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Purificación de un extracto lípido Total con cromatografía de columna

Visión general

Fuente: Laboratorio de Jeff Salacup - Universidad de Massachusetts Amherst

El producto de una extracción con disolvente orgánico, un extracto total de lípidos (TLE), es a menudo una mezcla compleja de cientos, si no miles, de diferentes compuestos. El investigador a menudo solamente está interesado en un puñado de compuestos. Los compuestos de interés pueden pertenecer a una de varias clases de compuestos, tales como alcanos, cetonas, alcoholes o ácidos (figura 1), y puede ser útil eliminar las clases compuestas que no pertenece con el fin de obtener una visión más clara de los compuestos que le interesa. Por ejemplo, un ELT puede contener compuestos de 1.000, pero la Uk'proxy de temperatura de la superficie de mar de37 se basa en sólo dos compuestos (alkenones) y el proxy de TEX86 mar temperatura superficial se basa en sólo cuatro (thioureas glicerol glicerol tetraethers). Que le tocaría el investigador para eliminar muchos de los compuestos que no les interesa. Esto hace que el análisis instrumental de los compuestos de interés (alkenones o GDGTs) menos propensos a ser complicada por otros compuestos extraños.

En otros casos, una técnica de purificación de aguas arriba puede han producido compuestos que desea ahora eliminar de la muestra, tales como la producción de ácidos carboxílicos durante la saponificación en nuestro video anterior. En ambos de estos casos es muy útil la técnica de purificación denominada cromatografía en columna.

Figure 1
Figura 1. Geoquímicamente importantes grupos funcionales. De Killops y Killops1.

Procedimiento

1. configuración y preparación de materiales

  1. Obtener un total de lípidos extracto (TLE) utilizando un método de extracción por solvente (sonicación, Soxhlet o extracción acelerada de disolvente (ASE)).
  2. Se reúnen las siguientes: combustión de borosilicato de vidrio pipetas y bulbos, gel de sílice, hexano, diclorometano (DCM) y el metanol.
    1. Estos materiales pueden adquirirse en cualquier tienda química. Los reactivos deben ser puro y libre de hidrocarburos.
  3. También obt

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Resultados

Esta técnica de purificación produce tres frascos diferentes, cada uno con una diferente clase compuesto o grupo de clases de compuestos. Se ha reducido enormemente la complejidad de cualquier muestra para su análisis en un instrumento. Este proceso también elimina compuestos, como ácidos que se producen durante una saponificación, que realmente puede pegarse a las partes de los instrumentos, debido a su baja volatilidad, que disminuiría su exactitud, precisión y vida útil.

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Aplicación y resumen

Alkenones y isoprenoidal GDGTs son dos componentes muy comunes de los sedimentos marinos y pueden encontrarse a través de los océanos del mundo. Alkenones que se detectan cada vez más en los sedimentos del lago, aunque los organismos responsables de su producción son diferentes que en el océano y, por tanto, la relación entre la Uk'37 proporción y temperatura del agua (calibración) es diferente del océano e incluso entre distintos lagos. Isoprenoidal GDGTs se encuentran en algunos grandes l...

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Referencias

Killops, S. and Killops, V. Introduction to Organic Geochemistry. Blackwell Publishing, Malden, MA (2005).

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0:00

Overview

1:05

Principles of Column Chromatography

3:06

Silica Gel Column and Sample Preparation

4:30

Silica Gel Column Chromatography

6:22

Applications

8:52

Summary

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