample consumption is substantially reduced and the fluorescence of the sample can be monitored without a confocal setup. Moreover, the 3D-focusing allows facile measurements of velocity of the sample with a high spatial resolution using a specially developed technique based on epi-fluorescence imaging. The data on the velocity vs. position are used to precisely calibrate the conversion between position and the reaction time, which is essential for accurate kinetic measurements. The device performs mixing on a 10 micros scale, which is comparable to that of the laminar mixers with 2D focusing. Unlike previous ultrafast laminar mixers, which were machined in hard materials, the present microfluidic device is made of a single cast of poly(dimethylsiloxane), PDMS, and is thus simpler and less expensive to manufacture.

Ultrafast microfluidic mixer with three-dimensional flow focusing for studies of biochemical kinetics.

Les &eacute;tudes de la cin&eacute;tique des r&eacute;actions biochimiques, en particulier du repliement des prot&eacute;ines et d&#39;ARN, sont importantes pour comprendre la fonction des biomol&eacute;cules et des processus dans des cellules vivantes. Beaucoup de r&eacute;actions biochimiques se produire rapidement et doivent donc &ecirc;tre d&eacute;clench&eacute; sur des &eacute;chelles de temps tr&egrave;s court pour leur cin&eacute;tique &agrave; &eacute;tudier, qui est souvent r&eacute;alis&eacute;e en m&eacute;langeant dans un &eacute;coulement turbulent. Plus rapide et plus efficace-&eacute;chantillon de m&eacute;lange est r&eacute;alis&eacute; en &eacute;coulement laminaire dans un dispositif microfluidique, &agrave; laquelle l&#39;&eacute;chantillon est en deux dimensions (2D) concentr&eacute; sur une mince feuille. Nous d&eacute;crivons ici la conception et l&#39;exploitation d&#39;un m&eacute;langeur de microfluidique ultrarapide avec mise au point de d&eacute;bit (3D) en trois dimensions. Le confinement d&#39;un &eacute;chantillon d&#39;ax&eacute;s sur la 3D dans un jet &eacute;troit pr&egrave;s du milieu d&#39;un microchannel restitue sa vitesse presque uniforme et rend possible le suivi de la cin&eacute;tique de la r&eacute;action sans exclusion de toute partie de l&#39;&eacute;chantillon. Par cons&eacute;quent, la consommation de l&#39;&eacute;chantillon est consid&eacute;rablement r&eacute;duite et la fluorescence de l&#39;&eacute;chantillon peut &ecirc;tre contr&ocirc;l&eacute;e sans une configuration confocale. De plus, la 3D-mise au point permet des mesures faciles de la vitesse de l&#39;&eacute;chantillon avec une haute r&eacute;solution spatiale en utilisant une technique sp&eacute;cialement d&eacute;velopp&eacute;e bas&eacute;e sur l&#39;imagerie &eacute;pifluorescente. Les donn&eacute;es sur la vitesse vs position sont utilis&eacute;es pour &eacute;talonner pr&eacute;cis&eacute;ment la conversion entre la position et le temps de r&eacute;action, qui est essentiel pour la pr&eacute;cision des mesures cin&eacute;tiques. L&#39;appareil effectue le m&eacute;lange sur une &eacute;chelle de 10 ordinateurs, ce qui est comparable &agrave; celle des m&eacute;langeurs laminaires avec mise au point 2D. Contrairement au pr&eacute;c&eacute;dents mitigeurs laminaires ultrarapides, qui ont &eacute;t&eacute; usin&eacute;s dans des mat&eacute;riaux durs, le pr&eacute;sent dispositif microfluidique est fait d&#39;un seul lancer de poly(dimethylsiloxane), PDMS et est donc plus simple et moins co&ucirc;teux &agrave; fabriquer.

M&eacute;langeur de microfluidique ultrarapide avec &eacute;coulement tridimensionnel mise au point des &eacute;tudes de cin&eacute;tique biochimique.

