Para comenzar, parasitar alrededor de 40 pupas de Lucilia sericata en avispas Nasonia macho y hembra adultas emergentes apareadas durante 1,5 días. Dentro de las 12 a 24 horas posteriores a la parasitación, abra cuidadosamente un extremo de la cáscara de la pupa con una aguja de disección estéril. Sostenga el otro extremo de la cáscara y localice el embrión de avispa.
Luego transfiera el embrión a un filtro de células estéril humedecido con PBS. Una vez que se hayan transferido de 20 a 30 embriones, lávelos con 1, 000 microlitros de solución de hipoclorito de sodio al 10% seguido de PBS estéril y etanol al 70%. Finalmente, lávelos tres veces con PBS estéril.
A continuación, coloque una lámina de malla de polipropileno prehumedecida con PBS en una placa de 24 pocillos. Usando un cepillo pequeño esterilizado, transfiera suavemente los embriones de avispa del colador celular a la lámina de malla de polipropileno. Para la cría de avispas, agregue 50 microlitros de NRM preparado a cada pocillo con una hoja.
Luego agregue un mililitro de agua estéril entre cada pozo para mantener un ambiente húmedo para el crecimiento. Al día siguiente, transfiera la malla de polipropileno que contiene la larva de un pozo a otro con pinzas desinfectadas con alcohol y agregue 50 microlitros de NRM equilibrado. Después de nueve a 11 días de alimentación, más del 80% de la larva debe convertirse en pupas blancas o amarillas.
Luego transfiera la malla a una placa de pozo limpio. En el presente estudio, la tasa de supervivencia de las avispas libres de gérmenes desde la larva hasta las pupas mejoró significativamente en comparación con la cría de avispas libres de gérmenes con NRM versión tres. Además, no hubo diferencia en el período de generación entre las avispas libres de gérmenes y las criadas convencionalmente.
