Para comenzar, tome una placa de 96 pocillos que contiene electrodos de conexión de dedos interdigitados que cubren un área de aproximadamente cuatro milímetros cuadrados. Coloque la placa en la estación de pozos y haga clic en el botón de configuración. Si los pozos están conectados correctamente, aparecerán lecturas verdes.
Todos los pozos no conectados se identificarán en rojo. Agregue 200 microlitros de medio a cada pocillo que se utilice y luego coloque la placa en la estación de detección de impedancia del sustrato de la celda eléctrica o ECIS. Para estabilizar los pozos y prepararlos para los experimentos, haga clic en configuración, seguido de verificación y, a continuación, haga clic en estabilizar.
Después de 40 minutos, retire la placa de la estación y retire el medio de cada pocillo. Siembre las células B2B a una densidad de 40.000 células por mililitro en los pocillos que contienen las células y coloque la placa en la estación ECIS de la incubadora. A continuación, haga clic en comprobar para asegurarse de que todos los electrodos sean leídos por los sensores de la estación.
Seleccione el tiempo de frecuencia múltiple para medir cada electrodo en siete frecuencias diferentes. Haga clic en iniciar y deje que se ejecute durante 24 horas para que las células puedan formar una monocapa confluente. La lectura de cada pozo se muestra en un color diferente.
Después de aproximadamente 24 horas, los pocillos que contienen celdas mostrarán una mayor resistencia en el monitor, lo que indica la unión de las celdas a los electrodos. Presione pausa para interrumpir la recopilación de datos. Por ejemplo, para cambios de medios, edición de componentes, etc.
Exponga las nanopartículas ZIF8 al pocillo en blanco y a los pocillos celulares con un volumen de 100 microlitros por pocillo, coloque la placa en la estación y haga clic en verificar nuevamente para asegurarse de que los sensores estén leyendo todos los electrodos. Haga clic en reanudar para reanudar los experimentos después de la pausa elegida. Después de la recopilación de datos, haga clic en finalizar para guardar los datos como un archivo de hoja de cálculo.
Para obtener los parámetros alfa, haga clic en el modelo y, en la pantalla emergente, haga clic en solo el pozo de medios, luego seleccione el pozo que solo tiene medios. Haga clic en establecer referencia para la evaluación de datos y seleccione la referencia relacionada con el experimento de control. Haga clic en buscar para iniciar el accesorio de referencia.
Seleccione establecer y, a continuación, ajuste el rango T para procesar los datos relativos a la referencia seleccionada. Para evaluar la conexión de celda, seleccione alfa. Finalmente, una vez que el sistema finalice el análisis, haga clic en guardar RBA y guarde los parámetros como un archivo de hoja de cálculo.
El análisis del comportamiento de la célula tras la exposición a los MOF ZIF8 se realizó mediante la detección de impedancia del sustrato eléctrico de la célula. Las imágenes mostraron cambios en las interacciones entre el sustrato celular y los cambios dependen del tiempo de exposición y de la dosis que se utilice.