Studien &uuml;ber die Kinetik der biochemischen Reaktionen, vor allem der Faltung von Proteinen und RNA, sind wichtig f&uuml;r das Verst&auml;ndnis der Funktion von Biomolek&uuml;len und Prozessen in lebenden Zellen. Viele biochemische Reaktionen treten schnell und m&uuml;ssen daher auf sehr kurze Zeitskalen f&uuml;r ihre Kinetik untersucht werden, ausgel&ouml;st werden, was oft durch Mischen in eine turbulente Str&ouml;mung erreicht ist. Schneller und Beispiel-effizienter mischen wird erreicht im laminaren Str&ouml;mung in einem mikrofluidische Ger&auml;t, in die das Beispiel ist zweidimensional (2D) konzentriert, um eine d&uuml;nne Folie. Hier beschreiben wir die Planung und den Betrieb von ein ultraschneller Microfluidic-Mixer mit dreidimensionalen (3D) Str&ouml;mung zu konzentrieren. Der Einschlie&szlig;ung einer 3D-Schwerpunkt Probe in einen schmalen Stream in der Mitte des eine Microchannel rendert die Geschwindigkeit fast einheitliche und erm&ouml;glicht es der Reaktionskinetik ohne Ausgrenzung von Teilen der Probe zu &uuml;berwachen. Daher der Beispiel-Verbrauch ist deutlich reduziert und die Fluoreszenz der Probe ohne ein Konfokales Setup &uuml;berwacht werden kann. Au&szlig;erdem erm&ouml;glicht der 3D-konzentrieren oberfl&auml;chlichen Messungen der Geschwindigkeit der Probe mit hoher r&auml;umlicher Aufl&ouml;sung mit einer eigens entwickelte Technik, die auf der Grundlage von Epi-Fluoreszenz-Bildgebung. Daten auf die Geschwindigkeit vs. Stellung werden verwendet, um die Konvertierung zwischen Position und die Reaktionszeit genau zu kalibrieren, die f&uuml;r pr&auml;zise kinetische Messungen erforderlich ist. Das Ger&auml;t f&uuml;hrt mischen auf einer Skala von 10 Mikrofone, die vergleichbar mit der laminar Mischer mit 2D konzentriert ist. Im Gegensatz zu fr&uuml;heren ultraschneller laminar Mischer, die in harten Werkstoffen gefertigt wurden, das vorhandenen Microfluidic-Ger&auml;t besteht aus einem Guss von Poly, PDMS, und ist somit einfacher und kosteng&uuml;nstiger herzustellen.

Ultraschneller mikrofluidische Mixer mit dreidimensionalen Str&ouml;mung Schwerpunkt f&uuml;r das Studium der biochemische Kinetik.

Studi di cinetica di reazioni biochimiche, specialmente di ripiegamento di proteine e di RNA, sono importanti per comprendere la funzione di biomolecole e processi in cellule vive. Molte reazioni biochimiche si verificano rapidamente e quindi bisogno di essere attivato su scale di tempo molto breve per loro cinetica essere studiato, che spesso viene ottenuto mescolando in un flusso turbolento. Pi&ugrave; rapida ed efficiente-campione di miscelazione &egrave; ottenuto a flusso laminare in un dispositivo di microfluidica, nel quale il campione &egrave; bidimensionale (2D) incentrato su un foglio sottile. Qui descriviamo la progettazione e il funzionamento di un mixer di microfluidica ultraveloce con flusso tridimensionale (3D) di messa a fuoco. Il confinamento di un campione concentrato in 3D in un flusso stretto vicino al centro di un microchannel rende quasi uniforme la sua velocit&agrave; e permette di monitorare la cinetica di reazione senza esclusione di tutte le parti del campione. Di conseguenza, il consumo del campione viene notevolmente ridotta e la fluorescenza del campione pu&ograve; essere monitorata senza un setup confocal. Inoltre, il 3D-messa a fuoco permette facile misurazioni della velocit&agrave; del campione con un&#39;elevata risoluzione spaziale usando una tecnica appositamente sviluppata basata sull&#39;imaging epi-fluorescenza. I dati sulla velocit&agrave; vs posizione vengono utilizzati per calibrare esattamente la conversione tra posizione e del tempo di reazione, che &egrave; essenziale per misurazioni accurate e cinetiche. Il dispositivo esegue la miscelazione su una scala di 10 micros, che &egrave; paragonabile a quella dei mixer laminare con messa a fuoco 2D. A differenza della precedenti miscelatori laminari ultraveloci, che sono stati lavorati in materiali duri, il presente dispositivo microfluidico &egrave; costituito da un singolo cast di poly(dimethylsiloxane), PDMS e cos&igrave; &egrave; pi&ugrave; semplice e meno costoso da produrre.

