Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

West Virginia University 

Diese Studie soll Objektive Modelle gegen Strahlenwirkungen auf Muskulatur bei Kindern mit Weichteil-Sarkom mit Behandlung Dosimetrie und klinische und quantitative Magnetresonanz-Bildgebung (MRI) Parameter verwendet werden k&ouml;nnen, f&uuml;hren Therapieplanung oder vorhersagen kann Nebenwirkungen entwickeln.

Ein Modell f&uuml;r quantitative Ver&auml;nderungen der Magnetresonanz-Parameter der Muskulatur bei Kindern nach therapeutischer Bestrahlung.

Questo studio mira a sviluppare modelli oggettivi di effetti delle radiazioni sulla muscolatura in bambini con sarcoma dei tessuti molli mediante dosimetria di trattamento e i parametri clinici e quantitativa risonanza magnetica (MRI) che possono essere utilizzati per guidare la pianificazione del trattamento o prevedere gli effetti collaterali.

Un modello per quantitativi cambiamenti nei parametri di risonanza magnetica muscolare nei bambini dopo un&#39;irradiazione terapeutica.

&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x3068;&#x306E;&#x8EDF;&#x90E8;&#x7D44;&#x7E54;&#x8089;&#x816B;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x7DDA;&#x91CF;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x8A08;&#x753B;&#x3092;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x526F;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x78C1;&#x6C17;&#x5171;&#x9CF4;&#x753B;&#x50CF; (MRI) &#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x7B4B;&#x5B50;&#x4F9B;&#x306E;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x5BA2;&#x89B3;&#x7684;&#x306A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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Este estudio pretende desarrollar modelos objetivos de los efectos de la radiaci&oacute;n en musculatura en ni&ntilde;os con sarcoma de tejidos blandos mediante dosimetr&iacute;a de tratamiento y los par&aacute;metros cl&iacute;nicos y cuantitativa resonancia magn&eacute;tica (MRI) que pueden usarse para guiar la planificaci&oacute;n del tratamiento o para predecir los efectos secundarios.

Un modelo para los cambios cuantitativos en los par&aacute;metros de resonancia magn&eacute;tica del m&uacute;sculo en ni&ntilde;os despu&eacute;s de la irradiaci&oacute;n terap&eacute;utica.

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This study aimed to develop objective models of radiation effects on musculature in children with soft tissue sarcoma using treatment dosimetry and clinical and quantitative magnetic resonance imaging (MRI) parameters that may be used to guide treatment planning or predict side effects.

A model for quantitative changes in the magnetic resonance parameters of muscle in children after therapeutic irradiation.

Cette &eacute;tude visait &agrave; &eacute;laborer des mod&egrave;les objectives des effets des radiations sur la musculature chez les enfants avec les sarcomes des tissus mous &agrave; l&#39;aide de dosim&eacute;trie de traitement et les param&egrave;tres cliniques et quantitative imagerie par r&eacute;sonance magn&eacute;tique (IRM) peuvent &ecirc;tre utilis&eacute;s pour guider la planification du traitement ou de pr&eacute;dire les effets secondaires.

Un mod&egrave;le pour des changements quantitatifs dans les param&egrave;tres de r&eacute;sonance magn&eacute;tique du muscle chez les enfants apr&egrave;s l&#39;irradiation th&eacute;rapeutique.

&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x6280;&#x672F;&#x6D4B;&#x91CF; Ca2 + &#x6210;&#x719F;&#x7D27;&#x51D1;&#x9AD3;&#x9798;&#x7684;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF; (CNS) &#x6D3B;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x80DE;&#x6D46;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528; X-rhod-1 &#x52A0;&#x4E0A; DiOC6(3) &#x4EA7;&#x751F;&#x660E;&#x4EAE;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x67D3;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x660E;&#x786E;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x7684;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x53D1;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x6307;&#x6807; Ca2 + &#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x89C6;&#x795E;&#x7ECF;&#x53CA;&#x80CC;&#x4FA7;&#x5217;&#x8F74;&#x7A81;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684; Ca2 + &#x8BB0;&#x8005;&#x5230;&#x80DE;&#x6D46;&#x57DF;&#x7684;&#x9AD3;&#x9798;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3001; &#x5149;&#x8C31;&#x6D4B;&#x91CF;&#x548C; Mn2 + &#x6DEC;&#x706B;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x7F3A;&#x8840;&#x589E;&#x52A0;&#x9AD3;&#x9798; X-rhod-1 &#x8367;&#x5149; &#xFF08;&#x7EA6; 30 &#x5206;&#x949F;&#x540E;&#x7684; 50%&#xFF09; &#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916; Ca2 + &#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;&#x6291;&#x5236; Na +-&#x51CF;&#x5C11;&#x7F3A;&#x8840;&#x5F15;&#x8D77;&#x589E;&#x52A0; Ca2 + &#x4F9D;&#x8D56;&#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53; (TBOA) &#x4E0E;&#x6216;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53; &#xFF08;&#x4E0E;&#x808C;&#x6C28;&#x9178;&#x548C; ALX 1393)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x9AD3;&#x9798;&#x7684; N-&#x7532;&#x57FA;-D-&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178; (NMDA) &#x53D7;&#x4F53;&#x7531;&#x53D1;&#x8868;&#x5177;&#x4F53;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE; Na + &#x52A0;&#x8F7D;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x4E0E;&#x53D7;&#x4F24;&#x7684;&#x767D;&#x8272;&#x7269;&#x8D28;&#x7684;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5E38;&#x89C4; coagonists &#x8C37;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x7518;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x6280;&#x672F;&#x4FBF;&#x5229;&#x751F;&#x6D3B;&#x9AD3;&#x9798;&#xFF0C;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

