1. carga de la resina

1. A un buque de síntesis de péptidos de 100mL, agregar 2-chlorotrityl resina del cloruro (CTC) (1,1 mmol/g, 0,360 g, 0.400 mmol). Añadir 20 mL DMF y permitir que se hinchan durante 30 min bajo N_2.
2. Escurrir los granos bajo vacío y añadir 10 mL DMF.
3. Añadir 500 mg Fmoc-Ala-OH (1.60 mmol) y 2.5 mL i -Pr₂EtN y mezcla de N₂ por 15 min.
4. Drene el disolvente al vacío y repetir la carga con Fmoc-Ala-OH durante 15 minutos.
5. Drene el disolvente al vacío y lavar los granos con 10 mL DMFunder N₂y drenaje al vacío 3 x.

2. la desprotección del grupo Fmoc

1. Agregar 10 mL 20% 4-methylpiperidine en DMF y revolver los granos bajo N₂ durante 15 minutos.
2. Drene el disolvente al vacío y repita la desprotección.
3. Lavar los granos con 10 mL DMF bajo N₂ y drenaje al vacío 3 x.

3. realizar la prueba de Kaiser

1. Realizar la prueba de Kaiser añadiendo 1-2 gotas de solución A (0,5 mL 0,01 M de KCN, piridina 24,5 mL), solución B (1 g ninhidrina, 20 mL n-butanol) y la solución C (20 g fenol, 10 mL n-butanol) cada uno en dos tubos de ensayo. Un tubo de ensayo será el control mientras que el otro controlará la reacción.
2. Añadir unos granos de la resina del recipiente de reacción para tubo de ensayo de reacción y calienta los dos tubos de ensayo a 110 ° C.
3. Si la desprotección es completa, el contenido de la probeta convertirá un color azul/púrpura oscuro. Si la desprotección es incompleto o fallido, la solución seguirá siendo amarillo. Comparar el tubo de ensayo de reacción con el tubo de ensayo de control.

4. acoplamiento de los bloques de construcción de la siguiente

1. Drene el disolvente al vacío.
2. Lavar los granos con 10 mL de N-metil-2-pirrolidona en N₂ y drenaje el disolvente al vacío.
3. Para comenzar el siguiente acoplamiento, añadir 10 mL NMP, 620 mgFmoc-Phe-OH (1,6 mmol), 610 mg HBTU (1,6 mmol) y 2.5 mLi -Pr₂EtN y permitir que la resina a burbujear bajo N₂ durante 30 minutos.
4. Drene el disolvente al vacío.
5. Lavar los granos con 10 mL DMF bajo N₂ y drenaje al vacío 3 x.
6. Realizar el Kaiser prueba (ver pasos 3.1-3.3) para buscar la terminación del acoplamiento. La solución en el tubo de ensayo y los granos deben ser amarillo.

5. hendiendo el péptido de la resina

1. Hender el restante grupo Fmoc pasos 2.1-2.3.
2. Después de que el solvente se escurre bajo vacío, añadir 40 mL de solución de escote (95% TFA, 2.5% H₂O, consejos de 2,5%) a la resina y burbujas bajo N₂ 3 h.
3. Coloque un nuevo recipiente en el sintetizador de péptidos y drenar la solución de theTFA que contiene el péptido deseado bajo vacío en el matraz nuevo.

6. precipitación y I solation del péptido

1. Separar la solución TFA en 4 frascos cónicos y añadir 25 mL de éter de frío (° C −20) a cada vial para precipitar el péptido.
2. Los frascos de la centrífuga (3.000 rpm, 0-4 ° C) durante 20 min, decantar la solución restante de TFA y éter Frascos cónicos y concentrar el precipitado del péptido para permitirse el dipéptido deseado como un sólido blanco.