Para este estudio, use saltaplantas marrones pequeños o SBPH criados en plántulas de arroz. Una vez que los cultivos estén listos, coloque los SBPH cultivados en un tubo de centrífuga y colóquelos en un baño de hielo durante 10 a 30 minutos. Luego coloque un SBPH congelado en un portaobjetos de vidrio bajo un microscopio estereoscópico con el abdomen hacia arriba y ajuste el enfoque en sus seis patas.
Prepara dos pinzas de alta precisión con puntas ultrafinas. Usando una pinza, presione el cuerpo del insecto para mantenerlo en su lugar y tire cuidadosamente de una pierna con la otra pinza. Luego presione suavemente el pecho del insecto, permitiendo que la hemolinfa fluya a través de la herida.
Para recolectar hemolinfa, prepare una micropipeta colocando un tubo capilar de microlitros en el bulbo de pipeta. Coloque el tubo capilar cerca de la herida del insecto, sosteniendo el bulbo de pipeta de micropipeta. Toque la punta capilar con la hemolinfa que exuda y recógela.
Una vez que el tubo capilar alcance la línea de escala deseada, bloquee ligeramente el pequeño orificio en el bulbo de pipeta con el dedo para detener el proceso de absorción. Luego descargue la hemolinfa recolectada en 100 microlitros de tampón PBS. La precisión de la recolección de hemolinfa se confirmó a través de SDS-PAGE, que mostró un contenido de proteína similar en las tres muestras de hemolinfa, recolectadas por separado.
Para la larva, la concentración total de proteína fue de aproximadamente 3,7 miligramos por mililitro. En SBPH adultos femeninos y masculinos, las concentraciones de proteína fueron de aproximadamente 3.5 y 3.6 miligramos por mililitro respectivamente, sin mostrar diferencias significativas entre las tres muestras. La hemolinfa larvaria mostró hemocitos de dos a 20 nanómetros de tamaño.
Además, la concentración celular fue comparable en las tres muestras de hemolinfa recogidas.