CNS &#x9AD3;&#x9798;&#x7684;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x514D;&#x8D39; Ca2 + &#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5B9E;&#x65F6;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;

Here we describe a technique for measuring changes in Ca2+ in the cytosolic domain of mature compact myelin of live axons in the central nervous system (CNS). We label the myelin sheath of optic nerve and dorsal column axons by using the Ca2+ indicator X-rhod-1 coupled with DiOC6(3) to produce bright myelin counterstaining, thereby providing unambiguous identification of the myelin sheath for analysis of two-photon excited fluorescence. We present evidence for localization of the Ca2+ reporter to the cytosolic domain of myelin, obtained by using fluorescence lifetime, spectral measurements and Mn2+ quenching. Chemical ischemia increased myelinic X-rhod-1 fluorescence (approximately 50% after 30 min) in a manner dependent on extracellular Ca2+. Inhibiting Na+-dependent glutamate transporters (with TBOA) or glycine transporters (with sarcosine and ALX-1393) reduced the ischemia-induced increase in Ca2+. We show that myelinic N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors are activated by the two conventional coagonists glutamate and glycine, which are released by specific transporters under conditions of cellular Na+ loading and depolarization in injured white matter. This new technique facilitates detailed studies of living myelin, a vital component of the mammalian CNS.

Real-time measurement of free Ca2+ changes in CNS myelin by two-photon microscopy.

Ici, nous d&eacute;crivons une technique pour mesurer les variations de Ca2 + dans le domaine cytosolique de mature my&eacute;line compact des axones direct dans le syst&egrave;me nerveux central (CNS). Nous &eacute;tiqueter la gaine de my&eacute;line du nerf optique et des axones de la colonne dorsale &agrave; l&#39;aide de l&#39;indicateur de Ca2 + X-rhod-1 coupl&eacute; avec DiOC6(3) pour produire la my&eacute;line lumineuse contre-coloration, permettant ainsi une identification sans &eacute;quivoque de la gaine de my&eacute;line pour l&#39;analyse de deux photons de fluorescence excit&eacute;. Nous pr&eacute;sentons des preuves pour la localisation du Ca2 + reporter au domaine cytosolique de la my&eacute;line, obtenu &agrave; l&#39;aide de la dur&eacute;e de vie de fluorescence, de mesures spectrales et de Mn2 + trempe. Isch&eacute;mie chimique a augment&eacute; myelinic par fluorescence X-rhod-1 (environ 50 % apr&egrave;s 30 min) d&#39;une mani&egrave;re d&eacute;pendante de Ca2 + extracellulaire. Inhibition de la Na +-transporteurs de glutamate d&eacute;pendant (avec TBOA) ou transporteurs de glycine (avec la sarcosine et ALX-1393) r&eacute;duit l&#39;augmentation induite par l&#39;isch&eacute;mie Ca2 +. Nous montrons que les r&eacute;cepteurs N-m&eacute;thyl-D-aspartate (NMDA) myelinic sont activ&eacute;s par le glutamate deux coagonists classiques et la glycine, qui sont lib&eacute;r&eacute;es par des transporteurs sp&eacute;cifiques dans des conditions de Na + cellulaire de chargement et de d&eacute;polarisation dans la substance blanche bless&eacute;e. Cette nouvelle technique facilite les &eacute;tudes d&eacute;taill&eacute;es de la vie la my&eacute;line, une composante essentielle du SNC chez les mammif&egrave;res.

Mesure en temps r&eacute;el libre Ca2 + changements dans la my&eacute;line CNS par microscopie biphotonique.

