Inoculación in vivo de hojas: un método alternativo para evaluar la resistencia a enfermedades de clones híbridos en la cría de álamos de la enfermedad del cancro del tallo

Resumen

Proporcionamos un protocolo paso a paso para evaluar la resistencia del álamo a los patógenos del cancro del tallo utilizando un método de inoculación de hojas in vivo . Este método es especialmente adecuado para la evaluación a gran escala de la resistencia a la enfermedad del cancro de Cytospora chrysosperma y Botryosphaeria dothidea en la progenie de cría de álamos en China.

Resumen

Enfermedades del cancro del tallo causadas por el patógeno Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr.) y Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. Son las dos principales enfermedades forestales en las plantaciones de álamos en China, que a veces pueden destruir todas las plántulas de álamo o dañar gravemente los bosques maduros de álamos. El mejoramiento híbrido es el método más directo y eficiente para controlar y manejar las enfermedades de los árboles. Sin embargo, la evaluación de la resistencia a las enfermedades o la selección de clones resistentes a las enfermedades basados en la inoculación in vitro del tallo es ineficiente, requiere mucho tiempo y es costosa, lo que limita el desarrollo de la cría híbrida de la enfermedad del cancro del tallo del álamo. En este estudio, propusimos un método alternativo para evaluar la resistencia de las enfermedades a los patógenos del cancro del tallo a través de la inoculación de hojas in vivo . Los materiales de prueba utilizados en este método pueden estar en árboles jóvenes de álamo de 1 año o en las ramas anuales de álamos perennes en el invernadero o en el campo. El paso crítico de este método alternativo es la selección de las hojas inoculantes: las 5-7^{hojas recién} maduras podrían ser las más adecuadas. El segundo paso crítico del método de inoculación de hojas es hacer heridas en las hojas de las plantas a través de perforaciones con agujas, proporcionando suficientes lesiones para medir la gravedad de la enfermedad. Para el número adecuado de hojas producidas en la etapa temprana de la cría del álamo, esta inoculación in vivo de la hoja contribuye a la detección rápida, precisa y a gran escala de los clones de álamo resistentes a enfermedades para los patógenos del cancro. Además, este método de inoculación de hojas también servirá como un método eficiente para detectar patotipos de patógenos de la enfermedad del cancro del tallo C. chrysosperma, B. dothidea u otros patógenos del cancro del tallo del álamo.

Introducción

Enfermedades del cancro del tallo del álamo, causadas principalmente por dos patógenos necrótrofos, Cytospora chrysosperma (Pers.) Fr. y Botryosphaeria dothidea (Moug. ex Fr.) Ces. De Not., amenazan severamente el desarrollo y la supervivencia de las plantaciones de álamos en el noreste, norte y noroeste (tres nortes) de China. El mejoramiento híbrido es el método más directo y eficiente para controlar y manejar las enfermedades de los árboles; Sin embargo, en comparación con los avances en la cría de clones híbridos de álamo de alto rendimiento, de crecimiento rápido u otros clones híbridos, la investigación sobre l....

Protocolo

1. Cultivo de hongos para el patógeno del cancro

1. Prepare el agar papa dextrosa (PDA; extracción de papa 6,0 g, dextrosa 20,0 g, agar 20,0 g) medio de cultivo para cepas fúngicas; disolver los materiales anteriores en agua hasta 1000 mL, disolver completamente el medio a 100 °C durante 10 min.
2. Vierta el medio PDA en tubos de 25 mL (cada uno contiene 15.0 mL); esterilizar todos los tubos a 121,1 °C durante 30 min. Vierta el medio en placas de cultivo (9,0 cm de diámetro) y enfríe las placas a temperatura ambiente (RT).
3. Cortar el micelio del patógeno fúngico, que se cultiva en medio PDA a 28....

Discusión

Este protocolo proporciona un método de inoculación rápido y eficiente para los patógenos de resistencia al cancro del álamo, que es adecuado para los campos de investigación que requieren el cribado de resistencia a enfermedades a gran escala, como el mejoramiento híbrido de la resistencia al cancro del álamo y el cribado de patogenicidad de los patógenos del cancro del tallo.

El primer punto clave del método es evaluar la resistencia a las enferme.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Aluminum foil	Biosharp	BS-QT-027B
C. chrysosperma isolate	China Forestry Culture Collection Center	CFCC86775	Separation and preservation by our laboratory
Cytospora chrysosperma	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry	NCBI accession number: MK994101 for rRNA-ITS and MN025273 for EF1α gene   CGMCC number:40575	Separation and preservation by our laboratory
Epson Perfection V370 Photo	Epson	V370	Scanner; Scan the leaves into image
PDA (Potato Dextrose Agar)	Solarbio	P8931	Provide nutrition for fungal growth
PE plastic film			To fix fungi on the leaves
Populus alba var. Pyramidalis	Plant Physiology Laboratory, Institute of Forestry New Technology, Chinese Academy of Forestry		Cultivated by our laboratory
SPSS	IBM		Data analysis software
Thermostatic incubator	Shanghai Kuntian Laboratory Instrument Co., Ltd	KTD-6000	Provide an environment for fungal growth
Tough TG-6 camera	OLYMPUS		To take photos of diseased leaves