Comience utilizando una técnica de extensión con tijeras quirúrgicas para exponer cuidadosamente las vías respiratorias del pulmón de cerdo adquirido. Primero, localice la vía aérea más grande que generalmente tiene un diámetro de dos a cuatro centímetros. Luego use un par de fórceps para palpar a lo largo de las vías respiratorias hasta una profundidad de una pulgada.
Finalmente, sostenga las tijeras quirúrgicas paralelas a las vías respiratorias e inserte las puntas cerradas en el tejido que rodea la vía aérea invisible. Abra suavemente las tijeras quirúrgicas para separar la membrana circundante. Saque las tijeras y absténgase de cortar cualquier pañuelo.
Repita este proceso de forma intermitente para continuar exponiendo las vías respiratorias. Usando las tijeras quirúrgicas, corte las vías respiratorias en los puntos de ramificación y diseccione a lo largo de cualquiera de las ramas de forma independiente. Cortar regiones de la vía aérea una vez que confíe en que los extremos intactos permanecerán identificables y fácilmente localizados.
Coloque las regiones cortadas de la vía aérea en el tubo correspondiente, con el tamaño de las regiones cortadas que varían entre uno y cinco centímetros de longitud, y el ancho varía según la ubicación relativa a lo largo del árbol de las vías respiratorias. Aplique presión suavemente a la vasculatura para exponerla y tire lentamente de ella lejos de las vías respiratorias. Permita que la vasculatura se estire ligeramente y use tijeras quirúrgicas para separarla aún más de las vías respiratorias.
Evite aplicar demasiada presión, ya que puede rasgar la vasculatura. Una vez expuesto el punto de ramificación en el árbol vascular, inserte las puntas cerradas de las tijeras quirúrgicas justo debajo del punto de ramificación y entre las dos regiones de vasculatura correspondientes. Luego, abra lentamente las tijeras para separar los tejidos subyacentes.
Use intermitentemente un par de pinzas para eliminar el tejido separado y cualquier otro tejido que rodee directamente la vasculatura. Corte la vasculatura en un punto de ramificación cuando cubra regiones de las vías respiratorias o se vuelva engorrosa para cualquier paso de disección. Posteriormente, diseccionar a lo largo de cualquiera de las ramas de forma independiente.
Confirme que los dos extremos de la vasculatura siguen siendo identificables y fácilmente localizados para una mayor disección. Luego corte las regiones de la vasculatura. Para extirpar el tejido alveolar, localice una región del tejido que no esté cerca de las vías respiratorias o la vasculatura.
Pellizque una pequeña región del tejido que parece estar desprovista de vasculatura o vías respiratorias, y rasgue el tejido pellizcado del pulmón. El tejido alveolar está ampliamente presente en el pulmón y debe extirparse durante toda la disección. Observe la región de tejido extirpada y confirme si es o no tejido alveolar.
Este procedimiento se aplicó a un modelo de pulmón humano. Un análisis de espectrometría de masas de los tejidos extirpados indicó que la composición de la ECM varía entre las regiones individuales de los pulmones descelularizados, incluida la ECM pulmonar completa, la ECM enriquecida con alveolares, la ECM de las vías respiratorias y la ECM de vasculatura. En los pulmones descelularizados obtenidos de pacientes sin antecedentes de enfermedad pulmonar, las proteínas asociadas a la membrana basal aumentaron en la ECM enriquecida con alveolares.
Al mismo tiempo, la ECM de las vías respiratorias se enriqueció en la proteína ECM asociada al cartílago, como el agrecano. La ECM de vasculatura se mejoró con fibronectina y otras proteínas ECM solubles asociadas con los vasos sanguíneos.