Hier beschreiben wir eine Technik zur Messung von Ver&auml;nderungen im Ca2 + in die Zytosolische Dom&auml;ne der Reifen kompaktes Myelin der live Axone in das Zentralnervensystem (ZNS). Wir beschriften die Myelinscheide der Sehnerv und dorsalen Spalte Axone mithilfe des Ca2 +-Indikators, den X-Rhod-1 wodurch eindeutigen Identifizierung der Myelinschicht f&uuml;r Analyse der zwei-Photonen aufgeregt Fluoreszenz in mit DiOC6(3) Verbindung, hell Myelin counterstaining, zu produzieren. Wir pr&auml;sentieren die Beweise f&uuml;r die Lokalisierung der Ca2 +-Reporter auf die Zytosolische Dom&auml;ne des Myelin, mithilfe von Fluoreszenz-Lebensdauer, Spektralmessungen und Mn2 + abschrecken. Chemische Isch&auml;mie erh&ouml;ht myelinic X-Rhod-1 Fluoreszenz (ca. 50 % nach 30 min) in einer Weise abh&auml;ngig extrazellul&auml;re Ca2 +. Hemmung der Na +-abh&auml;ngige Glutamat-Transporter (mit TBOA) oder Glycin-Transporter (mit Sarkosin und ALX-1393) verringert die Isch&auml;mie-induzierte Zunahme Ca2 +. Wir zeigen, dass myelinic N-Methyl-D-Aspartat (NMDA)-Rezeptoren aktiviert werden, indem die zwei konventionelle Coagonists Glutamat und Glycin, die durch spezifische Transporter unter Bedingungen der zellul&auml;ren Na + laden und Depolarisation in verletzten wei&szlig;en Substanz freigegeben werden. Diese neue Technik erm&ouml;glicht detaillierte Studien von lebenden Myelin, ein wichtiger Bestandteil des S&auml;ugetier-ZNS.

Echtzeit-Messung von freien Ca2 + Ver&auml;nderungen im CNS Myelin durch zwei-Photonen-Mikroskopie.

Qui descriviamo una tecnica per misurare i cambiamenti Ca2 + nel dominio citosolico del maturo compatto mielina degli assoni diretta nel sistema nervoso centrale (SNC). Etichettiamo la guaina mielinica del nervo ottico e assoni dorsali colonna utilizzando l&#39;indicatore di Ca2 + 1-X-rhod accoppiato con DiOC6(3) a produrre mielina brillante colorazione di contrasto, fornendo in tal modo l&#39;identificazione univoca della guaina mielinica per analisi del due-fotone di fluorescenza eccitata. Vi presentiamo le prove per la localizzazione del Ca2 + reporter al dominio citosolico della mielina, ottenuto utilizzando misure spettrali e vita di fluorescenza, Mn2 + tempra. Ischemia chimico aumentato myelinic fluorescenza X-rhod-1 (circa il 50% dopo 30 min) in un modo dipendente da Ca2 + extracellulare. Inibizione Na +-i trasportatori di glutammato dipendente (con TBOA) o i trasportatori di glicina (con sarcosina e ALX-1393) riduce l&#39;ischemia indotta aumento di Ca2 +. Mostriamo che myelinic recettori N-metil-D-aspartato (NMDA) sono attivati da due coagonists convenzionale glutammato e glicina, che vengono rilasciati da specifici trasportatori in condizioni di cellulare Na + caricamento e depolarizzazione nella sostanza bianca ferito. Questa nuova tecnica facilita studi dettagliati di mielina vivente, una componente vitale del sistema nervoso centrale dei mammiferi.

Misura in tempo reale di free Ca2 + modifiche nella mielina CNS da microscopia del due-fotone.

&#x3053;&#x3053;&#x3067; ca 2 + &#x306E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB; &#xFF08;CNS&#xFF09; &#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x30C8; &#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x624B;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8996;&#x795E;&#x7D4C;&#x3068;&#x80CC;&#x5074;&#x5217;&#x8EF8;&#x7D22;&#x306E;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x9798;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x52B1;&#x8D77;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x9AC4;&#x9798;&#x306E;&#x660E;&#x767D;&#x306A;&#x8B58;&#x5225;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092; counterstaining &#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B; DiOC6(3) &#x3068; X-&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;-1 &#x3092;&#x7D50;&#x5408; ca 2 + &#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30B1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x4ED8;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Ca 2 + &#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3001;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x8A08;&#x6E2C;&#x3001;mn 2 + &#x713C;&#x5165;&#x308C;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30BE;&#x30EB;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x865A;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916; ca 2 + &#x4F9D;&#x5B58;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067; myelinic &#x306E; X-&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;-1 &#x86CD;&#x5149; &#xFF08;&#x7D04; 30 &#x5206;&#x5F8C;&#x306E; 50 &#xFF05;&#xFF09; &#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Na + &#x963B;&#x5BB3;-&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; (TBOA) &#x3068;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; &#xFF08;&#x3068;&#x30B5;&#x30EB;&#x30B3;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068; ALX-1393 &#x5E74;&#xFF09; &#x524A;&#x6E1B;&#x306E; ca 2 + &#x865A;&#x8840;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5897;&#x52A0;&#x3002;Myelinic N-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;-D-&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178; (NMDA) &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; Na + &#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3068;&#x8CA0;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x767D;&#x8CEA;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x89E3;&#x653E;&#x3055;&#x308C;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x5F93;&#x6765; coagonists &#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x624B;&#x6CD5;&#x306F;&#x30EA;&#x30D3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7121;&#x6599;&#x306E; ca 2 + CNS &#x30DF;&#x30A8;&#x30EA;&#x30F3; 2 &#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3002;

