Microfluidic Shear Apparatus Setup for Single-Cell Fluid Shear Assay

Comience el protocolo preparando el ensayo de cizallamiento de medios de flujo viscoso. Para hacerlo, precaliente el medio de cultivo base durante unos 10 a 20 minutos a 60 a 70 grados centígrados con un revuelto magnético o una placa caliente. Mientras agita continuamente el medio, agregue suavemente metilcelulosa para ayudar a que las partículas de metilcelulosa se dispersen rápidamente sin coagularse.

Permita que este proceso continúe durante aproximadamente 15 a 24 horas para garantizar una mezcla clara y homogénea de medios y celulosa. Para configurar el aparato de corte, conecte una junta de goma a la trayectoria de flujo para sujetar la conexión entre la cámara de flujo y la placa de Petri, y garantizar un flujo uniforme controlado de celdas individuales. La junta de goma viene en diferentes tamaños dependiendo del perfil de flujo deseado y el área de observación.

A continuación, configure el sistema de ensayo de cizallamiento que comprende jeringas duales de 60 o 100 mililitros conectadas a una bomba de jeringa programable para la infusión y extracción de los medios de cultivo viscosos. Llene una jeringa con el medio de flujo viscoso preparado y conecte la jeringa llena a su ubicación respectiva en la bomba de jeringa. Luego, conecte una jeringa vacía a la otra ubicación de la jeringa en la bomba de la jeringa.

Usando conectores de tubería y tubería de 1/16 de pulgada, conecte ambas jeringas a la cámara de flujo. Programe la bomba para infundir y extraer un cierto volumen de líquido a una velocidad designada, y seleccione las jeringas correspondientes. En la pantalla se muestra un programa de ejemplo.

Aspire los medios de cultivo celular de la placa de Petri para prepararse para el cizallamiento. A continuación, inserte y fije la cámara de flujo con la junta de goma en la placa de Petri que contiene las células adjuntas. Coloque la cámara de flujo microfluídico instalada con las células en el plato en un microscopio invertido conectado a un monitor de visualización.

La configuración ahora está lista para aplicar tensión de cizallamiento del fluido en una sola celda y monitorear ópticamente la deformación celular resultante.