Miscelatore microfluidica ultraveloce con flusso tridimensionale messa a fuoco per studi di cinetica di biochimica.

&#x7279;&#x306B;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068; RNA &#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x8AD6;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x306E;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x5185;&#x306E;&#x4E71;&#x6D41;&#x3092;&#x6DF7;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x77ED;&#x3044;&#x6642;&#x9593;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x6DF7;&#x5408;&#x304C;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x5C64;&#x6D41;&#x3067;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308B; 2&#x6B21;&#x5143; (2 D) &#x8584;&#x3044;&#x30B7;&#x30FC;&#x30C8;&#x306B;&#x96C6;&#x4E2D;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3068; 3&#x6B21;&#x5143; (3 D) &#x306E;&#x6D41;&#x308C;&#x3092;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x8D85;&#x9AD8;&#x901F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30DF;&#x30AD;&#x30B5;&#x30FC;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;3 D &#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x305F;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x72ED;&#x3044;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30E0; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x4E2D;&#x592E;&#x4ED8;&#x8FD1;&#x306B;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x304C;&#x307B;&#x307C;&#x5747;&#x4E00;&#x306A;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3001;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x6392;&#x9664;&#x305B;&#x305A;&#x53CD;&#x5FDC;&#x901F;&#x5EA6;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x6D88;&#x8CBB;&#x306F;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3001;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x306A;&#x3057;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;3 D &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AB;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x7C21;&#x6613;&#x6E2C;&#x5B9A; epi &#x86CD;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x7279;&#x5225;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x9AD8;&#x7A7A;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x5BFE;&#x901F;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x30AD;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3068;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x3092;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30D6;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F; 2D &#x7126;&#x70B9;&#x3068;&#x5C64;&#x6D41;&#x30DF;&#x30AD;&#x30B5;&#x30FC;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B; 10 &#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x6DF7;&#x5408;&#x3092;&#x884C;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x786C;&#x8CEA;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x52A0;&#x5DE5;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x8D85;&#x9AD8;&#x901F;&#x5C64;&#x6D41;&#x30DF;&#x30AD;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x6D41;&#x4F53;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E; pdms &#x5C40;&#x6240;&#x3001;PDMS&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x30AD;&#x30E3;&#x30B9;&#x30C8;&#x304C;&#x4F5C;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x5358;&#x7D14;&#x88FD;&#x9020;&#x306B;&#x5B89;&#x4FA1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x8D85;&#x9AD8;&#x901F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30DF;&#x30AD;&#x30B5;&#x30FC;&#x4E09;&#x6B21;&#x5143;&#x6D41;&#x308C;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x52D5;&#x614B;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD2B9;&#xD788; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; RNA, &#xC811;&#xB294;&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xC5F0;&#xAD6C; biomolecules &#xBC0F; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xB9CE;&#xC740; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB09C; &#xB958; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0; &#xD63C;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC790;&#xC8FC; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xACF5;&#xBD80;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xC544;&#xC8FC; &#xC9E7;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC2E4;&#xD589; &#xD574;&#xC57C;. &#xC5D0; &#xB958; &#xACB0;&#xD569; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xB2EC;&#xC131;&#xC740; &#xB354; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xACE0; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC0D8;&#xD50C; &#xD63C;&#xD569; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC740; 2 &#xCC28;&#xC6D0;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC587;&#xC740; &#xC2DC;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; (2D). &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC124;&#xACC4; &#xBC0F; 3 &#xCC28;&#xC6D0; (3D) &#xD750;&#xB984;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xCD08;&#xACE0;&#xC18D; &#xBBF8;&#xC138; &#xBBF9;&#xC11C;&#xC758; &#xC6B4;&#xC601;&#xC744; &#xC124;&#xBA85;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC881;&#xC740; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC;&#xC740; &#xBC84;&#xC2A4;&#xAC00; &#xC544;&#xB2CC; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xC911;&#xAC04;&#xC5D0; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; 3 &#xCC28;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xB9DE;&#xCD98; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xAC10; &#xAC70;&#xC758; &#xADE0;&#xC77C; &#xD55C; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1; &#xD558; &#xACE0; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xBC30;&#xC81C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xBC18;&#xC751; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC18C;&#xBE44;&#xAC00; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558; &#xACE0; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; confocal &#xC124;&#xCE58; &#xC5C6;&#xC774; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, 3D &#xCD08;&#xC810; &#xB192;&#xC740; &#xACF5;&#xAC04; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xD53C; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD2B9;&#xBCC4;&#xD788; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0D8;&#xD50C; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC190;&#xC26C;&#xC6B4; &#xCE21;&#xC815; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC704;&#xCE58; &#xB300; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC704;&#xCE58;&#xC640; &#xBC18;&#xC751; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; &#xBCF4;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xC790; &#xCE35; &#xB958; &#xBBF9;&#xC11C;&#xC758; 2D &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558;&#xB294; 10 &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xB208;&#xAE08;&#xC5D0; &#xD63C;&#xD569;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD558;&#xB4DC; &#xC790;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xAC00;&#xACF5; &#xD588;&#xB2E4;, &#xC774;&#xC804; &#xCD08;&#xACE0;&#xC18D; &#xCE35; &#xB958; &#xBBF9;&#xC11C;&#xC640; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xACB0;&#xD569; &#xC7A5;&#xCE58; poly(dimethylsiloxane), PDMS&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xCE90;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC740; &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0; &#xC81C;&#xC870; &#xBE44;&#xC6A9;&#xC774;.