&#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC911;&#xC559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (CNS) &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; axons&#xC758; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xC18C;&#xD615; myelin&#xC758; cytosolic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; Ca2 +&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; X-&#xB85C;&#xB4DC;-1 &#xC788;&#xC73C;&#xBBC0;&#xB85C; &#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD765;&#xBD84;&#xB41C; &#xD615;&#xAD11;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD574; myelin &#xCE7C; &#xC9D1;&#xC758; &#xBA85;&#xD655;&#xD55C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xBC1D;&#xC740; myelin counterstaining&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; Dioc6(3)&#xC640; &#xACB0;&#xD569; Ca2 + &#xD45C;&#xC2DC;&#xAE30;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBC0F; &#xC9C0; &#xC5F4; &#xCD95; &#xC0AD;&#xC758; myelin &#xCE7C; &#xC9D1; &#xB77C;&#xBCA8;. Ca2 + &#xAE30;&#xC790; &#xBBF8; &#xC5D8; &#xB9B0;, &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85;, &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xCE21;&#xC815; &#xBC0F; Mn2 + &#xD574;&#xC18C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; cytosolic &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD654;&#xD559; &#xD5C8; &#xD608; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; Ca2 + myelinic X-&#xB85C;&#xB4DC;-1 &#xD615;&#xAD11; (&#xC57D; 30 &#xBD84; &#xD6C4; 50%) &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5B5;&#xC81C; Na +-&#xC885;&#xC18D; &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; (TBOA)&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB610;&#xB294; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; (sarcosine&#xC640; ALX-1393) &#xAC10;&#xC18C;&#xC5D0; Ca2 + &#xD5C8; &#xD608; &#xC720;&#xBC1C; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; myelinic N-&#xBA54; &#xD2F8;-D-aspartate (NMDA) &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; coagonists &#xC870;&#xBBF8;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC2E0;, &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; Na + &#xB85C;&#xB4DC; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; &#xBC0F; depolarization &#xB2E4;&#xCE5C;&#xB41C; &#xBC31; &#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xD45C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xC0DD;&#xD65C; myelin, &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; CNS&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xC0C1;&#xC138;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C;.

&#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; CNS myelin&#xC5D0; &#xBB34;&#xB8CC; Ca2 + &#xBCC0;&#xACBD;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xCE21;&#xC815;.

Aqu&iacute; describimos una t&eacute;cnica para medir cambios en Ca2 + en el dominio citos&oacute;lico de mielina compacto maduro de axones vivos en sistema nervioso central (CNS). Etiquetamos la vaina de mielina del nervio &oacute;ptico y axones dorsal de la columna utilizando el indicador de Ca2 + X-rhod-1 junto con DiOC6(3) para producir mielina brillante contratinci&oacute;n, proporcionando as&iacute; la identificaci&oacute;n inequ&iacute;voca de la vaina de mielina para an&aacute;lisis de fluorescencia emocionada de dos fotones. Presentamos la evidencia para la localizaci&oacute;n del Ca2 + reportero el dominio citos&oacute;lico de la mielina, obtenido mediante el uso de por vida de fluorescencia, mediciones espectrales y Mn2 + Temple. Isquemia qu&iacute;mica aument&oacute; myelinic fluorescencia X-rhod-1 (aproximadamente 50% despu&eacute;s de 30 minutos) de una manera dependiente de Ca2 + extracelular. Inhibici&oacute;n de Na +-transportadores de glutamato dependientes (con TBOA) o transportadores de glicina (con sarcosina y ALX-1393) redujeron el aumento inducido por isquemia en Ca2 +. Mostramos que myelinic receptores N-metil-D-aspartato (NMDA) se activan por los dos coagonists convencional de glutamato y glicina, que son liberados por transportadores espec&iacute;ficos bajo condiciones de celular Na + carga y despolarizaci&oacute;n en la materia blanca lesionada. Esta nueva t&eacute;cnica facilita estudios detallados de la mielina de vida, un componente vital del CNS mam&iacute;fero.

