Para comenzar el análisis farmacológico de Arabidopsis thaliana F1 de dos colores, diseccione y retire los cotiledones de plántulas transgénicas de siete días de edad. Agregue 500 microlitros de una solución de Brefeldina A o BFA de 30 micromolares en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros. Sumerja las plántulas disecadas en él.
Conecte firmemente una jeringa de 10 mililitros al tubo de microcentrífuga y aplique una aspiradora durante un minuto. Retire la jeringa antes de incubar la muestra en la solución durante 30 minutos antes de la toma de imágenes. A continuación, sumerja la plántula diseccionada de siete días en wortmannina de 25 milimolares.
Aplique el vacío durante un minuto antes de incubar la muestra sumergida durante 30 minutos. El examen de las rutas de tráfico de ERL-1 en plantas transgénicas mostró que 30 minutos de exposición a la solución de Brefeldin A dieron lugar a la detección de ERL-1-YFP en grandes compartimentos conocidos como cuerpos BFA. Indicó que Brefeldin A podría bloquear el tráfico de ERL-1, lo que sugiere el reciclaje o la endocitosis de ERL-1.
Cuando los transgénicos fueron tratados con wortmannina durante 30 minutos, las estructuras en forma de anillo llamadas cuerpos WM fueron resaltadas por ERL-1-YFP. Mostró que ERL-1-YFP fue transportado a cuerpos multivesiculares, lo que indica que ERL-1 siguió la ruta a las vacuolas para su degradación.