3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xD750;&#xB984;&#xC758; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD08;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xCD08;&#xACE0;&#xC18D; &#xBBF8;&#xC138; &#xBBF9;&#xC11C;

Estudios de la cin&eacute;tica de las reacciones bioqu&iacute;micas, especialmente de plegamiento de prote&iacute;nas y ARN, son importantes para entender la funci&oacute;n de las biomol&eacute;culas y procesos en c&eacute;lulas vivas. Muchas reacciones bioqu&iacute;micas ocurren r&aacute;pidamente y as&iacute; tiene que activarse en escalas de tiempo muy corto para su cin&eacute;tica a estudiarse, que a menudo se logra mezclando en un flujo turbulento. Mezcla m&aacute;s r&aacute;pida y eficiente de muestra se realiza en cabina de flujo laminar en un dispositivo microflu&iacute;dico, en que la muestra es representan (2D) enfocado a una hoja fina. Aqu&iacute; describimos el dise&ntilde;o y operaci&oacute;n de un mezclador de microfluidos ultrarr&aacute;pida con tridimensional (3D) flow focusing. El confinamiento de una muestra centrada en 3D a un estrecho Arroyo cerca de la mitad de un MCP representa su velocidad casi uniforme y permite controlar la cin&eacute;tica de la reacci&oacute;n sin exclusi&oacute;n de cualquier parte de la muestra. Por lo tanto, se reduce dr&aacute;sticamente el consumo de muestra y la fluorescencia de la muestra puede controlarse sin una configuraci&oacute;n confocal. Por otra parte, el enfoque 3D permite f&aacute;ciles mediciones de velocidad de la muestra con una alta resoluci&oacute;n espacial usando una t&eacute;cnica especialmente desarrollada basada en la proyecci&oacute;n de imagen de epifluorescencia. Los datos sobre la velocidad vs posici&oacute;n se utilizan para calibrar precisamente la conversi&oacute;n entre la posici&oacute;n y el tiempo de reacci&oacute;n, que es esencial para las medidas exactas de la cin&eacute;ticas. El dispositivo realiza la mezcla en una escala de 10 micros, que es comparable a la de los mezcladores laminares con enfoque 2D. A diferencia de anteriores mezcladores laminares ultrarr&aacute;pidos, los cuales se mecanizan en materiales duros, el presente dispositivo microflu&iacute;dico est&aacute; conformado con un elenco &uacute;nico de poly(dimethylsiloxane), PDMS y as&iacute; es m&aacute;s sencilla y menos costosa para la fabricaci&oacute;n.

Claire Simonnet

Department of Physics

University of California San Diego - UCSD

Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech

Claire Simonnet

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Physics

University of California San Diego - UCSD

Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech

Department of Physics