Medici&oacute;n en tiempo real de libres Ca2 + cambios en mielina CNS por microscopia de dos fotones.

&#x6781;&#x9178;&#x6027;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x80C3; (pH 1-3) &#x7528;&#x4E8E;&#x80A0;&#x9053;&#x81F4;&#x75C5;&#x7EC6;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x3001; &#x5FD7;&#x8D3A;&#x83CC;&#x548C;&#x5E03;&#x9C81;&#x6C0F;&#x83CC;&#x538B;&#x529B;&#x6311;&#x6218;&#x3002;HdeA &#xFF08;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x6709;&#x5BB3;&#x548C;&#x6709;&#x6BD2;&#x7269;&#x8D28;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F; A&#xFF09; &#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6781;&#x4F4E; ph &#x503C;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x80A0;&#x9053;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x662F;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86; HdeA &#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x4ECE;&#x5728;&#x9AD8; pH &#x503C; &#xFF08;ph &#x503C; 3&#xFF09; &#x4EE5;&#x4E0A;&#x672A;&#x6298;&#x53E0;&#x6784;&#x8C61;&#x5728;&#x6781;&#x4F4E;&#x7684; pH &#x503C; (&#x4F4E;&#x4E8E; pH 3&#xFF09; &#x5230; well-folded &#x6784;&#x8C61;&#x8F6C;&#x53D8;&#x7684;&#x5C55;&#x54C1;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5B8C;&#x5168;&#x5728;&#x80C3; ph &#x503C;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x88AB;&#x8FDB;&#x884C;&#x5B9A;&#x6027;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x6784;&#x529F;&#x80FD;&#x4E3A; HdeA &#x51FD;&#x6570;&#x5728;&#x6B64;&#x5C55;&#x5F00;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x5B88;&#x6052; &#39;&#x4EB2;&#39; &#x529F;&#x80FD;&#x7684; HdeA&#xFF0C;&#x5373;&#x66B4;&#x9732;&#x7684;&#x5B88;&#x6052;&#x758F;&#x6C34;&#x533A;&#x57DF;&#x548C;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7D27;&#x5F20;&#x7684;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x5730;&#x533A;&#xFF0C;&#x662F;&#x5C55;&#x793A;&#x6781;&#x4F4E; ph &#x503C;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x7834;&#x574F;&#x6B64;&#x4E24;&#x4EB2;&#x6027;&#x529F;&#x80FD;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x51CF;&#x5C11; HdeA &#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8FD8;&#x5F3A;&#x70C8;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6B64;&#x9178;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684; HdeA &#x662F;&#x8010;&#x9178;&#x6027;&#x7684;&#x80A0;&#x9053;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6B64;&#x4E24;&#x4EB2;&#x7ED3;&#x6784;&#x529F;&#x80FD;&#x7684; HdeA &#x65B0;&#x7684;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x89E3;&#x91CA;&#x6B64;&#x5C55;&#x5F00; (&#x65E0;&#x5E8F;) &#x6784;&#x8C61;&#x600E;&#x4E48;&#x80FD;&#x529F;&#x80FD;&#x6D3B;&#x8DC3;&#x3002;

&#x5B88;&#x6052;&#x4E24;&#x4EB2;&#x6027;&#x529F;&#x80FD;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x5468;&#x8D28;&#x4F34;&#x4FA3; HdeA &#x652F;&#x6301;&#x5728;&#x80A0;&#x9053;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x8010;&#x9178;&#x6027;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

The extremely acidic environment of the mammalian stomach (pH 1-3) represents a stressful challenge for enteric pathogenic bacteria, including Escherichia coli, Shigella and Brucella. The hdeA (hns-dependent expression A) gene was found to be crucial for the survival of these enteric bacteria under extremely low pH conditions. We recently demonstrated that HdeA is able to exhibit chaperone-like activity exclusively within the stomach pH range by transforming from a well-folded conformation at higher pH values (above pH 3) into an unfolded conformation at extremely low pH values (below pH 3). This study was performed to characterize the action mechanisms and underlying specific structural features for HdeA to function in this unfolded conformation. In the present study, we demonstrate that the conserved 'amphiphilic' feature of HdeA, i.e. the exposure of the conserved hydrophobic region and highly charged terminal regions, is essential for exhibiting chaperone-like activity under extremely low pH conditions. Mutations that disrupt this amphiphilic feature markedly reduced the chaperone-like activity of HdeA. The results also strongly suggest that this acid-induced chaperone-like activity of HdeA is crucial for acid resistance of the enteric bacteria. Moreover, our new understanding of this amphiphilic structural feature of HdeA helps to better interpret how this unfolded (disordered) conformation could be functionally active.

Conserved amphiphilic feature is essential for periplasmic chaperone HdeA to support acid resistance in enteric bacteria.

Le milieu tr&egrave;s acide de l&#39;estomac chez les mammif&egrave;res (pH 1-3) repr&eacute;sente un d&eacute;fi stressant pour les ent&eacute;robact&eacute;ries pathog&egrave;nes, y compris Escherichia coli, Shigella et Brucella. Le g&egrave;ne hdeA (hns-d&eacute;pendante expression A) s&#39;est av&eacute;r&eacute; crucial pour la survie de ces bact&eacute;ries ent&eacute;riques dans des conditions de pH extr&ecirc;mement faible. Nous avons r&eacute;cemment d&eacute;montr&eacute; que HdeA est en mesure de pr&eacute;senter le chaperon-comme l&#39;activit&eacute; exclusivement au sein de la gamme de pH d&#39;estomac en transformant d&#39;une conformation bien &agrave; des valeurs de pH plus &eacute;lev&eacute;s (au-dessus de pH 3) dans une conformation non pli&eacute;e &agrave; des valeurs de pH tr&egrave;s bas (pH 3) inf&eacute;rieur. Cette &eacute;tude a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e afin de caract&eacute;riser les m&eacute;canismes d&#39;action et caract&eacute;ristiques structurelles sp&eacute;cifiques sous-jacentes pour HdeA &agrave; fonctionner dans cette conformation d&eacute;pli&eacute;e. Dans la pr&eacute;sente &eacute;tude, nous d&eacute;montrons que la fonctionnalit&eacute; &laquo; amphiphiles &raquo; conserv&eacute;e de HdeA, c&#39;est-&agrave;-dire l&#39;exposition de la r&eacute;gion hydrophobe conserv&eacute;e et les r&eacute;gions terminales fortement ionis&eacute;es, est essentielle pour l&#39;exposition d&#39;escorte-comme l&#39;activit&eacute; dans des conditions de pH tr&egrave;s bas. Des mutations qui perturbent cette fonctionnalit&eacute; amphiphiles nettement r&eacute;duit l&#39;activit&eacute; de semblables &agrave; ceux chaperon de HdeA. Les r&eacute;sultats sugg&egrave;rent fortement que ce chaperon-comme l&#39;activit&eacute; induite par l&#39;acide de HdeA est cruciale pour la r&eacute;sistance aux acide des bact&eacute;ries ent&eacute;riques. Par ailleurs, notre nouvelle compr&eacute;hension de cette caract&eacute;ristique structurelle amphiphiles de HdeA aide &agrave; mieux interpr&eacute;ter comment cette conformation (d&eacute;sordonn&eacute;e) d&eacute;pli&eacute;e pourrait &ecirc;tre fonctionnellement active.

Conserv&eacute;e amphiphiles caract&eacute;ristique est essentielle pour chaperon p&eacute;riplasmique HdeA pour soutenir la r&eacute;sistance acide chez les ent&eacute;robact&eacute;ries.

Das extrem saure Milieu des Magens S&auml;ugetier-(pH-Wert 1-3) ist eine stressige Herausforderung f&uuml;r enterischen pathogenen Bakterien, inklusive der Escherichia coli, Shigellen und Brucella. Das Gen HdeA (Hns-abh&auml;ngigen Ausdruck A) wurde festgestellt, dass entscheidend f&uuml;r das &Uuml;berleben dieser enterischen Bakterien unter extrem niedrigen pH-Wert Bedingungen sein. Wir vor kurzem gezeigt, dass HdeA Chaperon-wie T&auml;tigkeit ausschlie&szlig;lich in der Magen-pH-Bereich durch die Umwandlung von einer well-folded Konformation bei h&ouml;heren pH-Werten (&uuml;ber pH 3) in einem entfaltet Konformation bei extrem niedrigen pH-Werten (unter pH-Wert 3) ausstellen kann. Diese Studie wurde durchgef&uuml;hrt, um die Wirkungsmechanismen und zugrunde liegende strukturelle Besonderheiten f&uuml;r HdeA Funktion in diesem entfaltet Konformation zu charakterisieren. In der vorliegenden Studie zeigen wir, dass die konservierten &#39;AMPHIPHILE&#39;-Funktion des HdeA, d. h. die Belichtung der konservierten hydrophoben Region und hochgeladener terminal Regionen, notwendig f&uuml;r die ausstellenden Chaperon-&auml;hnliche Aktivit&auml;t unter extrem niedrigen pH-Bedingungen. Mutationen, die diese Funktion AMPHIPHILE merklich st&ouml;ren reduziert die Anstandsdame-&auml;hnliche Aktivit&auml;t des HdeA. Die Ergebnisse deuten auch stark auf diese S&auml;ure-induzierte Chaperon-&auml;hnliche Aktivit&auml;t des HdeA entscheidend f&uuml;r S&auml;urebest&auml;ndigkeit der enterischen Bakterien. Dar&uuml;ber hinaus erm&ouml;glicht unser neue Verst&auml;ndnis von diesem AMPHIPHILE Strukturmerkmal der HdeA besser zu interpretieren, wie diese entfaltet (ungeordneten) Konformation funktionell aktiv sein k&ouml;nnte.

Konservierte AMPHIPHILE Feature unbedingt periplasmatischen Anstandsdame HdeA S&auml;urewiderstand in enterischen Bakterien zu unterst&uuml;tzen.

Ambiente estremamente acido dello stomaco dei mammiferi (pH 1-3) rappresenta una sfida per i batteri patogeni enterici, tra cui Escherichia coli, Shigella e Brucella stressante. Il gene hdeA (hns-dipendente espressione A) &egrave; stato trovato per essere cruciale per la sopravvivenza di questi batteri enterici in condizioni di pH estremamente basso. Abbiamo recentemente dimostrato che HdeA &egrave; in grado di esibire chaperone-come attivit&agrave; esclusivamente all&#39;interno della gamma di pH dello stomaco trasformandosi da una conformazione well-folded a valori di pH pi&ugrave; alti (sopra pH 3) in una conformazione distesa a valori di pH estremamente basso (inferiore a pH 3). Questo studio &egrave; stato eseguito per caratterizzare i meccanismi d&#39;azione e caratteristiche strutturali specifiche sottostante per HdeA alla funzione in questa conformazione distesa. Nel presente studio, ci dimostrano che la caratteristica conservata &#39;anfifili&#39; HdeA, cio&egrave; l&#39;esposizione della regione idrofoba conservata e regioni altamente caricate terminale, &egrave; essenziale per l&#39;esposizione di attivit&agrave; chaperone-like in condizioni di pH estremamente basso. Mutazioni che interrompono questa caratteristica anfifili notevolmente ridotto l&#39;attivit&agrave; di chaperone-like di HdeA. I risultati suggeriscono fortemente che questa attivit&agrave; di chaperone-like acido-indotta di HdeA &egrave; cruciale per la resistenza agli acido dei batteri enterici. Inoltre, la nostra nuova comprensione di questa caratteristica strutturale anfifili HdeA aiuta a meglio interpretare come questa conformazione distesa (disordinata) potrebbe essere funzionalmente attiva.

Anfifili conservata funzionalit&agrave; &egrave; essenziale per periplasmico chaperone HdeA a sostegno acido resistenza nei batteri enterici.

&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x80C3; (pH 1-3) &#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x9178;&#x6027;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x306F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;, &#x8D64;&#x75E2;&#x83CC;&#x3068;&#x30D6;&#x30EB;&#x30BB;&#x30E9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8178;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x8AB2;&#x984C;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;HdeA (hns &#x4F9D;&#x5B58;&#x5F0F; A) &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x91CD;&#x8981;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8178;&#x5185;&#x7D30;&#x83CC;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E; pH &#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1; HdeA &#x304C;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x3001;&#x80C3;&#x306E; pH &#x7BC4;&#x56F2;&#x5185;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304B;&#x3089; (pH 3) &#x4E0A;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044; pH &#x5024;&#x3088;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x4F4E;&#x3044; pH &#x5024; (pH 3&#xFF09; &#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x7E70;&#x308A;&#x5E83;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5C55;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3068;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4; HdeA &#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x5C55;&#x958B;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; HdeA&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x9732;&#x51FA;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x9818;&#x57DF;&#x3068;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306B;&#x8377;&#x96FB;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30DF;&#x30CA;&#x30EB;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58; &#39;&#x4E21;&#x89AA;&#x5A92;&#x6027;&#39; &#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E; pH &#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x8868;&#x308F;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4E21;&#x89AA;&#x5A92;&#x6027;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x5909;&#x7570; HdeA &#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5F37;&#x304F;&#x3053;&#x306E;&#x9178;&#x8A98;&#x767A;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E; HdeA &#x304C;&#x8178;&#x5185;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x9178;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E; HdeA &#x306E;&#x4E21;&#x89AA;&#x5A92;&#x6027;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x7406;&#x89E3;&#x306F;&#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x3044;&#x3053;&#x306E;&#x5C55;&#x958B; (&#x4E0D;&#x898F;&#x5247;) &#x30B3;&#x30F3;&#x30DB;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x89E3;&#x91C8;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3061;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4E21;&#x89AA;&#x5A92;&#x6027;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x5206;&#x6CCC;&#x578B;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; HdeA &#x8178;&#x5185;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x9178;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC704; (pH 1-3)&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC0B0; &#xC131; &#xD658;&#xACBD;&#xC744; &#xC7A5; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;, &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;, &#xC774;&#xC9C8;&#xADE0; &#xBC0F; Brucella &#xB4F1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xAC00; &#xB9CE;&#xC740; &#xB3C4;&#xC804;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. HdeA (hns &#xC885;&#xC18D; &#xC2DD; A) &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; pH &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC7A5;&#xC758; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; HdeA &#xC218; (pH 3) &#xBBF8;&#xB9CC;&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; pH &#xAC12;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xB098; &#xB780;&#xC5D0; (pH 3) &#xC704;&#xC758; pH &#xAC12;&#xC774; &#xB192;&#xC73C;&#xBA74; well-folded &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD615; &#xD558; &#xC5EC; &#xB3C5;&#xC810;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC704; &#xC0B0;&#xB3C4; &#xBC94;&#xC704; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC5F0;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294;&#xC774; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xB098; &#xB780;&#xC5D0; &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; Hdea&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC791;&#xC5C5; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD2B9;&#xC815;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; HdeA, &#xBCF4;&#xC874; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC601;&#xC5ED;&#xACFC; &#xACE0;&#xB3C4;&#xB85C; &#xCCAD;&#xAD6C; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC601;&#xC5ED; &#xC989;, &#xB178;&#xCD9C;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#39;amphiphilic&#39; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC740; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; pH &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAC19;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; amphiphilic &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; Hdea&#xC758; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAC19;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC10;&#xC18C;. &#xACB0;&#xACFC; &#xB610;&#xD55C; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; Hdea&#xC758; &#xC0B0; &#xC720;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAC19;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774; &#xC7A5;&#xC758; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; &#xC0B0; &#xC131; &#xC800;&#xD56D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Hdea&#xC758; amphiphilic &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC774;&#xD574; &#xB354; &#xB098;&#xC740;&#xC774; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; (&#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C;) &#xB098; &#xB780; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xD574;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; amphiphilic &#xAE30;&#xB2A5; periplasmic &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; HdeA &#xC7A5;&#xC758; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0; &#xC0B0; &#xC131; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;.

El ambiente sumamente &aacute;cido del est&oacute;mago mam&iacute;fero (pH 1-3) representa un desaf&iacute;o estresante para bacterias pat&oacute;genas ent&eacute;ricas, incluyendo Escherichia coli, Shigella y Brucella. El gen hdeA (expresi&oacute;n de SNP-dependiente A) result&oacute; para ser crucial para la supervivencia de estas bacterias ent&eacute;ricas en condiciones de pH muy bajo. Recientemente, hemos demostrado que HdeA es capaz de exhibir acompa&ntilde;ante-como actividad exclusivamente dentro de la gama del pH del est&oacute;mago mediante la transformaci&oacute;n de una conformaci&oacute;n well-folded con valores de pH m&aacute;s altos (por encima de pH 3) en una conformaci&oacute;n desplegada en valores de pH muy bajo (por debajo de pH 3). Este estudio fue realizado para caracterizar los mecanismos de acci&oacute;n y caracter&iacute;sticas estructurales espec&iacute;ficas subyacentes para HdeA para funcionar en esta conformaci&oacute;n desplegada. En el presente estudio demostramos que la caracter&iacute;stica conservada &#39;anfif&iacute;licas&#39; de HdeA, es decir, la exposici&oacute;n de la regi&oacute;n hidrof&oacute;bica conservada y regiones altamente cargadas de terminales, es esencial para acompa&ntilde;ante-como actividad en condiciones de pH muy bajo. Las mutaciones que alteran esta caracter&iacute;stica anfif&iacute;licas notablemente reducen la actividad como acompa&ntilde;ante de HdeA. Los resultados tambi&eacute;n sugieren que esta actividad como acompa&ntilde;ante inducida por &aacute;cido de HdeA es crucial para la resistencia a los &aacute;cidos de las bacterias ent&eacute;ricas. Por otra parte, nuestra nueva comprensi&oacute;n de esta caracter&iacute;stica estructural anfif&iacute;licas de HdeA ayuda a interpretar mejor como pod&iacute;a ser funcionalmente activa de esta conformaci&oacute;n (desordenada) desplegada.

Conservado anfif&iacute;licas caracter&iacute;stica es esencial para acompa&ntilde;ante periplasmic HdeA para apoyar la resistencia a los &aacute;cidos en bacterias ent&eacute;ricas.

Lingqing Zhang

Sensory Neuroscience Research Center

West Virginia University

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Lingqing Zhang

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Sensory Neuroscience Research Center

West Virginia University

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Sensory Neuroscience Research Center